PAGEPAGE26第32講微生物的培育與應用單科命題備考導航核心素養解讀命題趨勢(1)進行微生物的分別和培育(2)用大腸桿菌為材料進行平面培育,分別菌落(3)測定某種微生物的數量(4)分別土壤中分解尿素的細菌,并進行計數(5)探討微生物的利用(1)通過以大腸桿菌為材料進行平面培育,駕馭微生物分別、純化和培育的方法(2)通過選擇培育基分別土壤中分解尿素的細菌,駕馭微生物的分別和計數方法(3)通過微生物利用的實例,形成發酵工程利用微生物的特定功能規模化生產對人類有用的產品的觀念◆題型內容:考查微生物的計數、分別和純化培育◆考查形式:以生產生活材料為背景,考查微生物的計數、分別和純化培育等考點一微生物的培育和分別1.培育基(1)概念:人們依據微生物對養分物質的不同需求,配制出供其生長繁殖的養分基質。

(2)成分:一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽,還要滿意不同微生物生長對pH、特別養分物質以及氧氣的需求。

(3)分類①按物理性質固體②按功能選擇培養基2.無菌技術(1)含義:指在培育微生物的操作中,全部防止雜菌污染的方法。

(2)關鍵:防止外來雜菌的入侵。

(3)無菌技術的主要方法和適用對象項目條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫柔的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手,用氯氣消毒水源紫外線消毒法無菌室滅菌劇烈的理化因素殺死物體內外全部的微生物,包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培育基及容器的滅菌3.純化大腸桿菌(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。

(2)純化大腸桿菌①原理:在培育基上將細菌稀釋或分散成單個細胞,使其長成單個的菌落,這個菌落就是一個純化的細菌菌落。

②方法:a.平板劃線法:通過接種環在瓊脂固體培育基表面連續劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基的表面。

b.稀釋涂布平板法:將菌液進行一系列的濃度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面,進行培育,當稀釋倍數足夠高時,即可獲得單個細菌形成的菌落。

4.菌種的保藏(1)對于頻繁運用的菌種,可以采納臨時保藏的方法:固體斜面培育基上4℃保存,菌種易被污染或產生變異。

(2)對于長期保存的菌種,可以采納甘油管藏的方法:甘油瓶中-20℃在冷凍箱中保藏。

1.培育基配制過程中,先調pH后定容。(?)2.伊紅美藍培育基是固體、合成、選擇培育基。(?)3.培育基分裝到培育皿后才能進行滅菌。(?)4.消毒的原則是既能殺死材料表面的微生物,又要削減消毒劑對細胞的損害。(√)5.無菌操作的對象只要是沒有生物活性的材料(如培育基、接種環等),都可采納高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。(?)6.平板劃線法中,接種環灼燒后干脆進行劃線。(?)如圖是采納純化微生物培育的兩種接種方法接種后培育的效果圖,據圖分析下列問題:(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是、。

(2)某同學在純化土壤中的細菌時,發覺培育基上的菌落連成了一片,最可能的緣由是,為避開此種現象應當實行的措施是

。

(3)在進行培育時,須要將培育皿倒置,緣由是。

(4)用B方法接種時,其次次及其后劃線從上次末端起先,目的是。

(5)試驗過程中,玻璃器皿和金屬用具可以用干熱滅菌法滅菌,緣由是。

答案(1)稀釋涂布平板法平板劃線法(2)菌液濃度過高或劃線時在劃下一區域前未將接種環灼燒滅菌增大稀釋倍數或每次劃新區域前先將接種環灼燒滅菌(3)使培育基表面水分更好揮發,并防止培育皿蓋水珠污染培育基(4)使微生物數目隨劃線次數增加而削減,以達到分別的效果(5)玻璃器皿和金屬用具能耐高溫,并且要保持干燥1.培育基的種類、用途及配制原則(1)按物理狀態分類培育基種類特點用途液體培育基不加凝固劑工業生產固體培育基加凝固劑(如瓊脂)微生物分別、鑒定,活菌計數,菌種保藏半固體培育基視察微生物的運動、分類、鑒定(2)按功能分類種類制備方法原理用途舉例選擇培育基培育基中加入某些化學物質依據某些微生物對某些物質的抗性而設計從眾多微生物中分別所需的微生物加入青霉素分別得到酵母菌和霉菌鑒別培育基培育基中加入某種指示劑或化學藥品依據微生物產生的某種代謝產物與培育基中的特定指示劑或化學藥品反應,產生明顯的特征變更而設計鑒別不同種類的微生物伊紅美藍培育基可以鑒別大腸桿菌2.微生物的純化培育——平板劃線法與稀釋涂布平板法方法平板劃線法稀釋涂布平板法留意事項(1)每一次劃線前都須要灼燒接種環滅菌(2)灼燒接種環之后,要冷卻后再進行操作,以免溫度太高殺死菌種(1)稀釋操作時:每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌;(2)涂布平板時:涂布器用體積分數為70%酒精消毒;酒精燈與培育皿距離要合適菌體獲得在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體從相宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優點可以依據菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落既可以獲得單細胞菌落,又能對微生物計數缺點不能對微生物計數操作困難,須要涂布多個平板適用范圍好氧菌厭氧菌和兼性厭氧菌目的在培育基上形成由單個細胞繁殖而來的子細胞群體——菌落考向一考查培育基及其制備方法及無菌技術的操作1.下表是對四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類型的描述,正確的是()選項項目硝化細菌乳酸菌根瘤菌衣藻A能源NH3乳酸N2光能B碳源CO2糖類等糖類等CO2C氮源NH3N2N2NO3D代謝類型自養需氧型異養厭氧型自養需氧型自養需氧型1.答案B從能源來看,乳酸菌和根瘤菌需糖類等有機物供能;從氮源看,乳酸菌須要氨基酸;從代謝類型看,根瘤菌為異養需氧型;從碳源看,硝化細菌與衣藻需CO2,乳酸菌和根瘤菌須要糖類等有機物。2.(2024江蘇四市高三3月調研)探討人員以甘蔗汁為原料,先接種釀酒酵母發酵,將獲得的含肯定酒精濃度的發酵液作為果醋發酵培育基,用于探討醋酸菌的發酵,醋酸不再增加時結束發酵,獲得試驗結果如圖所示,圖1表示不同接種量(W/V)發酵的結果,圖2表示接種適量醋酸菌種的發酵過程中菌體數量與醋酸產量變更。請分析并回答下列問題: 圖1 圖2(1)制備培育基時,常在甘蔗汁中添加酵母膏5g/L,這主要是為了給微生物供應等養分,再利用方法進行滅菌后備用。與前期酵母發酵相比,接種醋酸桿菌后進行發酵要調整限制的條件主要有。

