ICS11.040.30CCSC30T/ZBAFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXX重組Fc受體蛋白技術應用規范NormsfortheapplicationofrecombinantFcreceptorproteintechnology（征求意見稿）FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施北京發明協會發布XX/TXXXXX—XXXXI重組Fc受體蛋白技術應用規范范圍本文本規定了重組Fc受體蛋白技術所涉及的相關技術及其應用規范。本文本適用于生物藥物（生物制藥、生命科學基礎研究、體外診斷、mRNA疫苗等）各業務場景。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。YY/T1888-2023《重組人源化膠原蛋白》YYT1849-2022重組膠原蛋白GB/T1.1-2000標準化工作導則第1部分：標準的結構和表述規則ASTMF2131-21使用W-20小鼠基質細胞系的重組人骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-02(2012)使用W-20小鼠基質細胞系的重組人骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）的生物活性體外的生物學活性的標準測試方法ASTMF2131-02(2007)用W-20小鼠基質細胞系測定重組人骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-02(2007)e1用W-20小鼠基質細胞系測定重組人骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-02用W-20小鼠基質細胞系測定重組人骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-2002(2007)e1使用W-20老鼠基質細胞系的重組體人骨形態形成蛋白-2(rhBMP-2)在實驗室條件下的生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-2002(2012)使用W-20老鼠基質細胞系測定重組人骨形態發生蛋白-2(rhBMP-2)體外生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-2002使用W-20老鼠基質細胞系的重組體人骨形態形成蛋白-2(rhBMP-2)在實驗室條件下的生物活性的標準試驗方法ASTMF2131-02(2012)用W-20小鼠基質細胞系測定重組人骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標準試驗方法。術語和定義3.1下列術語和定義適用于本文件。3.1.1蛋白質由氨基酸以“脫水縮合”的方式組成的多肽鏈經過盤曲折疊形成的具有一定空間結構的物質，是生命的物質基礎。3.1.2重組蛋白運用基因工程和細胞工程技術等技術獲得的蛋白質。3.1.3非標記重組蛋白運用基因工程及細胞工程技術表達出結構接近天然蛋白的重組蛋白，且未預先標記熒光素、生物素標記等標記物質。3.1.4標記重組蛋白對重組蛋白采用不同的標記技術，如將生物素、熒光染料、熒光蛋白、酶等標記到重組蛋白，形成的偶聯復合物。3.1.5A/G/L蛋白A蛋白為StaphylococalProteinA、G蛋白為StreptococcalProteinG、L蛋白為PeptostreptococcusmagnusProteinL的簡稱，由于三種蛋白與特定類型抗體分子具有特異性的結合能力，廣泛用于抗體的分離純化和分析檢測。3.1.6抗原能引起機體免疫反應并產生抗體的物質。3.1.7抗體機體由于抗原的刺激，由B細胞分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原特異性結合的免疫球蛋白。3.1.8單克隆抗體/單抗由單一B細胞分化增殖的子代細胞所分泌的高度均質性針對單一抗原決定簇的特異性抗體。3.1.9磁珠由核心金屬顆粒，外層包裹的高分子材料和最外層的功能配置組成，廣泛應用于病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學等各個領域，在免疫檢測、細胞分離、生物達成純化和分子生物學等起到重要作用。