2DBS61/0008—2022食品安全地方標準植物提取物中苯并（a）芘的測定本標準規定了植物提取物中苯并（a）芘殘留量的液相色譜定量測定及氣相色譜-質譜/質譜的定性確證方法。本標準適用于食用植物提取物中苯并（a）芘殘留量的測定。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3原理試樣經正己烷提取，經硅膠固相萃取柱和聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱凈化，液相色譜-熒光檢測器檢測，外標法定量，陽性樣品采用氣相色譜-串聯質譜儀定性確證。4試劑與材料警告：苯并（a）芘是一種已知的強致癌物質，應注意危險品操作規則。除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和GB/T6682中規定的一級水。4.1.1正己烷（C6H14，CAS:92112-69-1）：色譜純。4.1.2二氯甲烷（CH2CI2，CAS:75-09-2）：色譜純。4.1.3乙腈（CH3CN,CAS:75-05-8）：色譜純。4.2溶液配制4.2.1正己烷-二氯甲烷（3+1，體積比量取300mL正己烷與100mL二氯甲烷混合均勻。4.2.2乙腈-水（95+5，體積比量取950mL乙腈與50mL水混合均勻。4.3標準品3DBS61/0008—2022苯并（a）芘標準物質Benzo(a)pyrene，C20H12，CAS:50-32-8純度≥99%。4.3標準溶液配制4.3.1標準儲備溶液（1mg/mL）：準確稱10mg苯并（a）芘標準品，精密稱定，于10mL容量瓶中，用乙腈溶解定容至刻度，搖勻，配制為1mg/mL的標準儲備溶液，0℃~4℃避光保存，可保存12個月。4.3.2標準中間溶液（1.0μg/mL準確量取1mg/mL苯并（a）芘標準儲備液0.025mL，于25mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，0℃~4℃避光保存，可保存6個月。4.3.4標準曲線的制備分別準確吸取苯并（a）芘中間液（1.0μg/mL）10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的系列標準曲線溶液，現用現配。4.4材料4.4.1硅膠固相萃取柱：1g/6mL，或者相當。使用前依次用5mL二氯甲烷、10mL正己烷活化，保持柱體濕潤。4.4.2聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱：BondElutENV柱，500mg/6mL，或者相當。使用前依次用5mL二氯甲烷、10mL正己烷活化，保持柱體濕潤。5儀器與設備5.1液相色譜儀：配有熒光檢測器。5.2氣相色譜-串聯質譜儀：配有電子轟擊源（EI）。5.3分析天平：感量0.00001g和0.01g。5.4旋轉蒸發器。5.5渦旋混勻器：轉速3000r/min。5.6超聲波清洗器。5.7離心機：轉速5000r/min。5.8固相萃取裝置。5.9移液槍：100μL，1mL，10mL。5.10有機系濾膜：0.22μm。6試樣制備與保存4DBS61/0008—2022取有代表性樣品200g，混合均勻，裝入潔凈容器中，密閉并標明標記，常溫保存。7測定步驟準確稱取試樣1g（精確至0.01g）于離心管中，加入10mL正己烷，渦旋混勻，超聲提取30min，4000r/min離心5min，取正己烷層溶液于100mL梨形瓶中，用10mL正己烷重復提取2次，合并正己烷提取液，于40℃減壓濃縮至約5mL，待凈化。7.2凈化硅膠固相萃取柱串接在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上方，取待凈化液上樣，用約5mL正己烷洗滌梨形瓶，洗滌液合并上樣，棄去流出液，再用15mL正己烷淋洗固相萃取柱，待淋洗液全部通過固相萃取柱后，棄去流出液和硅膠固相萃取柱，用5mL正己烷-二氯甲烷溶液（4.2.1）洗脫聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，整個凈化過程保持流速2~3mL/min，收集洗脫液，于40℃減壓濃縮至近干，準確加入1mL乙腈溶解定容，過微孔（5.10）濾膜，待測定。