(2)分析圖1可知,四種接種量中,生產中最相宜的接種量是,緣由主要有。接種量為2%(W/V)時,獲得的醋酸產量低的主要緣由是。

(3)分析圖2可知,為了了解發酵液中醋酸桿菌的種群數量變更,每天定時利用測定發酵液中菌體數量。發酵120h后,發酵液中醋酸產量增加不顯著的主要緣由是。

2.答案(1)氮源、碳源(和無機鹽)高壓蒸汽滅菌溫度和溶解氧(2)6%(W/V)此時產量高、發酵周期短、接種量少、成本低菌體生長消耗的養分物質較多(3)血球計數板(或抽樣檢測法)發酵液中養分物質的量較少解析據圖分析,圖1試驗的自變量是發酵時間和接種量,因變量是醋酸產量,隨著發酵時間的延長,醋酸產量越來越高,最終趨于穩定。(1)制備微生物培育基時,加入的酵母膏可以為微生物供應氮源、碳源(和無機鹽);配制好的培育基一般利用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌處理;醋酸桿菌是好氧菌,其發酵須要供應氧氣,且須要相宜的溫度條件(30~35℃)。(2)依據題圖分析可知,接種量為8%(W/V)和6%(W/V)時,醋酸產生速度都很快,達到最大醋酸產量的時間一樣快,考慮到成本等問題,選擇6%W/V的接種量最佳。接種量為2%(W/V)時,菌體生長消耗的養分物質較多(或高濃度醋酸會影響醋酸桿菌的細胞代謝),所以獲得的醋酸產量低。(3)測定發酵液中的醋酸桿菌的數量應當用血球計數板(或抽樣檢測法);發酵120h后,發酵液中養分物質的量削減,所以醋酸產量增加不顯著。題后悟道·歸納1.培育基的配制原則(1)目的要明確:配制時應依據微生物的種類、培育目的等確定配制的培育基種類。(2)養分要協調:留意各種養分物質的濃度和比例。(3)pH要相宜:細菌為6.5~7.5,放線菌為7.5~8.5,真菌為5.0~6.0,培育不同微生物所需的pH不同。2.微生物對主要養分物質的需求特點(1)自養型微生物所需的主要養分物質是無機鹽,碳源可來自大氣中的CO2,氮源可由含氮無機鹽供應。(2)異養型微生物所需的養分物質主要是有機物,即碳源必需由含碳有機物供應,氮源也主要由有機物供應,部分異養型微生物也可以利用無機氮源。考向二考查微生物的純化技術3.下面是微生物平板劃線示意圖,劃線的依次為1、2、3、4、5。下列敘述正確的是()A.在五個區域中劃線前后都要對接種環和培育基進行滅菌B.劃線操作時完全打開皿蓋,劃完馬上蓋上C.接種時不能劃破培育基,否則難以達到分別單菌落的目的D.第1區和第5區的劃線最終要連接起來,以便比較前后的菌落數3.答案C在每次劃線前后都要對接種環進行滅菌;進行劃線操作時,左手將培育皿的皿蓋打開一條縫隙,右手將冷卻后沾有菌種的接種環快速伸入平板內,劃三至五條平行線,蓋上皿蓋;留意接種時不能劃破培育基,否則難以達到分別單菌落的目的;第1區和第5區的劃線不能相連。4.(2024安徽合肥調研)某同學在做微生物試驗時,不當心把圓褐固氮菌和酵母菌混合在一起,得到混合菌。請你完成分別得到純度較高的圓褐固氮菌和酵母菌的試驗步驟,并回答有關問題:(1)主要步驟:①制備兩種培育基:一種是培育基,另一種加青霉素的培育基。分別分成兩份,依次標上A、A'和B、B',備用。

②分別向A、B培育基中接種。

③接種后,放在恒溫箱中培育3~4天。④分別從A、B培育基的菌落中挑取生長良好的菌種,接種到A'、B'培育基中。⑤接種后,把A'、B'培育基放入恒溫箱中培育3~4天。(2)回答問題:在步驟①中,為保證無雜菌污染,試驗中應采納的主要措施有:對培育基進行、將在酒精燈火焰上滅菌、接種過程在旁邊進行。在步驟④中,A培育基上生長良好的菌種是。

