…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年魯教版選擇性必修3生物下冊月考試卷647考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共5題，共10分)1、不屬于動物細胞培養(yǎng)必需條件的是（）A.無菌、無毒的環(huán)境B.適宜的溫度和pHC.O2等氣體環(huán)境D.適宜的光照條件2、干細胞是一種尚未充分分化的未成熟的細胞，醫(yī)學家們正在嘗試利用干細胞治療一些頑疾，下列說法不正確的是（）A.各種組織干細胞分化形成不同組織細胞是基因選擇性表達的結果非B.利用干細胞治療某些頑疾，是因為干細胞具有再生各種組織，器官的潛能C.同一生物個體中，神經(jīng)細胞與干細胞所含有的遺傳物質(zhì)不同的D.干細胞包括成體干細胞和胚胎干細胞3、基因工程技術也稱DNA重組技術，其實施必須具備的4個必要條件是（）A.工具酶、目的基因、載體、受體細胞B.重組DNRNA聚合酶、限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶C.模板DN信使RN質(zhì)粒、受體細胞D.目的基因、限制性核酸內(nèi)切酶、載體、受體細胞4、“篩選”是生物工程中常用的技術手段。下列有關敘述錯誤的是（）A.基因工程育種時，需要篩選出含有目的基因的受體細胞B.單倍體育種時，需要對F1的花藥進行篩選后才可繼續(xù)組織培養(yǎng)C.胚胎移植前，需要對來自供體母牛子宮內(nèi)的胚胎進行質(zhì)量篩查D.制備單克隆抗體時，需從分子水平篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞5、科學家將葡萄糖異構酶的第138位甘氨酸用脯氨酸替代，結果它的最適溫度提高了10～12℃，據(jù)分析，脯氨酸替代甘氨酸后，由于引入了一個吡咯環(huán)側鏈，剛好填充于138位甘氨酸附近的空洞，使蛋白質(zhì)空間結構更具剛性，從而提高了酶的熱穩(wěn)定性。下列說法正確的是（）A.蛋白質(zhì)工程和基因工程的根本區(qū)別是操作對象的差異B.對葡萄糖異構酶的改造需要進行蛋白質(zhì)結構的設計C.蛋白質(zhì)工程操作過程中，不需要酶和載體作為工具D.經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造后的葡萄糖異構酶熱穩(wěn)定性提高這一性狀不可遺傳評卷人得分二、多選題(共5題，共10分)6、熒光定量PCR技術可定量檢測樣本中DNA含量，也可用于RNA病毒的核酸檢測。其原理是：先由病毒的RNA逆轉錄得到cDNA，然后對得到的DNA進行PCR擴增。在PCR反應體系中加入引物的同時，加入與某條模板鏈互補的熒光探針，當Taq酶催化子鏈延伸至探針處會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接受到熒光信號，即每個DNA分子擴增一次，就有一個熒光分子生成（如圖）。Ct值（循環(huán)閾值）的含義為：每個反應管內(nèi)的熒光信號到達設定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。下列說法錯誤的是（）

A.擴增過程中引物先于探針結合到模板DNA上B.若最初該反應體系中只有逆轉錄而來的一個DNA分子，經(jīng)n次循環(huán)后，需要消耗熒光探針2n-1個C.C值越大表示被檢測樣本中病毒數(shù)目越多D.若樣本被污染，RNA酶將病毒RNA降解，檢測結果可能為陰性7、下列有關哺乳動物胚胎發(fā)育和胚胎工程的敘述，錯誤的是（）A.克隆羊、試管羊、轉基因羊的繁殖方式都是有性生殖B.胚胎干細胞在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)可維持只增殖不分化狀態(tài)C.受精時防止多精入卵的兩屏障是頂體反應和卵細胞膜反應D.滋養(yǎng)層細胞在囊胚期發(fā)育成胎膜和胎盤并可用于性別鑒定8、大多數(shù)哺乳動物的早期胚胎具有調(diào)節(jié)發(fā)育的功能，去掉早期胚胎的一半，仍可以發(fā)育成一個完整的胎兒，調(diào)節(jié)能力隨著發(fā)育進程逐漸減弱甚至消失。晚期桑椹胚分割后分離的卵裂球仍具有調(diào)整發(fā)育的能力，重新致密化使卵裂球重新分布而發(fā)育至囊胚。下列說法正確的是（）A.桑椹胚的每一個細胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能B.桑椹胚不同部位的細胞致密化程度不同C.胚胎分割屬于無性繁殖或克隆的范疇D.胚胎發(fā)育到原腸胚階段，可將其取出向受體移植9、小鼠胚胎干細胞經(jīng)定向誘導可獲得多種功能細胞、制備流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（）