3.1.10培養基供給微生物以及植物、動物的細胞或者組織生長繁殖的，由不同營養物質組合配制而成的營養基質。3.1.11核酸核酸是一類大分子聚合物，是所有已知生命形式必不可少的組成物質，是生命體遺傳信息載體，為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的總稱。3.1.12DNA 脫氧核糖核酸，由脫氧核苷酸組成的大分子聚合物，能夠攜帶生命體的遺傳信息。3.1.13克隆載體攜帶目的基因進入宿主細胞進行復制、擴增或表達的工具，即用于克隆、運載和轉移目的基因并能自我復制的DNA分子。3.1.14質粒細胞染色體外能夠自主復制的環狀DNA分子。3.1.15蛋白表達利用生物細胞將外源基因通過一系列機制最終合成蛋白的一種技術途徑。3.1.16蛋白表達系統在蛋白表達時，由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過該體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。3.1.17純化從包含多種物質的混合物中，根據不同分子的物理、化學、生物特性，通過一定技術手段，提取得到特定物質的過程。3.1.18轉染將外源基因轉入真核細胞的過程。3.1.19原核沒有以核膜為界的細胞核，也沒有核仁，只有擬核，且不進行有絲分裂、減數分裂、無絲分裂的原核生物細胞。3.1.20真核具有真正的由核膜包被的細胞核，細胞核內含染色質、核液和核仁，其染色體數在一個以上，能進行有絲分裂的真核生物細胞。3.1.21人源細胞最初來源于人體組織的細胞。3.1.22鼠源細胞最初來源于鼠科動物組織的細胞。3.1.23HEK293人胚胎腎細胞，衍生自人胚胎腎細胞的細胞系，廣泛用于生產蛋白、疫苗、抗癌試劑及重組腺病毒包被等。3.1.24CHO中國倉鼠卵巢細胞，廣泛地用來表達重組蛋白藥物。3.1.25靶點藥物治療針對的目標分子，通常在疾病的病理過程中扮演重要作用，藥物通過抑制或激活該目標分子的生物活性產生臨床藥效。3.1.26免疫檢查點免疫系統中表達的調節免疫激活程度的一系列分子。3.1.27靶向治療區別于傳統的化療、放療等，在細胞和分子水平上，特異性地作用于明確的靶點分子，從而達到對癌癥等疾病進行治療的方式。3.1.28PD-1“ProgrammedDeath-1”的縮寫，程序性細胞死亡蛋白-1，一種重要的免疫抑制分子，為腫瘤治療藥物的靶點。3.1.29PD-L1PD-1Ligand1，指PD-1配體1，是PD-1的主要配體，其結合T細胞上的PD-1以抑制免疫應答。3.1.30細胞因子由免疫細胞和某些非免疫細胞經刺激而合成、分泌的一類具有在細胞間傳遞信息、具有免疫調節和效應功能的蛋白質或小分子多肽。3.1.31化學藥經過化學合成而制得的藥物。3.1.32生物藥應用普通的或者以基因工程、細胞工程、蛋白質工程、發酵工程等生物技術獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料、用于人類疾病預防、治療和診斷的藥品。3.1.33創新藥區別于現有藥物或療法，具有新的結構和機理或新的治療用途的藥物。3.1.34ElisaEnzymelinkedimmunosorbentassay，酶聯免疫反應，一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗方法。3.1.35PCRPolymeraseChainReaction，聚合酶鏈式反應，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。3.1.36CMC ChemicalManufacturingandControl，包括藥物生產工藝、雜質研究、質量研究及穩定性研究等。3.1.37BLIBiolayerInterferometry，生物膜層光學干涉技術。3.1.38MALS/HPLC-MALS(Multi-AngleLightScattering/HighPerformanceLiquidChromatography-Multi-AngleLightScattering).多角度激光散射技術/高效液相色譜-多角度激光散射技術。3.1.39Nanodisc納米盤技術，由高密度脂蛋白發展而來的用于膜蛋白研究的新型類膜結構。3.1.40ADAAnti-drugantibody，藥物進入人體之后誘導機體產生的抗藥性抗體。