第④⑤兩個步驟的目的是獲得。

4.答案(1)無氮混合菌(2)高壓蒸汽滅菌接種環酒精燈火焰圓褐固氮菌純度較高的圓褐固氮菌和酵母菌解析本題是以微生物分別純化為背景的一道試驗設計題,A、B兩組互為比照,A組和B組分別挑取菌落到A'和B'組為微生物的純化過程,分析試驗題過程中應留意把握試驗結構:(1)圓褐固氮菌能夠固定氮元素,因此培育基中不須要氮元素,青霉素是一種抗生素,能夠殺死細菌即圓褐固氮菌,酵母菌是真菌,故能在含有青霉素的培育基上生長,因此A培育基上能夠生長的是圓褐固氮菌,B培育基上生長的是酵母菌。(2)微生物的培育與純化應保證無菌操作;④⑤兩步操作為微生物的純化。考點二微生物的篩選與計數1.土壤中分解尿素的細菌的分別和計數(1)分別原理:土壤中能合成脲酶的細菌才能分解尿素,配制以尿素為唯一氮源的培育基,能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌。

(2)試驗流程土壤取樣(富含有機質)→配制土壤溶液和制備培育基→系列稀釋→涂布平板與培育→細菌的計數。

(3)鑒定①原理:細菌分解尿素的反應中,細菌合成脲酶將尿素分解成了氨,其會使培育基中的堿性增加,pH上升。如圖:

②方法:在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑培育分解尿素的細菌,假如pH上升,指示劑將變紅。

2.分解纖維素的微生物的分別(1)纖維素酶①組成:纖維素酶是一種復合酶,它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。

②作用(2)菌種篩選①方法:剛果紅染色法,即通過是否產生透亮圈來篩選纖維素分解菌。

②原理纖維素分解菌↓剛果紅纖維素→紅色復合物紅色消逝、出現透亮圈③培育基:以纖維素為唯一碳源的選擇培育基④篩選流程土壤取樣:富含纖維素的環境

↓選擇培育:用選擇培育基培育,以增加纖維素分解菌的濃度

↓梯度稀釋:制備系列稀釋液,目的是使纖維素分解菌的細胞分散開,以獲得單個的菌落

↓涂布平板:將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上↓選擇產生透亮圈的菌落

1.選擇培育基可以鑒定某種微生物的種類。(?)2.從物理性質的角度看,選擇培育基多屬于固體培育基。(√)3.分解尿素的細菌在分解尿素時,可以將尿素轉化為氨,使得培育基的pH降低。(?)4.在篩選能分解纖維素的細菌的試驗中,選擇培育的目的是增大樣品中目的菌株的濃度。(√)5.剛果紅可以與纖維素形成透亮復合物,所以可通過是否產生透亮圈來篩選纖維素分解菌。(?)6.剛果紅染色法只能在培育微生物的時候加入剛果紅。(?)7.分別纖維素分解菌試驗中先用選擇培育基培育,后用鑒別培育基培育。(√)8.以尿素為唯一氮源的培育基中,尿素可為纖維素分解菌供應碳源。(?)9.在篩選纖維素分解菌試驗中,選擇培育用的是選擇培育基。(√)請回答以下關于纖維素分解菌的分別與計數過程的問題:(1)該過程中肯定要進行選擇培育嗎?選擇培育的目的是什么?。

(2)接種前如何確定固體培育基是否被污染?。

(3)如何設計試驗證明選擇培育基有選擇作用? 。

(4)在稀釋涂布平板法中,推斷操作勝利的標準是。

(5)每個稀釋濃度涂布三個平板,這一操作遵循了試驗的原則,該操作的目的是,設置空白比照的目的是。

答案(1)不肯定。選擇培育的目的是增加樣品中所需菌種的濃度(2)設置空白培育基,相宜條件下放置一段時間,假如沒有菌落出現,則未被污染(3)設置一般培育基(如牛肉膏蛋白胨培育基)為比照,若一般培育基菌落數目多,則說明選擇培育基有選擇作用(4)有兩個或兩個以上培育基菌落數目在30~300之間(5)重復解除偶然因素的影響解除非測試因素的影響1.篩選菌株(1)原則:人為供應有利于目的菌生長的條件,同時抑制或阻擋其他微生物的生長。(2)菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細菌分解纖維素的微生物①選擇培育基的成分:尿素作為唯一的氮源②鑒定方法:在培育基中加入酚紅指示劑,若指示劑變紅,pH上升,說明細菌能分解尿素①選擇培育基的成分:纖維素作為唯一的碳源②鑒定方法:剛果紅染色法,即剛果紅與纖維素形成紅色復合物,當纖維素被分解后,培育基出現以纖維素分解菌為中心的透亮圈2.微生物的計數(1)兩種計數方法的比較比較項目間接計數法(稀釋涂布平板法)干脆計數法(顯微計數法)原理當樣品的稀釋度足夠高時,培育基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統計平板上的菌落數,就能推想出樣品中大約含有多少活菌利用特定細菌計數板或血細胞計數板,在顯微鏡下計算肯定容積的樣品中微生物的數量公式每克樣品中的菌落數:(C÷V)×MC:某稀釋度下平板上生長的平均菌落數;V:涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL);M:稀釋倍數每毫升原液所含細菌數:每小格平均細菌數×400×10000×稀釋倍數缺點當兩個或多個菌體連一起時,平板上視察到的只是一個菌落不能區分死細胞和活細胞結果比實際值偏小比實際值偏大(2)設置比照和重復比較項目比照重復目的解除非測試因素對試驗結果的影響解除偶然因素對試驗結果的影響實例空白比照:確定培育基制作是否合格同一稀釋度涂布至少3個平板1.下列關于“土壤中分解尿素的細菌的分別與計數”試驗的敘述,錯誤的是()A.土壤取樣時應選取距地表約3~8cm的土壤層B.測定細菌的數量,一般選用104、105和106倍的稀釋液C.土壤中能合成脲酶的細菌能分解尿素D.向以尿素為唯一氮源的培育基中加入剛果紅溶液可以鑒定出分解尿素的細菌1.答案D鑒定分解尿素的細菌時需向以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑。2.苯酚是工業生產排放的有毒污染物質,自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚,為了降解廢水中的苯酚,探討人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株,篩選的主要步驟如圖所示,①為土壤樣品。下列相關敘述錯誤的是()A.圖中②培育目的菌株的選擇培育基中應加入苯酚作為碳源B.假如要測定②中活細菌數量,常采納稀釋涂布平板法C.若圖中④為比照試驗,則其中應以苯酚作為唯一的碳源D.運用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落2.答案C用苯酚作為選擇培育基中的碳源,也是微生物的能源物質,會影響其他微生物生長。測定培育液中細菌數目常采納稀釋涂布平板法。若④為比照試驗,則④中應含除苯酚外的其他碳源,⑤以苯酚作為唯一碳源。運用稀釋涂布平板法或平板劃線法都可以在⑥上獲得單菌落。3.(2024廣東惠州高三調研)不同品牌的酸奶具有不同的口味。某探討小組利用含碳酸鈣的固體培育基探究甲、乙兩品牌酸奶中乳酸菌的類型是否相同(乳酸能夠溶解碳酸鈣,使培育基變得透亮)。請回答下列問題:(1)將甲、乙兩品牌酸奶中的乳酸菌純化,分別接種在含碳酸鈣的固體培育基中培育,依據菌落四周透亮圈的大小,可確定酸奶中乳酸菌的類型。不同乳酸菌菌落透亮圈大小不同的緣由是 。