A.為獲得更多的囊胚，采用激素注射促進雄鼠產(chǎn)生更多的精子B.細胞a和細胞b內(nèi)含有的核基因不同，所以全能性高低不同C.用胰蛋白酶將細胞a的膜蛋白消化后可獲得分散的胚胎干細胞D.胚胎干細胞和誘導出的各種細胞都需在CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)10、抗體的結構分為V區(qū)（識別并結合抗原的區(qū)域）和C區(qū)（抗體的支架），鼠源抗體具有外源性，會被人體免疫系統(tǒng)當作抗原而清除。用人抗體的C區(qū)替換鼠源抗體的C區(qū)，保留鼠單抗的V區(qū)，可構建人一鼠嵌合抗體，操作流程如圖所示。下列相關說法錯誤的是（）

A.與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞為能分泌抗體的漿細胞B.用選擇性培養(yǎng)基可篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞C.為獲得結構正確的嵌合抗體，受體細胞應選用大腸桿菌D.人一鼠嵌合抗體在保留抗體特異性的同時外源性下降評卷人得分三、填空題(共9題，共18分)11、基因工程的原理是_____，又叫_____或_____。通俗地說，就是按照_____，把一種生物的_____提取出來，加以_____，然后放到_____，_____地改造生物的遺傳性狀。12、載體具備的條件：①_____。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③______。13、兩種DNA連接酶（E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：

①相同點：都縫合______鍵。

②區(qū)別：E·coliDNA連接酶來源于T4噬菌體，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶能縫合兩種末端，但連接平末端的之間的效率較低。14、重組DNA或重組質(zhì)粒導入受體細胞后，篩選______的依據(jù)是______。15、其它載體：_______16、沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌；被感染了沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染的食品，會使人發(fā)生食物中毒。沙門氏菌的最適繁殖溫度為37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其對熱抵抗力不強，在60℃的條件下15min就能被殺死。肉桂精油是從肉桂樹中提煉獲得的，具有不溶于水；易溶于有機溶劑且易揮發(fā)的特性，能抑制沙門氏菌的繁殖?；卮鹣铝袉栴}：

（1）培養(yǎng)沙門氏菌時要進行無菌操作，常用的滅菌方法有________（答出兩種）。用平板培養(yǎng)沙門氏菌時一般需要將平板________（填“倒置”或“正置”）。單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小和顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是________。

（2）從雞糞便取樣，經(jīng)選擇培養(yǎng)后需要經(jīng)過一系列________才能將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上。對獲得的沙門氏菌常采用________的方法長期保存。

（3）根據(jù)題干信息，為避免食用被沙門氏菌污染的食品而引發(fā)的食物中毒，家庭中儲存、加工食品的方法是________。

（4）根據(jù)肉桂精油的化學特性，可采用________法來提取，提取過程中影響精油品質(zhì)的因素有________。17、注意：a生理基礎：______，______

b植物細胞融合前需用______和______除去細胞壁18、蛋白質(zhì)工程在生物制藥上有廣泛的應用。如果已經(jīng)確認某種新蛋白質(zhì)可能具有特殊的抗癌功能，其氨基酸序列也已經(jīng)確認，如何通過蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)這種新藥？如果回答有困難，可以向老師請教或通過互聯(lián)網(wǎng)查找答案。_____19、基因表達載體的組成及其作用。

一個基因表達載體的組成，除了______________、_______________外，還必須有__________、______________等(如圖所示)。

①______________②______________③______________

④______________⑤______________⑥______________

⑦______________評卷人得分四、判斷題(共2題，共18分)20、轉基因生物可能會破壞生態(tài)平衡（______）A.正確B.錯誤21、動物細胞核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術，體現(xiàn)了動物細胞的全能性。（選擇性必修3P52）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共3題，共30分)22、番茄果實在成熟的過程中；多聚半乳糖醛酸酶（PG）合成顯著增加，以降解果膠使細胞壁破損，從而使果實變紅變軟，但不利于保鮮?？茖W家利用基因工程得到轉基因番茄，大大延長果實保質(zhì)期。操作流程如下，回答下列問題：

