唾液酸檢測試劑盒（酶法）注冊審查指導原則（2023年修訂版）（征求意見稿）本指導原則旨在指導注冊申請人對唾液酸檢測試劑盒（酶法）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。本指導原則是對唾液酸檢測試劑盒（酶法）的一般要求，申請人應依據產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據，并依據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規強制執行，如有能夠滿足法規要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。一、適用范圍唾液酸檢測試劑盒（酶法）是指基于分光光度法原理，利用全自動生化分析儀、半自動生化分析儀或分光光度計，對人血清、血漿或其他樣本中的唾液酸含量進行體外定量分析的試劑。目前唾液酸(SA)含量的檢測方法主要有比色法和酶法兩種方法。比色法是一種直接測定方法，如間苯二酚法、Ehrlich法、色氨酸、過氧化氫法、氫氯酸和硫乙酸法等；酶法是一種間接測定方法，國內常規檢測為酶偶聯速率法，一種是利用丙酮酸氧化酶的比色法，另一種是利用乳酸脫氫酶的紫外分光光度法。詳情如下：1.丙酮酸氧化酶法原理：血清中的SA受神經氨酸苷酶的作用，形成N-乙酰神經氨酸，進而在N-乙酰神經氨酸醛縮酶（NANA-醛縮酶）的作用下生成丙酮酸和N-乙酰甘露糖胺；其中丙酮酸在丙酮酸氧化酶作用下生成H2O2，借助于Trinder反應，在POD作用下生成有色醌，引起540nm波長下吸光度的上升。通過測定其540nm波長下的吸光度變化，與經過同樣處理的校準品比較，即可計算出樣品中SA的含量。2.乳酸脫氫酶比色法原理：血清中的SA受神經氨酸苷酶的作用，形成N-乙酰神經氨酸，進而在N-乙酰神經氨酸醛縮酶（NANA-醛縮酶）的作用下生成丙酮酸和N-乙酰甘露糖胺；其中丙酮酸與NADH在乳酸脫氫酶（LDH）作用下生成乳酸和NAD+，引起340nm波長下吸光度的下降。通過測定340nm波長下的吸光度變化，與經過同樣處理的校準品比較，即可計算出樣品中SA的含量。從方法學上講，本指導原則是通過測定中間產物丙酮酸在酶作用下的氧化、還原反應，基于紫外分光光度法測定底物消耗或產物生成速率來反應樣品中SA的含量。二、注冊審查要點注冊申報資料的撰寫應符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》的相關要求。（一）監管信息1.產品名稱產品名稱由三部分組成。第一部分：被測物質的名稱，如唾液酸；第二部分：用途，如檢測試劑盒；第三部分：方法或者原理，如乳酸脫氫酶法等，本部分應當在括號中列出。2.分類依據根據《體外診斷試劑分類子目錄》，唾液酸檢測試劑產品類別為：II-2用于糖類檢測的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840。3.注冊單元劃分按照《醫療器械注冊單元劃分指導原則》對注冊單元劃分。如包含不同的包裝規格，不同規格間僅試劑組分裝量或檢測數有差異，原則上劃分為同一注冊單元；如包含不同的包裝規格，不同規格間除試劑裝量或檢測數的差異外，適用于不同的儀器機型，原則上劃分為同一注冊單元。校準品、質控品可以與檢測試劑合并申請注冊，也可以單獨申請注冊。（二）綜述資料綜述資料主要包括章節目錄、概述、產品描述、預期用途、申報產品上市歷史、其他需說明的內容等。1.章節目錄應包括本章的所有標題和小標題，注明目錄中各內容的頁碼。2.概述應描述α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑名稱及其確定依據；該產品屬于II-4用于酶類檢測的試劑，管理類別為第二類，分類編碼為6840；描述申報產品預期用途；描述有關申報產品的背景信息概述或特別細節（如適用），如申報產品的歷史概述、歷次提交的信息，與其他經批準上市產品的關系等。3.產品描述3.1產品綜述應明確產品所采用的技術原理，產品組成，原材料的來源及制備方法，主要生產工藝，檢驗方法，質控品的制備方法及賦值情況等。如產品包含校準品，應提供校準品的制備方法及溯源情況。技術原理包括反應原理，方法學，測量方法，信號處理方法，數據獲取和解讀方式，分析前處理步驟等。描述產品主要研究結果的總結和評價，包括分析性能評估、參考區間、穩定性以及臨床評價等。描述不同包裝規格之間的差異。描述產品中使用的生物材料或衍生物（如適用），包括生物學來源（如人、動物、病原體、重組或發酵產物）和組織來源（如血液）的描述。人源性材料須對有關傳染病（HIV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明；其他動物源及微生物來源的材料，應當說明其在產品運輸、使用過程中對使用者和環境是安全的，并提供相關的證明文件。3.2包裝描述提供有關產品包裝信息，包括包裝形狀和材料等。