(2)家庭制作酸奶時,在純牛奶中加入少量酸奶相當于微生物培育技術中的操作,純牛奶變成酸奶,變更了口味但含有的能量削減,緣由是 。

(3)為長期保存純化的優質菌,可將菌液與充分混勻,置于-20℃的冷凍箱中保存。

(4)該探討小組進一步探究甲品牌酸奶中乳酸菌數量,試驗操作如上圖。接種微生物的方法有很多,圖中過程①②③所示的方法為。用該方法統計樣本菌落數后,所得數據須要乘以10n后,才可表示乳酸菌的數量(單位:個/mL),這里的n=。用該方法統計樣本菌落數時,同時須要做A、B、C三個平板,目的是。假如平板菌落數超過300,一般還需進一步。

3.答案(1)(在相同時間內)不同類型的乳酸菌產生乳酸的量不同,不同量的乳酸能夠溶解碳酸鈣的量不同,形成的透亮圈大小不同(2)接種乳酸菌在發酵時使牛奶中的養分成分發生變更,乳酸菌細胞呼吸消耗部分有機物,從而使能量削減(3)(滅菌的)甘油(4)稀釋涂布平板法6設置重復組,取平均值,使試驗結果更加精確牢靠稀釋解析(1)(在相同時間內)不同類型的乳酸菌產生乳酸的量不同,不同量的乳酸能夠溶解碳酸鈣的量不同,形成的透亮圈大小不同。(2)由于酸奶中含有乳酸菌,因此在純牛奶中加入少量酸奶相當于微生物培育技術中的接種操作,純牛奶變成酸奶是乳酸菌發酵的結果,乳酸菌在發酵過程中利用牛奶中的養分物質進行代謝,通過細胞呼吸消耗了牛奶中的部分有機物,因此酸奶比純牛奶中的能量削減了,在乳酸代謝過程中又有新物質的生成,從而使牛奶中的口味發生了變更。(3)菌種保藏分為臨時保藏法和甘油管藏法。其中甘油管藏法是用于長期保存的方法。(4)圖中①②③所示的方法為稀釋涂布平板法。由①②的操作可知這時已對酸奶樣品稀釋了100倍,②重復3次又稀釋了1000倍,從中取出0.1mL進行涂布,所用到的量是原來的10-6倍,因此這里的n=6。進行試驗統計數據時,為了使結果更牢靠,一般要遵循重復原則;假如平板菌落數超過300,則說明菌體濃度過大,須要進一步進行稀釋加以統計。4.(2024湖南長沙四縣高三調研)纖維素酶已被廣泛應用于多個領域,如何從生物體內獲得纖維素酶已成為一個重要的探討方向。請回答:(1)目前用于生產纖維素酶的微生物較多的是絲狀真菌,尤其是木霉菌。它所含的纖維素酶分解纖維素效果較好,但是提取出來的纖素酶中的活性較低,會導致分解時產生的纖維二糖積累,干脆影響分解效率,因此須要不斷改進提取工藝。木霉菌分泌的纖維素酶能降解其體外的纖維素,但是不能降解其自身細胞壁,緣由是其細胞壁的成分。

(2)若要從羊的胃中分別出能分解纖維素的微生物,除了須要打算相應的培育基外,在培育時還要供應(填“有氧”或“無氧”)條件。從羊胃中篩選出的菌株,對其中所產生纖維素酶的測定方法,一般是采納對纖維素酶分解濾紙等纖維素后產生的進行定量測定。