（1）利用RT—PCR技術即逆轉錄—多聚酶鏈式反應制備PG基因，最好從番茄的_____細胞中提取mRNA，此技術所需要的酶主要有_____。

（2）據(jù)圖可知，轉基因番茄主要通過抑制PG基因的_____過程；使PG合成量減少，從而延長果實保質(zhì)期。

（3）圖中的農(nóng)桿菌。能夠在含_____的培養(yǎng)基中生存，而在含_____的培養(yǎng)基中不能生存的即為已轉化的所需農(nóng)桿菌。

（4）圖中將反向連接PC基因?qū)敕鸭毎姆椒ǚQ為_____。要檢測感染農(nóng)桿菌后的番茄細胞染色體DNA上是否插入了反向連接PC基因，_____（填“能”或“不能”）用標記的PG基因的單鏈作為探針進行檢測，理由是_____。

（5）在將轉化的番茄細胞通過植物組織培養(yǎng)技術形成番茄幼苗過程中，培養(yǎng)基_____（填“要”或“不要”）添加有機營養(yǎng)物質(zhì)，原因是_____。23、使用日益廣泛的手機；在方便人們通訊聯(lián)絡的同時也成為細菌等病原體傳播的途徑。為了解手機上細菌的情況，某興趣小組進行了如下實驗，請回答相關問題：

(1)取附著在手機上細菌進行取樣培養(yǎng)后，對菌液進行系列梯度稀釋的目的是_______。

(2)A平板上生長的菌落有多種形態(tài)，說明附著在手機細菌有____種。若要使菌落能在A平板上生長，下列培養(yǎng)基組分中最合理的是_____(選填“甲、乙、丙”)，原因是_____?？刹扇___________來檢測培養(yǎng)基A制備是否合格。培養(yǎng)基編號培養(yǎng)基組分甲蔗糖、NaC1、瓊脂、水乙牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、水丙蛋白胨、NaCl、蔗糖、水

(3)初篩后將平板B的菌落通過“影印”方法接種到C培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使C培養(yǎng)基對應位置上出現(xiàn)相同菌落。然后用伊紅-美藍染液對C進行染色，根據(jù)染色后D中出現(xiàn)的結果，可判斷平板B中______(選填圖中數(shù)字)是大腸桿菌的菌落。

(4)某同學采用平板劃線法進一步純化大腸桿菌，接種培養(yǎng)一段時間后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)不間斷長滿菌落，第二劃線區(qū)上幾乎無菌落，產(chǎn)生此情況的可能原因____________。24、丙肝病毒引起的丙型肝炎可導致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化；部分患者可能發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。為研制丙肝病毒的單克隆抗體，某研究者以小鼠為實驗材料設計了以下實驗流程?；卮鹣铝袉栴}：

(1)為使單細胞懸液中的B淋巴細胞產(chǎn)生的抗體中一定含有能與丙肝病毒結合的抗體，需要進行的操作是______。融合之前的兩種細胞中，能通過動物細胞培養(yǎng)大量增加數(shù)量的是____

(2)誘導細跑融合時利用的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶，能夠與細胞膜上的______（填化學本質(zhì)）發(fā)生作用，使得細胞互相凝聚，細胞膜上的______重新排布，細胞發(fā)生融合。篩選1利用______進行篩選，而篩選2通過多次的_______來完成。

(3)得到大量丙肝病毒單克隆抗體的方法之一是將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，接入培養(yǎng)液中雜交瘤細胞的量是單克隆抗體產(chǎn)量的重要影響因素之一，為探究一定培養(yǎng)液中接種雜交瘤細胞的最佳數(shù)量，實驗思路為_______。評卷人得分六、綜合題(共4題，共16分)25、2020年諾貝爾化學獎授予兩位女科學家?，敿~埃爾·卡彭蒂娜和詹妮弗·杜德娜以表彰她們對CRISPR基因編輯技術原理解析做出的貢獻。單細胞生物并沒有免疫系統(tǒng)；但是科學家發(fā)現(xiàn)細菌中存在清除入侵病毒DNA的功能系統(tǒng)，并發(fā)明了CRISPR/Cas9基因編輯技術。該系統(tǒng)主要包含單鏈向?qū)NA和Cas9蛋白兩個部分，能特異性識別并結合特定的DNA序列，從而引導Cas9蛋白到相應位置并剪切DNA，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。請回答下列問題：