3.3研發歷程闡述申請注冊產品的研發背景和目的。如有參考的同類產品或前代產品，應當提供同類產品和/或前代產品的信息，并說明選擇其作為研發參考的原因。3.4與同類和/或前代產品的比較應著重從預期用途、主要組成成分、標準化及溯源、主要性能指標、參考區間等方面寫明擬申報產品與境內、外已上市同類產品和/或前代產品之間的主要區別。4.預期用途4.1預期用途：說明產品用于體外定量測定人體樣本中唾液酸的含量，應明確具體的樣本類型如血清、血漿等，適用的樣本類型應結合實際的分析性能研究及臨床研究情況進行確認。4.2臨床適應證：唾液酸又稱為神經氨酸，通常由不同的糖苷鍵連接在糖蛋白和糖脂的非還原端。為N-\t"/item/%E5%94%BE%E6%B6%B2%E9%85%B8/_blank"乙酰神經胺酸或任何其酯或其醇\t"/item/%E5%94%BE%E6%B6%B2%E9%85%B8/_blank"羥基的衍生物，位于細胞膜糖蛋白側鏈末端，是細胞膜\t"/item/%E5%94%BE%E6%B6%B2%E9%85%B8/_blank"表面受體的重要組成部分。唾液酸普遍存在于人體內，唾液酸是神經節苷脂的傳遞遞質，是大腦的組成部分，且在腦中的含量最高。唾液酸還可以阻止病菌入侵，是流感病毒的受體，是流感病毒結合在黏液細胞中的結合位點。在發生各種\t"/item/%E5%94%BE%E6%B6%B2%E9%85%B8/_blank"炎癥性疾病及\t"/item/%E5%94%BE%E6%B6%B2%E9%85%B8/_blank"惡性腫瘤疾病時的增高。唾液酸檢測試劑盒作為II類體外診斷試劑申報時臨床上主要作為一種非特異性炎癥的檢測指標。（三）非臨床資料1.產品風險管理資料申請人應考慮產品生命周期的各個環節，從產品設計開發、原材料的采購控制、生產、預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，綜合評價產品風險可接受程度，形成風險管理資料。應符合GB/T42062《醫療器械風險管理對醫療器械的應用》的要求。2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單說明產品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應當說明理由。對于包含在產品注冊申報資料中的文件，應當說明其在申報資料中的具體位置；對于未包含在產品注冊申報資料中的文件，應當注明該證據文件名稱及其在質量管理體系文件中的編號以備查。3.產品技術要求及檢驗報告3.1產品技術要求申請人應當在原材料質量和生產工藝穩定的前提下，根據產品研制、前期評價等結果，依據國家標準、行業標準及有關文獻資料，按照《醫療器械產品技術要求編寫指導原則》的有關要求，編寫產品技術要求。目前唾液酸檢測試劑盒沒有專標，性能指標的制定可參考GB/T26124-2011《臨床化學體外診斷試劑(盒)》、YY/T1549《生化分析用校準物》、YY/T1662《生化分析儀用質控物》結合產品自身性能以及同類產品制定產品的性能指標。3.2檢驗報告應提供符合《醫療器械監督管理條例》及《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》規定要求的檢驗報告。可提交具有自檢能力的注冊申請人出具的自檢報告或委托有資質的醫療器械檢驗機構出具的檢驗報告。4.分析性能研究申請人應提交在符合質量管理體系的生產環境下生產的試劑盒進行的所有性能評估驗證的研究資料，對于每項分析性能的研究都應提供研究方案，方案應包括研究目的、試驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數據、統計方法等詳細資料。并按照按試驗方案進行試劑的分析性能評估。分析性能研究的試驗方法，可以參考《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導原則》。分析性能評估時應將試劑、儀器和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統的性能是否符合要求。有關分析性能評估的背景信息也應在申報資料中有所體現，包括試驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規格和批號、所選用的校準品和質控品、臨床樣本來源等。用于分析性能評估的樣本，應盡量與預期適用的真實臨床樣本一致，并按照說明書描述的方式進行樣本采集、處理、運輸和保存。如申報產品適用不同的機型，需要提交在不同機型上進行評估的資料。如試劑包含不同包裝規格，需對各包裝規格間的差異進行分析或驗證。如不同規格間存在性能差異，需采用每個包裝規格產品進行分析性能評估；如不同規格間不存在性能差異，需要詳細說明各規格間的差別及可能產生的影響，采用具有代表性的包裝規格進行分析性能評估。