35DB35/T2015—2021豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測試劑卡制備及高敏熒光免疫分析操作規程ThepreparationofCSFVantibodyhypersensitivefluorescencedetectionreagentcardandoperatingproceduresforhypersensitivefluorescenceimmunoassay2021-09-28發布2021-12-28實施福建省市場監督管理局發布I 4 Ⅱ本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草本文件主要起草人：鄭騰、張體銀、章鍵、吳俊清、吳冠英、謝向機、張志燈、唐寰宇、林杰、1豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測試劑卡制備及高敏熒光免疫分析操作本文件規定了豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測試劑卡的制備及高敏熒光免疫分析技術免疫分析操作規NY/T541獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技5.1.3恒溫培養箱（20℃~25℃和37℃±1℃)。25.2.112-N-嗎啡啉乙磺酸（M把硝酸纖維素膜粘貼在PVC底板上，采用劃膜噴金機在硝酸纖維素膜上噴涂已經稀釋成0.5mg/mL的山羊抗雞IgY/IgG抗體形成質控線（C線噴涂已經稀釋成1.0mg/mL的豬瘟病毒重組蛋白E2用封閉液（配制方法按照附錄A的A.1規定）封閉硝酸纖維素膜30min，用10mmol/L磷酸（pH7.5，配制方法按照附錄A的A.2規定）清洗硝酸纖維素膜30min，室溫（20℃~25℃)干燥2h將50mg的高敏熒光納米微球加入到5mL的2-N-嗎啡啉乙磺酸緩沖液（0.1mol/L，pH7.0）加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解，室溫（20℃~25℃)反應30min閉，再加入5mL樣品稀釋液（配制方法按照附錄A的A.4規定）保存（2℃~8℃)。將50mg的高敏熒光納米微球加入到5mL的2-N-嗎啡啉乙磺酸緩沖液（0.1mol/L，pH7.0）加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解，室溫（20℃~25℃)反應30min方法按照附錄A的A.3規定）重懸，加入2mg透析過的豬瘟病毒重組E2蛋白，在室溫（20℃~25℃)下酸鹽緩沖溶液封閉，再加入5mL樣品稀釋液（配制方法按照附錄A的A.4規定）保存（2℃~8℃)。將高敏熒光納米微球標記的雞IgY和豬瘟病毒重組E2蛋白分別稀釋成0.1μgPVC底板上從左到右依次粘貼樣品墊、標記物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，樣品墊的右端搭在標記待檢血清在2℃~8℃下可保存48h，在-20℃條件下可長期保存。7.2.2待檢血清和豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測試劑卡試驗前應平衡至室溫（20℃~25℃)。將平衡至室溫的豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測試劑卡置于干凈平坦的臺面上，在加樣孔內4），5磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純），0.2g；磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O，分析純），2.9g；氯化鈉（NaCl，分析純），8.0g；氯化鉀（KCl），加水至1000mL，溶解后，調節pH值至A.210mmol/L磷酸鹽緩沖液（10磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純0.2g；磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O，分析純2.9g；氯化鈉（NaCl，分析純），8.0g；氯化鉀（KCl，分析純），0.2g。加水至1000mL，溶