（1）圖1為CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖，該系統(tǒng)能精準識別相關基因的原理是單鏈向?qū)NA與目標DNA發(fā)生________，Cas9蛋白可催化________（化學鍵名稱）水解；剪切特定DNA片段。

（2）CRISPR/Cas9系統(tǒng)廣泛存在于原核生物中，細菌這種清除入侵病毒DNA的生理意義是________________________。

（3）真核生物中沒有編碼Cas9蛋白的基因，若要對真核生物的基因進行編輯，要借助現(xiàn)代生物技術將CRISPR/Cas9基因?qū)胂嚓P細胞，此項技術的原理是____________。

（4）水稻不育系的選育是雜交水稻育種工作中的關鍵環(huán)節(jié)。為了獲得某水稻品種的不育系；研究人員對該水稻品種的TMS5基因進行編輯，基因編輯過程如圖2。

①Cas9蛋白對TMS5基因剪切后（a），斷裂后的DNA分子會自動進行修復，修復過程中在b所示位點插入堿基A之后兩個片段在________酶作用下得到編輯成功的TMS5基因，此過程導致的變異屬于________。

②在編輯成功的TMS5基因上游連接啟動子，可作為____________識別和結合的部位，后組裝形成基因表達載體。再通過農(nóng)桿菌侵染水稻愈傷組織，并整合到水稻細胞的________上，愈傷組織再經(jīng)過____________過程形成水稻幼苗。

③基因編輯中插入堿基A，會導致翻譯提前終止，使TMS5基因表達的蛋白質(zhì)不能產(chǎn)生，最終導致水稻花粉不育。用抗原—抗體雜交技術檢測TMS5基因編輯是否成功，若________（填“出現(xiàn)”或“未出現(xiàn)”）雜交帶；則表明基因編輯成功。

（5）華人科學家張鋒是首個將CRISPR基因編輯技術應用于哺乳動物和人類細胞的科學家，為此項技術廣泛應用于生命科學和醫(yī)學領域做出了不可磨滅的貢獻。但是更多的學者提出了CRISRP/Cas9基因編輯技術有時存在編輯對象出錯而造成“脫靶”，實驗發(fā)現(xiàn)RNA的序列長短影響成功率，越短脫靶率越________。試分析脫靶最可能的原因：____________。26、基因工程制藥是制藥行業(yè)常用的一種方法。下圖為利用轉基因工程菌生產(chǎn)干擾素的過程；請據(jù)圖回答下列問題：

（1）基因工程的操作步驟中，步驟②為____________，該步驟的目的是____________。

（2）圖中③過程常用Ca2+處理大腸桿菌，使大腸桿菌細胞成為____________。

（3）影印培養(yǎng)法是一種類似“蓋章”的接種方法，使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落。為了篩選出含有目的基因的受體細胞，在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中應分別添加____________、____________（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）。根據(jù)圖中結果判斷，含有目的基因的是______（填培養(yǎng)基中的數(shù)字）號菌落中的細胞，判斷依據(jù)是____________。27、新型冠狀病毒（2019-nCoV；一種RNA病毒）的S蛋白和N蛋白都是誘發(fā)機體免疫反應的主要抗原。病毒載體疫苗是研制新冠病毒疫苗的技術路線之一，下圖是生產(chǎn)重組腺病毒疫苗的流程?；卮鹣铝袉栴}∶

（1）制備新冠病毒疫苗時，需將獲得的目的基因轉入轉移載體pShuttle質(zhì)粒，圖中的目的基因應選用___________。不能直接從2019-nCoV的基因組中獲取目的基因，理由是__________。

（2）pAdEasy質(zhì)?？杀磉_出腺病毒，除了啟動子、終止子、復制原點外，其相關基因序列還包含_____________（答兩種），過程①需要的酶是________。

（3）若PacⅠ酶在過程②中使用，該酶所作用的化學鍵是____。線性pAd需要轉入特定細胞才能產(chǎn)生重組腺病毒，理由是_________________。據(jù)圖分析，與重組pAd相比，線性pAd對人體相對安全，理由是___________________。