4.1樣本穩定性申請人應充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對不同類型樣本的穩定性分別進行評價并提交研究資料。包括建議的保存條件（如溫度范圍、是否需要避光等）、添加劑（如抗凝劑等）和運輸條件（如涉及）等。對于冷凍保存的樣本還應對凍融次數進行評價。4.2適用的樣本類型如果試劑適用于多種樣本類型（包括抗凝劑），應采用合理方法評價每種樣本類型的適用性。對具有可比性的樣本類型（如血清和血漿），可選擇具有統計學意義數量的樣本進行樣本一致性的同源比對研究；對于不具有可比性的樣本類型，應對每種樣本類型分別進行分析性能評估。4.3校準品的量值溯源和質控品的賦值（如適用）參照GB/T21415《體外診斷醫療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》、YY/T1549《生化分析用校準物》、YY/T1662《生化分析儀用質控物》提供企業（工作）校準品及試劑盒配套校準品的溯源、賦值過程以及測量不確定度相關資料，提供質控品賦值及其靶值范圍確定的相關資料。如校準品的基質不同于臨床常用樣本類型，還應提交基質效應的相關研究資料。4.4正確度對測量正確度的評價，可采用參考物質檢測、方法學比對、回收試驗等方法，申請人可根據實際情況選擇合理方法進行研究。推薦的參考物質包括：具有互換性的有證參考物質，公認的參考品、標準品，參考測量程序賦值的臨床樣本。不可采用產品校準品、申報試劑檢測系統定值的質控品進行準確度評價。唾液酸檢測試劑暫無國家標準品和國際參考品，申請人可采用方法學比對的方式進行正確度或回收試驗的方法進行研究。4.5精密度應根據各測量條件對檢測結果影響程度的分析，設計合理的精密度試驗方案進行評價，包括重復性、中間精密度和再現性。精密度研究用樣本一般為臨床實際檢測樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測量區間高、中、低在內的3～5個水平，應有醫學決定水平或參考區間上/下限濃度附近的樣本。精密度研究可能涉及多天、多地點檢測，應確保樣本的穩定性和一致性，可將樣本等分保存。4.6空白限、檢出限和定量限定量檢測體外診斷試劑對樣本濃度下限的檢出能力指標包括空白限（LoB）、檢出限（LoD）及定量限（LoQ）。申請人可參考YY/T1789.3-2022《體外診斷檢驗系統性能評價方法第3部分：檢出限與定量限》、《定量檢測試劑分析性能評估注冊技術審查指導原則》等根據產品的具體情況選擇適用的方法進行檢出能力的研究，如產品不適用于LoB、LoD和LoQ的概念，應提供充分說明。4.7分析特異性應充分考慮干擾物質對檢測結果的影響。申請人可參考《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導原則》并結合實際情況選擇適用的干擾物質進行評價。常見的內源性干擾物質包括膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等，常見的外源性干擾物質包括常用藥物及其代謝物（如非甾體抗炎藥、抗腫瘤類藥物）以及抗流感藥物（奧司他韋和扎那米韋）等，企業可根據YY/T1789.5-2023《體外診斷檢驗系統性能評價方法第5部分：分析特異性》進行干擾物質研究。4.8線性區間及可測量區間4.8.1線性區間線性區間的研究，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當建立試劑的線性區間時，需配制較預期線性區間更寬的9個左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本進行多次重復檢測，根據可接受線性偏差和各濃度的重復性，確定檢測次數。采用重復檢測均值和預期值進行直線回歸分析，建議采用加權最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關系數（r）及線性偏差，判斷結果是否滿足可接受標準。當驗證試劑的線性區間時，需配制覆蓋整個線性區間的至少5個不同濃度的樣本，每個樣本至少重復檢測2次。4.8.2測量區間測量區間，也稱分析測量區間，在該區間內，臨床樣本在未經稀釋、濃縮，或非常規測量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測結果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內。測量區間下限為定量限，線性區間包含測量區間。如對超出測量區間濃度的樣本可進行稀釋后檢測，應研究合適的稀釋液和稀釋倍數，從而確定試劑的可報告區間。測量區間的研究可參考YY/T1789.4-2022《體外診斷檢驗系統性能評價方法第4部分：線性區間與可報告區間》采用合適的方法進行研究。5.穩定性研究主要包括實時穩定性（貨架有效期）、使用穩定性以及運輸穩定性等。