3.1.41CROContractResearchOrganization，合同研發組織，通過合同形式為制藥企業和研發機構在藥物研發過程中提供專業化服務的一種學術性或商業性科學機構。3.1.42體外診斷試劑在體外診斷過程中，單獨或者與儀器配合使用，在疾病的預防、診斷、治療監測、預后觀察、健康狀態評價以及遺傳性疾病的預測過程中，用于對人體樣本進行體外檢測的試劑、試劑盒、校準品（物）、質控品（物）等。3.1.43流式細胞術一種利用流式細胞儀對細胞等生物粒子的理化及生物學特性（細胞大小、DNA/RNA含量、細胞表面抗原表達等）進行定量、快速、多參數同步相關檢測分析的生物技術。3.1,44藥代動力學藥物代謝動力學，定量研究藥物在生物體內吸收、分布、代謝和排泄規律，并運用數學原理和方法闡述血藥濃度隨時間變化的規律的方法。3.1.45重組蛋白表達分泌水平將目的基因導入到宿主細胞后，在細胞內合成并分泌到細胞外重組蛋白的產量高低。3.1.46蛋白活性蛋白質的生物學功能。3.1.47蛋白表達水平基因通過轉錄翻譯合成蛋白質的產量高低。3.1.48困難表達蛋白因為蛋白本身性質，該類蛋白在外源性表達時，表達水平低或者無。3.1.49細胞治療利用正常或者生物工程改造過的患者自體（或異體）的成體細胞（或干細胞）對組織、器官進行修復或者對腫瘤細胞進行抑制、殺傷的治療方法。3.1.50SPR表面等離子共振(SurfacePlasmonResonance,SPR)，它通過檢測生物傳感芯片上配位體與分析物之間的相互作用情況，進而探測物質的性質和結構。根據金屬表面偶聯的配體是否與分析物結合而產生不同的共振角，通過監測共振角度的變化，可以推斷出生物分子相互作用的親和性、親合常數、結合動力學等信息。總則為提升Fc受體蛋白質量，對體外檢測相關抗體或Fc融合蛋白藥物與Fc受體蛋白的親和力更接近天然狀態，進而評估相關藥物Fc段的免疫效應的強弱及有無，提出利用SPR技術具有實時、無需標記、穩定、靈敏、高通量等優勢，用于評價Fc受體蛋白質量。本文本涉及的外觀、可溶性、蛋白純度、蛋白含量、與相關抗體或Fc融合蛋白藥物親和力除應符合本文本外，尚應符合國家現行有關標準的規定。要求5.1外觀凍干粉，呈白色疏松體。5.2可溶性溶于水，重構后濃度為600ug/ml，為無色透明液體,無肉眼可見沉淀。5.3蛋白純度十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳電泳檢測，純度≥95%。(MALS)單體＞95%(MALS)5.4蛋白含量UV280蛋白含量測定方法檢測，蛋白原液標準范圍濃度為350-500ug/ml，重構濃度為600ug/ml。序列：(Accession#P08637-1)Gly17-Gln208，C端具有HIS標簽Buffer：PBS,pH7.4，10%-12%海藻糖理論分子量：MWof23.7kDa.活性：檢測方法：Hiscapture，檢測方法批檢方案Capture/ImmobilizedLevel(RU)AnalyteConc.(nM)擬合方式KD值（1uM=1*10-6）Rmax值SPRHiscapture24.561250-9.766nMKineticglobalfit(Twostatereaction）0.1uM+/-3倍60.662(±30%)通過HIS抗體的芯片偶聯我們產品HumanCD16a(V176),HisTag(Cat.No.CD8-H52H4)與上市藥物Herceptin的親和常數為0.1uM+/-3倍Protocol見附件我們產品突出特點高純度十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳電泳檢測，純度≥95%。(MALS)單體＞95%(MALS)與經典上市藥物的親和力批間一致性好5.5外部標識和使用說明書5.5.1包裝瓶上的標識應符合8.1的規定；5.5.2使用說明書應符合8.2的規定。6、試驗方法6.1外觀目視檢查，應符合5.1要求。6.2可溶性取小規格蛋白凍干品，加入無菌水中溶解，307ulml純水溶解100ug凍干粉，溫柔震蕩、混勻后靜置10分鐘，觀察為無色透明液體。6.3蛋白純度十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳電泳檢測，應符合4.3要求。MALS檢測應符合要求。6.4蛋白含量BCA蛋白含量測定方法測定。6.5外部標識和使用說明書目視檢查，應符合5.6要求。7、檢驗規則7.1生產批以一次凍干成型的產品為一個生產批。7.2出廠檢驗7.2.1取樣：7.2.1.1通常情況下，從包裝好的最小規格產品中隨意抽取夠1次全檢量的樣品作為檢測