(3)常用染色法來推斷微生物分解纖維素的狀況。染色的方法有兩種:第一種是先培育微生物,再加入染色劑進行顏色反應;其次種是在時就加入染色劑。第一種方法的優點是顯示出的顏色反應可干脆體現纖維素分解菌的作用,但是操作繁雜,加入的染色劑溶液還會使。

(4)到富含纖維素的環境中去找尋分解纖維素的微生物,說明白在自然界找尋各種目的菌株時,遵循的共同原則是依據目的菌株。

4.答案(1)葡萄糖苷酶不含有纖維素(2)無氧葡萄糖(3)剛果紅倒平板菌落之間產生混雜(4)對生存環境的要求,到相應的環境中去找尋解析(1)纖維素在C1、CX酶的作用下,會被分解成纖維二糖,葡萄糖苷酶可以把纖維二糖分解成葡萄糖。木霉菌中所含的纖維素酶分解纖維素效果較好,但是提取出來的纖維素酶中的葡萄糖苷酶活性較低,會導致分解時產生的纖維二糖積累。木霉菌的細胞壁不含纖維素,故其分泌的纖維素酶不能分解自身的細胞壁。(2)從土壤中分別的纖維素分解菌是需氧的,而羊的胃中是無氧的環境,故提取的纖維素分解菌是厭氧的,須要在無氧條件下培育。纖維素的分解產物是葡萄糖,故可以通過測定葡萄糖的量來推斷纖維素酶的量。(3)推斷微生物分解纖維素的狀況常用剛果紅染色法,剛果紅與纖維素會形成紅色復合物,但剛果紅不和纖維素的分解產物發生這種反應。染色的方法有兩種:第一種是先培育微生物,再加入染色劑進行顏色反應;其次種是在倒平板時就加入染色劑。若先培育微生物,再加入染色劑進行顏色反應,顯示出的顏色反應可干脆體現纖維素分解菌的作用,但是操作繁雜,加入的染色劑溶液還會使菌落之間產生混雜。(4)找尋各種目的菌株時,遵循的共同原則是依據目的菌株對生存環境的要求,到相應的環境中去找尋。1.(2024江蘇,19,2分)下列關于產纖維素酶菌分別及運用的敘述,不合理的是()A.篩選培育基中應含有大量的葡萄糖或蔗糖供應生長養分B.可從富含腐殖質的林下土壤中篩選產纖維素酶菌C.在分別平板上長出的菌落需進一步確定其產纖維素酶的實力D.用產纖維素酶菌發酵處理農作物秸稈可提高其飼用價值1.答案A篩選產纖維素酶菌的培育基中應以纖維素為唯一碳源,而不應添加大量的葡萄糖或蔗糖,A錯誤;富含腐殖質的林下土壤含有大量纖維素,因此可以從中篩選產纖維素酶菌,B正確;在分別平板上長出菌落,只能說明這些菌落具有分解纖維素的實力,但其產纖維素酶的實力的大小須要進一步確定,C正確;農作物秸稈富含纖維素,用產纖維素酶菌發酵處理可以將其中的纖維素分解成葡萄糖,有利于動物利用,該處理可提高農作物秸稈飼用價值,D正確。2.(2024北京理綜,3,6分)篩選淀粉分解菌需運用以淀粉為唯一碳源的培育基。接種培育后,若細菌能分解淀粉,培育平板經稀碘液處理,會出現以菌落為中心的透亮圈(如圖),試驗結果見下表。菌種菌落直徑C(mm)透亮圈直徑H(mm)H/C細菌Ⅰ5.111.22.2細菌Ⅱ8.113.01.6有關本試驗的敘述,錯誤的是()A.培育基除淀粉外還含有氮源等其他養分物質B.篩選分解淀粉的細菌時,菌液應稀釋后涂布C.以上兩種細菌均不能將淀粉酶分泌至細胞外D.H/C值反映了兩種細菌分解淀粉實力的差異2.答案C微生物的培育基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽等養分物質,A正確;篩選淀粉分解菌的試驗流程為取樣→選擇培育(可省略此步)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別淀粉分解菌的培育基上→選擇產生透亮圈的菌落,B正確;細菌Ⅰ、Ⅱ均能將淀粉酶分泌至細胞外,所以出現了以菌落為中心的透亮圈,C錯誤;H/C值大,說明細菌分解淀粉實力強,D正確。3.(2024課標全國Ⅰ,37,15分)已知一種有機物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解,會造成環境污染。某小組用三種培育基篩選土壤中能高效降解X的細菌(目標菌)。Ⅰ號培育基:在牛肉膏蛋白胨培育基中加入X(5g/L)。Ⅱ號培育基:氯化鈉(5g/L),硝酸銨(3g/L),其他無機鹽(適量),X(15g/L)。Ⅲ號培育基:氯化鈉(5g/L),硝酸銨(3g/L),其他無機鹽(適量),X(45g/L)。回答下列問題。(1)在Ⅰ號培育基中,為微生物供應氮源的是。Ⅱ、Ⅲ號培育基中為微生物供應碳源的有機物是。

(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體培育基中,培育一段時間后,不能降解X的細菌比例會,其緣由是 。