穩定性研究可參考YY/T1579《體外診斷醫療器械體外診斷試劑穩定性評價》的相關要求進行研究。申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案，同時應注意選取代表性包裝規格進行研究。穩定性研究資料應包括研究方法的確定依據、具體的實施方案、過程、詳細的研究數據以及結論。5.1實時穩定性（貨架有效期）提交至少三批申報產品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩定性研究資料。明確儲存的環境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。5.2使用穩定性提交申報產品實際使用期間穩定性的研究資料，應包括所有組成成分的開封穩定性。適用時提交復溶穩定性（凍干粉）、開瓶穩定性及機載穩定性研究資料等。如涉及校準品，還應提交校準頻率或校準穩定性研究資料。明確產品使用的溫度、濕度條件等。5.3運輸穩定性提交申報產品可在特定或者預期的條件下運輸的研究資料，應說明產品正確運輸的環境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時說明產品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。6.參考區間確定資料申報產品可以建立自己的參考區間或驗證參考區間，但都要確保參考區間的可溯源性，記錄確定參考區間的所有步驟，包括參考個體的選擇、分析前因素、樣本檢測以及統計分析方法等。可參考《體外診斷試劑參考區間確定注冊審查指導原則》進行參考區間的建立或驗證。7.其他資料7.1反應體系（如需提供）反應體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法（如有）、質控方法等。7.2主要原材料研究資料和生產工藝研究資料（如需提供）主要研究資料包括主要原材料的資料。如涉及企業參考品，還應提交企業參考品生產工藝的研究資料主要為生產工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產工藝的確定依據。7.3三批產品的生產及自檢記錄。提供三批產品生產及自檢記錄的復印件。如產品包含校準品和（或）質控品，還應提供校準品的賦值記錄和質控品的定值記錄。7.4證明產品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。（四）臨床評價資料根據體外診斷試劑臨床評價的相關要求，該項目已列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術指導原則》要求進行臨床評價。如無法按要求進行臨床評價，應進行臨床試驗；如預期用途超出豁免目錄中的描述，也應進行臨床試驗。臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關法規及《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求。（五）產品說明書和標簽樣稿說明書承載了產品預期用途、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導使用人員正確操作、臨床醫生準確理解和合理應用試驗結果的重要技術性文件。產品說明書的格式應符合《關于發布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監督管理總局通告2015年第17號）的要求。結合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，下面對唾液酸檢測試劑盒（酶法）說明書的重點內容進行詳細說明。1.【產品名稱】試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：唾液酸檢測試劑盒（酶法）2.【包裝規格】2.1包裝規格應明確單、雙試劑類型；2.2包裝規格應明確裝量（如：××mL；××人份）；2.3帶有校準品或質控品應明確標識；2.4不得多于產品技術要求中所列的包裝規格；2.5如不同包裝規格有與之特定對應的機型，應同時明確適用機型。3.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容：3.1說明試劑盒用于體外定性、半定量或定量檢測人血清、血漿或全血等樣本中的唾液酸的含量，臨床上可作為一種非特異性炎癥指標之一。同時應明確與目的檢測物相關的臨床適應證背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法等。3.2唾液酸異常情況常見于哪些疾病，陰性或陽性、升高或降低可能有哪些醫學解釋。3.3作為支持性資料，申請人應在注冊申報資料中提供有關臨床適應證背景的文獻資料，并將文獻名稱列入說明書的參考文獻中。4.