7.3測定7.3.1液相色譜條件a）色譜柱：多環芳烴專用液相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），或相當者；b）流動相：乙腈-水（95+5，體積比）等度洗脫；c）柱溫：35oC；d）激發波長：384nm；發射波長：406nm；e）流速：1.5mL/min；f）進樣量：10μL。7.3.2液相色譜法定量根據樣液中苯并（a）芘含量情況，選定與樣液濃度相近的標準使用溶液，標準使用溶液和樣液中苯并（a）芘的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內，如果樣液中苯并（a）芘含量超出檢測的線性范圍，則稀釋后再進樣。以保留時間定性，外標法定量，在7.3.1給定的液相色譜條件下，苯并（a）芘標準溶液的液相色譜圖參見附錄A中圖A.1。7.4氣相色譜-質譜/質譜法定性取7.2中于40℃減壓濃縮至近干的樣品，準確加入1mL正己烷溶解定容，供氣相色譜-串聯質譜儀定性確證。7.4.1氣相色譜-質譜/質譜參考條件a)色譜柱：DB-5ms彈性石英毛細管柱（30m×0.25mm，0.25μm），或相當者；5DBS61/0008—2022b)色譜柱溫度：120℃保持，0.5min，以20℃/min的速度升溫至250℃,保持8min，再以10℃/min的速度升溫至290℃,保持5min；c)進樣口溫度：280℃;d)色譜-質譜接口溫度：290℃;e)載氣：氦氣，純度大于等于99.999%，流速1.0mL/min；f)進樣量：1.0μL；g)進樣方式：不分流進樣，1min后打開分流閥；h)電離方式：EI；i)電離能量：70eV；j)離子源溫度：250℃;k)四極桿溫度：150℃;l)碰撞氣：氬氣，純度大于等于99.999%，壓力1.5mTorr（0.2Pa）；m)測定方式：多重反應監測模式（MRM）；n)多重反應監測條件：譜檢測條件參見表1；o)溶劑延遲：18min。表1苯并芘測定的MRM條件化合物定量離子對m/z碰撞能量eV定性離子對m/z碰撞能量eV苯并（a）芘252.0/250.035252.0/224.050僅為提供參考，并不涉及商業目的，鼓勵標準使用者嘗試不同廠家7.5測定法根據樣液中苯并（a）芘含量情況，選定與樣液濃度相近的標準使用溶液，標準使用溶液和樣液中苯并（a）芘的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內，如果樣液中苯并（a）芘含量超出檢測的線性范圍，則稀釋后再進樣。以保留時間定性，液相色譜測定，外標法定量，氣相色譜-質譜/質譜定性確證。7.6空白試驗除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進行。8結果計算和表達8.1結果計算和表達試樣中苯并（a）芘含量按式（1）計算6DBS61/0008—2022式中：X—試樣中苯并（a）芘的含量，單位為微克每千克(μg/kgA—樣液中苯并（a）芘的色譜峰面積；cs—標準工作液中苯并（a）芘的濃度，單位為納克每毫升（ng/mLV—樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；As—標準工作液中苯并（a）芘的色譜峰面積；m—試樣質量，單位為克（g）。計算結果需扣除空白值，測定結果用平行測定的算術平均值表示，9方法的靈敏度、準確度和精密度本方法苯并（a）芘定量限為1.0μg/kg。9.2準確度添加濃度水平上的回收率在71.0～118.0%之間，添加水平及回收率數據參見附錄B中表B.1。9.3精密度本方法批內相對標準偏差≤15%，批間相對標準偏差≤20%。7DBS61/0008—2022AA（資料性附錄）苯并（a）芘標準溶液的液相色譜圖及氣相色譜-質譜圖 人 人 圖A.1苯并（a）芘標準溶液的液相色譜圖（2.0ng/mL）圖A.2苯并（a）芘的氣相色譜-串聯四級桿質譜選擇離子流圖圖A.3苯并（a）芘氣相色譜-串聯四級桿質譜-質譜圖8DBS61/0008—2022BB（資料性附錄）方法的加標回收率和相對標準偏差不同植物提取物中苯并（a）芘殘留加標回收率和相對標準偏差（RSD）見表B.1表B.1植物提取物中苯并（a）芘殘留的添加回收率和相對標準偏差樣品加標水平/(μg/kg）回收率范圍/%生姜提取物82.0~100.04.52.080.5~107.05.65.076.4~92.8黃芪提取物71.0~118.07.52.080.0~103.05.085.0~1