(3)Ⅱ號培育基加入瓊脂后可以制成固體培育基,若要以該固體培育基培育目標菌并對菌落進行計數,接種時,應采納的方法是。

(4)假設從Ⅲ號培育基中得到了能高效降解X的細菌,且該菌能將X代謝為丙酮酸,則在有氧條件下,丙酮酸可為該菌的生長供應和。

3.答案(1)牛肉膏、蛋白胨X(2)下降不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖,而能降解X的細菌能夠增殖(3)稀釋涂布平板法(4)能量合成其他物質的原料解析(1)在Ⅰ號培育基中,牛肉膏、蛋白胨可以為微生物供應氮源,Ⅱ、Ⅲ號培育基中為微生物供應碳源的是有機物X。(2)Ⅱ號培育基中,碳源只有X,不能降解X的細菌會因缺乏碳源而不能增殖,使該類細菌比例降低。(3)利用固體培育基對菌落進行計數時,需采納稀釋涂布平板法進行接種。(4)在有氧條件下,丙酮酸可被分解為CO2和H2O且釋放能量,為該菌的生長供應能量和合成其他物質的原料。4.如圖是探討人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細菌的過程示意圖,下列有關敘述錯誤的是()A.在配制步驟②、③的培育基時,應先調整pH后再進行高壓蒸汽滅菌B.步驟③純化分解尿素細菌的原理是將聚集的細菌分散,可以獲得單細胞菌落C.步驟③采納涂布平板法接種,并需向牛肉膏蛋白胨培育基中加入尿素D.步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種,比較細菌分解尿素的實力4.答案C配制培育基時,應先調整pH后再進行高壓蒸汽滅菌,A項正確;步驟③純化分解尿素細菌的原理是將聚集的細菌分散,獲得單細胞菌落,B項正確;步驟③中要想篩選分解尿素的細菌,培育基中應以尿素為唯一氮源,C項錯誤;步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種,比較細菌分解尿素的實力,D項正確。5.【不定項選擇題】漆酶屬于木質素降解酶類,在環境修復、農業生產等領域有著廣泛用途。如圖是分別、純化和保存漆酶菌株的過程,相關敘述正確的是()A.生活污水中含有大量微生物,是分別產漆酶菌株的首選樣品B.篩選培育基中須要加入漆酶的底物,通過菌落特征挑出產漆酶的菌落C.在涂布平板上長出的菌落,再通過劃線進一步純化D.斜面培育基中含有大量養分物,可在常溫下長期保存菌株5.答案BC產漆酶的微生物主要生活在木質素含量較高的環境中,生活污水中含有大量的微生物,不是分別產漆酶菌株的首選樣品;篩選產漆酶微生物的培育基中應加入木質素等漆酶降解的底物,因不同菌種的菌落特征不同,故可通過菌落特征選擇產漆酶的菌落;由圖可知,通過涂布平板法進行初步篩選,再通過平板劃線法進一步純化;微生物長期保存應用甘油管藏法,保存溫度為-20℃。6.請依據所學微生物培育與計數的相關學問,回答下列問題。(1)試驗室制備牛肉膏蛋白胨培育基時常須要加入作為凝固劑,該培育基在制作過程中常采納法進行滅菌,在滅菌前常須要調整培育基的。

(2)若要用此培育基對微生物進行計數統計,應采納法接種;在接種前,隨機取滅菌后的空平板在恒溫箱中先行培育24h,這樣做的目的是。

(3)如表是某同學調查的市面上一種常見的面膜的部分成分,請回答下列問題。類型成分(部分)保濕劑水、甘油、丁二醇、丙二醇防腐劑羥苯甲酯、山梨酸鉀、脫氫乙酸鈉黏度調整劑卡波姆植物提取物海藻提取物、銀耳提取物、馬齒莧提取物舒緩成分尿囊素、甘草提取物pH調整成分氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨基酸、乳酸其他香精、尿素、蠶絲膠蛋白羥苯甲酯:廣譜抗菌物質,能抑制革蘭氏陰性、陽性細菌,對酵母菌及霉菌有較強的抑制作用。①網上流傳“面膜等同于細菌培育基”。依據微生物培育的學問并結合該種面膜的組成成分來分析,你認為此說法(合理/不合理),理由是。(答一點即可)