【檢驗原理】應結合產品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。例如：血清中的SA受神經氨酸苷酶的作用，形成N-乙酰神經氨酸，進而在NANA-醛縮酶的作用下生成丙酮酸和N-乙酰甘露糖胺；其中丙酮酸與NADH在乳酸脫氫酶（LDH）作用下生成乳酸和NAD+，引起340nm波長下吸光度的下降。通過測定340nm波長下的吸光度變化，與經過同樣處理的校準品比較，即可計算出樣品中SA的含量。5.【主要組成成分】5.1對于產品中包含的試劑組分：5.1.1說明名稱、數量及在反應體系中的比例或濃度，如果對于正確的操作很重要，應提供其生物學來源、活性及其他特性。5.1.2對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。5.1.3如盒中包含耗材，應列明耗材名稱、數量等信息。5.2試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組分，應列明檢測所需但未包含在本試劑盒中的試劑名稱。如該試劑已取得注冊證號/備案號，需注明“注冊證號/備案號及貨號”；如該試劑正處于注冊/備案階段，需注明“貨號及注冊證號:（留空）/備案號:（留空）”。5.3對于校準品和質控品（若配有）：5.3.1說明主要組成成分及其生物學來源。5.3.2注明校準品的定值及其溯源性，溯源性資料應寫明溯源的最高級別（如有標準物質或參考物質，應包括標準物質或參考物質的發布單位及編號)。5.3.3注明質控品的靶值和靶值范圍。如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。質控品應明確靶值和可接受范圍。6.【儲存條件及有效期】6.1對試劑的效期穩定性、復溶穩定性（如有）、開瓶穩定性等信息作詳細介紹。包括環境溫濕度、避光條件等。6.2不同組分保存條件及有效期不同時，應分別說明，產品總有效期以其中效期最短的為準。注：保存條件不應有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。穩定期限應以月或日或小時為單位。7.【適用儀器】7.1說明可適用的儀器，并提供與儀器有關的必要信息以便用戶能夠作出最好的選擇。7.2應寫明具體儀器型號。8.【樣本要求】應在以下幾方面進行說明：8.1適用的樣本類型。8.2在樣本收集過程中的特別注意事項。8.3為保證樣本各組分穩定所必需的抗凝劑或保護劑等。8.4能夠保證樣本穩定的儲存、處理和運輸方法。8.5重點明確以下內容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期）和運輸條件等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求（如草酸鹽既可與丙酮酸或乳酸發生競爭性抑制，又能與LDH及NADH或NAD+形成復合物。從而抑制催化的還原或氧化反應。應明確避免使用的提示）。特殊體液標本還應詳細描述對采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結果的要求。9.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：9.1試劑配制方法、注意事項；9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、比色杯光徑、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項；9.3校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制；9.4質量控制：質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等；9.5檢驗結果的計算：應明確檢驗結果的計算方法，超出線性范圍的樣本應進行稀釋。10.【參考區間】應注明常用樣本類型及反應方式的正常參考區間，并說明參考值確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區間”。11.【檢驗結果的解釋】說明可能對檢驗結果產生影響的因素，在何種情況下需要進行確認試驗。12.【檢驗方法的局限性】12.1說明檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據。12.2說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結果產生偏離，或測量結果還不能完全滿足臨床需要。如：干擾（膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等）等，并量化干擾結果。13.【產品性能指標】說明該產品的主要性能指標，如空白限、檢出限、定量限、正確度、精密度、線性范圍等。14.【注意事項】應至