分子生物學(xué)檢驗技術(shù)核酸擴(kuò)增技術(shù)生物化學(xué)檢驗教研室學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握：PCR技術(shù)的基本原理及反應(yīng)體系；及PCR產(chǎn)物電泳檢測方法。熟悉：PCR常見問題及體系優(yōu)化；實時熒光定量RCR的原理。了解：PCR衍生技術(shù)；產(chǎn)物的其他檢測方法；PCR方法標(biāo)準(zhǔn)化。目錄聚合酶鏈反應(yīng)01PCR衍生技術(shù)02CONTENTS分子生物學(xué)檢驗技術(shù)CONTENTSPCR檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用03PCR檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用PART03PCR檢測技術(shù)的臨床應(yīng)用01感染性疾病的診斷。02母嬰傳播的控制與觀察。03遺傳疾病的診斷。04腫瘤的診斷。05法醫(yī)學(xué)鑒定。06早期診斷。07病情評估和預(yù)后判斷。08抗病毒藥物療效的觀察、指導(dǎo)。09新藥驗證。一、感染性疾病病原體含量與病情之間的關(guān)系。01病原體含量與用藥之間的關(guān)系。02藥物及療法的研究與開發(fā)。03新的病原體分子診斷標(biāo)準(zhǔn)。04新的愈后指標(biāo)。05傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預(yù)測與預(yù)防。06HBV-DNA定量檢測的臨床意義01“兩對半”：機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；FQ-PCR：檢測的是HBV本身的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。02“攜帶者”、“大三陽”、“小三陽”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。HBV-DNA定量與HBV復(fù)制水平及傳染性。HBV-DNA定量與乙肝藥物療效。a.專家提出<103copy/mL做為陰性或臨床治愈標(biāo)準(zhǔn);b.HBV-DNA定量分析與干擾素治療（前、中、后）;c.拉咪呋啶。HBV-DNA定量與預(yù)后。a.含量高者急性肝炎患者易慢性化;b.癌變的幾率明顯高于含量低者。一、感染性疾病常見性傳播疾病病原體淋球菌（NGH）沙眼衣原體（CT）解脲脲原體（UU）梅毒螺旋體（TP）單純庖疹病毒（HSV）乳頭瘤病毒（HPV）人類免疫缺陷病毒（HIV）淋球菌感染與致病人是淋球菌的唯一宿主。發(fā)病率最高，在所STD疾病中，高達(dá)60%左右。發(fā)病趨勢：a.男性多于女性。b.城市走向農(nóng)村;c.高收入階層向低收入階層擴(kuò)展。人對淋球菌感染無天然抵抗力，免疫不持久，再感染和慢性患者普遍存在。如母親為淋病患者，嬰兒出生時易患上淋球菌性結(jié)膜炎。沙眼衣原體感染與致病01嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生。02不僅可致眼部感染、肺部感染、也是STD的主要病原體。03近年來在歐美等國，沙眼衣原體的感染率和危害性已超過淋球菌而居STD之首。04在我國，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。05泌尿生殖道感染，妨礙妊娠。06盆腔感染，可致生殖能力損害。解脲脲原體感染與致病合成尿素酶，分解尿素。在非淋球菌性尿道炎其感染率僅次于衣原體感染，居第二位。流產(chǎn)超過4次以上者，檢出率高達(dá)80%。有30-40%男性尿道炎是由感染UU所致。與男性不育相關(guān)。男性不育患者精液中，脲原體檢出率高達(dá)66.6％。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動力下降而升高。熒光定量PCR診斷NGH/CT/UU的意義01非培養(yǎng)或形態(tài)學(xué)檢查的診斷技術(shù)，快速、特異、敏感。02對無癥狀或癥狀輕者，可以早期確診。03對NGH、CT、UU等混合感染者，診斷和鑒別診斷。04指導(dǎo)用藥、考核療效。病毒實驗室檢測類型---病毒實驗室診斷方法方法檢測核酸檢測病毒檢測抗體/抗原ELISA/HI/PA蛋白印跡中和試驗基因芯片病毒分離ELISA電鏡免疫熒光RT-PCR實時熒光定量PCR二、腫瘤癌胚抗原、同工酶、抗體、激素、細(xì)胞因子、受體等。腫瘤標(biāo)志物包括癌基因抗癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因及轉(zhuǎn)移抑制基因。腫瘤相