②生活中很多人喜愛利用自然材料干脆替代面膜產品,如黃瓜切片、蘆薈切片、雞蛋清等。結合所學學問對這一行為進行評價并給出你自己的建議: 。

6.答案(1)瓊脂高壓蒸汽滅菌pH(2)稀釋涂布平板檢驗培育基是否滅菌徹底(3)①不合理面膜的成分中含有防腐劑,能抑制微生物的繁殖②自然材料中不含防腐劑及各種添加劑,值得提倡,但建議敷面膜時間不要過長或者敷完后要剛好清洗干凈,否則會引起微生物的繁殖,可能感染皮膚(或自然材料可能引起過敏或細菌生長,不建議采納,建議選用不易引起過敏或經運用報道平安的自然材料敷面膜等)解析(1)牛肉膏蛋白胨培育基是固體培育基,一般須要加入瓊脂作為凝固劑;培育基一般常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌,且要先調整pH后滅菌。(2)微生物常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法,兩者都可以分別菌種,且后者還可以對菌種進行計數。在接種前,隨機取滅菌后的空平板在恒溫箱中先行培育24h,作為空白比照組,檢驗培育基是否滅菌徹底。(3)①“面膜等同于細菌培育基”這種說法是不合理的,因為面膜的成分中含有防腐劑,能抑制微生物的繁殖。②自然材料中不含防腐劑及各種添加劑,值得提倡,但建議敷面膜時間不要過長或者敷完后要剛好清洗干凈,否則會引起微生物的繁殖,可能感染皮膚(或自然材料可能引起過敏或細菌生長,不建議采納,建議選用不易引起過敏或經運用報道平安的自然材料敷面膜等)。一、單項選擇題1.下列有關微生物培育的敘述正確的是()A.通常運用液體培育基分別獲得細菌單菌落B.若培育基須要調整pH,應當在滅菌后進行C.用顯微鏡干脆計數固體培育基中微生物數量D.倒置平板可防止培育基被滴落的冷凝水污染1.答案D常用固體或半固體培育基分別獲得細菌單菌落,液體無法分別,A錯誤;若培育基須要調整pH,應當在滅菌前進行,B錯誤;顯微鏡干脆計數是測定培育液中微生物數量的方法,固體培育基上用涂布分別法干脆計數單個菌落數,C錯誤;平板倒置是為了避開冷凝的液體掉到培育基上,污染培育基,D正確。2.下表為某培育基的配方,下列敘述正確的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍蒸餾水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mLA.從物理性質看該培育基屬于液體培育基,從用途看該培育基屬于選擇培育基B.該培育基中屬于碳源的物質主要是葡萄糖,屬于氮源的物質是蛋白胨C.該培育基缺少供應生長因子的物質D.該培育基調整合適的pH后就可以接種運用2.答案B分析表中成分可知,該培育基中沒有凝固劑,為液體培育基,該培育基的養分成分齊全,但存在伊紅、美藍等鑒別物質,屬于鑒別培育基,A項錯誤;該培育基中的蛋白胨既是唯一的氮源,也是碳源,而葡萄糖是絕大多數生物最常利用的碳源,B項正確;該培育基中存在的無機鹽和蛋白胨中的某些物質可以看作是生長因子,C項錯誤;培育基調整完pH還要進行滅菌等操作后才能運用,D項錯誤。3.無菌技術包括以下幾個方面的敘述,其中正確的是()A.紫外線照耀前,適量噴灑石炭酸等消毒液,可以加強消毒效果B.高壓滅菌加熱結束時,打開放氣閥使壓力表指針回到零后,開啟鍋蓋C.為了防止污染,接種環經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D.在微生物接種的試驗中,用95%酒精對試驗者的雙手和超凈工作臺進行消毒3.答案A用紫外線照耀30min,可以殺死物體表面或空氣中的微生物,在照耀前,適量噴灑石炭酸等消毒液,可以加強消毒效果,A正確;高壓滅菌加熱結束時,待壓力表指針回到零后,才能開啟鍋蓋,不能打開放氣閥使壓力表指針回到零,B錯誤;接種環經火焰滅菌、冷卻后才可以快速挑取菌落,C錯誤;在微生物接種的試驗中,一般用75%酒精對試驗者的雙手進行消毒,用紫外線照耀30min對超凈工作臺進行滅菌,D錯誤。4.稀釋涂布平板法是微生物培育中的一種常用的接種方法。下列相關敘述錯誤的是()A.操作中須要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培育基表面C.不同濃度的菌液均可在培育基表面形成單個的菌落D.對培育基和涂布器等均需進行嚴格滅菌處理4.答案C只有菌液稀釋到肯定程度后,在固體培育基表面才能形成單個的菌落,否則可能會出現兩個或兩個以上的細菌共同形成一個菌落,或菌落重疊的現象。5.給無氮培育基接種土壤稀泥漿的正確方法是()A.打開培育皿蓋,取一根接種環蘸取少許稀泥漿,輕輕地點接在培育基的表面上B.取一根接種環在酒精燈的火焰上滅菌后蘸取少許稀泥漿,略微打開培育皿蓋,在培育基的表面輕點C.打開培育皿蓋,取一根接種環在酒精燈的火焰上滅菌后蘸取少許稀泥漿,在培育基的表面輕點D.略微打開培育皿蓋,取一根接種環在酒精燈的火焰上滅菌,冷卻后蘸取少許稀泥漿,在培育基的表面輕點5.答案D接種過程中要防止外來雜菌的入侵,左手將培育皿打開一條縫隙,右手將接種環在火焰上滅菌,冷卻后蘸取少許稀泥漿,在培育基的表面輕點,用未冷卻的接種環沾取稀泥漿會殺滅菌種。6.(2024吉林模擬)下面關于土壤中分解尿素的細菌的分別與計數的敘述中,正確的是()A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.篩選分解尿素的細菌時,應以尿素作為培育基中唯一的養分物質C.統計樣品中的活菌數目一般用平板劃線法D.在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑,若指示劑變藍,則表明篩選到了分解尿素的細菌6.答案A只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,A項正確;篩選分解尿素的細菌的試驗中,采納的是以尿素為唯一氮源的培育基,B項錯誤;統計樣品中的活菌數目一般用涂布平板法,C項錯誤;在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑,培育某種細菌后,假如pH上升,指示劑變紅,這樣就能初步鑒定該種細菌能夠分解尿素,D項錯誤。7.某探討小組從有機廢水中分別微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()A.滅菌后的培育基要冷卻到室溫后才能倒平板B.本探討相宜采納稀釋涂布平板法進行接種C.接種后的培育皿須放在光照培育箱中培育D.培育時要將培育皿倒置是防止空氣中雜菌污染7.答案B滅菌后的培育基須要冷卻到50℃左右后倒平板,再冷卻到室溫后將平板倒置保存。稀釋涂布平板法可以保證盡可能多地接種各種菌種,有利于篩選,平板劃線法接種適于分別純化微生物,而涂布法適于篩選和計數。從有機廢水中分別的微生物屬于異養型生物,不須要放在光照培育箱中培育。在培育基保存和培育的過程中,平板都必需保證倒置,以防止培育基中蒸發水分落入培育基造成污染。8.下列是關于“檢測土壤中細菌總數”試驗操作的敘述,其中錯誤的是()A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培育基,經高溫、高壓滅菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL,分別涂布于各組平板上C.將試驗組和比照組平板倒置,37℃恒溫培育24~48小時D.確定比照組無菌后,選擇菌落數在300以上的試驗組平板進行計數8.答案D首先要進行培育基的制備,用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培育基,經高溫、高壓滅菌后倒平板,A正確;取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL,然后將土壤稀釋液涂布于各組平板上,B正確;將試驗組和比照組平板倒置,37℃恒溫培育24~48小時,C正確;確定比照組無菌后,選擇菌落數在30~300的進行計數,求其平均值,再通過計算得出土壤中細菌總數,D錯誤。二、不定項選擇題9.下列有關試驗操作流程的敘述中,錯誤的是()A.制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的操作依次為計算→稱量→溶化→倒平板→滅菌B.腐乳制作過程可表示為讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制C.制備固定化酵母細胞的步驟是酵母細胞的活化→配制物質的量濃度為0.05mol/L的CaCl2溶液→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合D.果酒制作的試驗流程是選擇葡萄→沖洗→榨汁→酒精發酵→果酒9.答案AC制備牛肉膏蛋白胨固體培育基的操作依次為計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板,A錯誤;腐乳制作過程可表示為讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制,B正確;制備固定化酵母細胞的步驟是酵母細胞的活化→配制物質的量濃度為0.05mol/L的CaCl2溶液→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合→固定化酵母細胞,C錯誤;果酒制作的試驗流程是選擇葡萄→沖洗→榨汁→酒精發酵→果酒,D正確。10.細菌須要從外界汲取養分物質并通過代謝來維持正常的生長和繁殖。下列與此有關的說法錯誤的是()A.乳酸菌與硝化細菌所利用的碳源物質是相同的B.無機氮源不行能作為細菌的能源物質C.瓊脂是細菌生長和繁殖中不行缺少的一種物質D.以尿素為唯一氮源的培育基上長出的不都是尿素分解菌10.答案ABC乳酸菌是異養型微生物,須要有機碳源,而硝化細菌是自養型微生物,須要的碳源是CO2,故A項錯誤;有些無機氮源也可以供應能量,如硝化細菌可以利用氧化氨釋放的能量進行有機物的合成,故B項錯誤;培育基中的瓊脂是凝固劑,不會被微生物利用,故C項錯誤;自生固氮微生物可以利用大氣中的N2作為氮源,因此以尿素為唯一氮源的培育基上長出的不都是尿素分解菌,故D項正確。11.(2024山東模擬)生長圖形法是一種測定微生物養分需求的簡便方法。為探究某嗜熱菌所需生長因子的種類,探討小組把該菌的懸浮液與不含任何生長因子但含有其他必需養分物質的培育基混合后倒成平板,然后在平板上劃分數區,將甲、乙、丙三種生長因子分別添加到不同區域,培育結果如圖所示,下列說法正確的是()A.倒成平板后干脆培育可推斷有無污染B.倒成平板后須要進行滅菌處理C.圖示結果表明該菌須要生長因子乙或丙D.生長圖形法還可用于某些菌種的篩選11.答案AD平板上不含任何生長因子,若倒成平板后干脆培育,出現菌落說明已被雜菌感染,因為該嗜熱菌不能在缺乏生長因子的培育基中生長,A正確;制備平板時,先滅菌再倒平板,B錯誤;圖中菌落生活在乙丙區域之間,說明同時須要乙和丙,C錯誤;不同菌種所需生長因子不同,可利用生長圖形法篩選菌種,D正確。三、非選擇題12.在農業生產探討上,常須要進行微生物的分別和計數。(1)下表為兩種微生物的培育基配方:A組KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gB組纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g注:上述兩種培育基中的物質溶解后,均用蒸餾水定容至1000mL。①從功能上來看,上述兩種培育基均屬于培育基。

②假如要對土壤中分解尿素的細菌進行分別,則須要選擇(填“A”或“B”)培育基,該培育基中的碳源是。

③在分別尿素分解菌所用的培育基中可加入指示劑,依據指示劑的顏色可鑒定某種細菌能否分解尿素,若有分解尿素的細菌,培育基將會呈現。

(2)下圖是某同學采納的接種微生物的方法,請回答下列問題:①本試驗采納的接種微生物的方法是法,把聚集的菌種逐步分散到培育基的表面,為達到這一目的,操作上應留意: (至少答2項)。

②三位同學用涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數量,在對應稀釋倍數為106的培育基中,得到以下統計結果:甲同學涂布了兩個平板,統計的菌落數是236和260,取平均值248;乙同學涂布了三個平板,統計的菌落數是210、240和250,取平均值233;丙同學涂布了三個平板,統計的菌落數是21、212和256,取平均值163;在三位同學的統計中,同學的統計結果是正確的。

12.答案(1)①選擇②A葡萄糖③酚紅紅色(2)①平板劃線稀釋每次劃線前要灼燒接種環;冷卻后從上一次劃線的末端起先劃線②乙解析(1)①據題表中的培育基的配方分析可知,A組培育基中的氮源為尿素,是篩選尿素分解菌的選擇培育基。B組培育基中的碳源是纖維素,是篩選纖維素分解菌的選擇培育基。②對土壤中分解尿素的細菌進行分別時,須要運用以尿素為唯一氮源的選擇培育基,故應當選擇A組培育基,該培育基中的碳源是葡萄糖。③尿素分解菌可以用酚紅指示劑進行鑒定。尿素分解菌產生的脲酶能夠將尿素分解為氨而使培育基pH上升,使酚紅指示劑呈紅色。(2)①據圖