（4）通常將重組腺病毒進行_______，可使人獲得新冠病毒的免疫力。28、我國衛(wèi)生部門規(guī)定飲用水標準是1mL自來水中細菌總數(shù)不超過100個(37°C培養(yǎng)24h)；1000mL自來水中大腸桿菌菌落數(shù)不能超過3個(37°C培養(yǎng)48h)。水中大腸桿菌的含量常采用伊紅—亞甲基藍瓊脂培養(yǎng)基進行檢測，生長在此培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色且?guī)в薪饘俟鉂?。某校生物興趣小組開展校園桶裝純凈水微生物含量檢測活動，請回答問題:

(1)檢測飲用水中的細菌，需要配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，牛肉膏和蛋白胨可以為細菌生長提供_____(至少寫出兩點)等營養(yǎng)物質(zhì)。從物理狀態(tài)角度分析，此培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基。

(2)某同學分別向3個培養(yǎng)基中各加入1mL，未經(jīng)稀釋的待測水樣，涂布均勻后置于37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，結果如圖1所示。檢測時使用的接種量為1mL而不是0，1mL，其理由是________。

(3)下圖2為用濾膜法測定飲用水中大腸桿菌數(shù)目的流程示意圖；請完成下表。

實驗步驟的目的簡要操作過程①_____將濾膜放入裝有蒸餾水的燒杯中，加熱煮沸15min，共煮沸三次過濾細菌裝置安裝好后，向漏斗內(nèi)加入1000mL水樣，加蓋抽濾。沖洗漏斗壁再向漏斗內(nèi)加等量②____繼續(xù)抽濾。③_____用無菌鑷子取濾膜，將其緊貼在伊紅一亞甲基藍瓊脂平板上，然后將平板④_____，37℃培養(yǎng)48小時統(tǒng)計大腸桿菌菌落數(shù)選?、輄____的菌落進行計數(shù)，統(tǒng)計結果為2個

(4)綜合(2)(3)測定結果，你認為所測桶裝純凈水的微生物含量△(填能或不能)達到飲用水衛(wèi)生標準，理由是________。(寫出兩點)參考答案一、選擇題(共5題，共10分)1、D【分析】【分析】

動物細胞培養(yǎng)必需條件包括：無菌、無毒的環(huán)境，適宜的溫度和pH，O2等氣體環(huán)境。

【詳解】

分析可知，適宜的光照條件不屬于動物細胞培養(yǎng)的必需條件，故選D。2、C【分析】【分析】

1；胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞；來源于早期胚胎或原始性腺。

2；胚胎干細胞的特點：具有胚胎細胞的特性；體積較小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物任何一種組織細胞。另一方面，在體外培養(yǎng)條件下，ES細胞可不斷增殖而不發(fā)生分化，可進行冷凍保存，也可以進行某些遺傳改造。

3；胚胎干細胞的主要用途是：

①可用于研究哺乳動物個體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；

②是在體外條件下研究細胞分化的理想材料。ES細胞在飼養(yǎng)層細胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中；能夠維持不分化的狀態(tài)。在培養(yǎng)液中加入分化誘導因子，如牛黃酸；丁酰環(huán)腺苷酸等化學物質(zhì)時，就可以誘導ES細胞向分化，這為揭示細胞分化和細胞凋亡機理提供了有效的手段；

③可以用于治療人類的某些頑疾；如帕金森綜合癥；糖尿病、老年癡呆癥、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；

④培育各種組織器官；用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題。

【詳解】

A；細胞分化是基因選擇性表達的結果；A正確；

B；干細胞具有發(fā)育的全能性；可以分化成成年動物的各種組織、器官，故可利用干細胞治療某些頑疾，B正確；

C；同一個體的神經(jīng)細胞和干細胞均是由受精卵通過細胞分裂和細胞分化形成的；遺傳物質(zhì)相同，C錯誤；

D；干細胞包括成體干細胞和胚胎干細胞；D正確。

故選C。3、A【分析】【分析】

基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運載體：常用的運載體：質(zhì)粒；噬菌體的衍生物、動植物病毒。

【詳解】

A；限制酶和DNA連接酶屬于工具酶；另外運載體、目的基因和受體細胞是基因工程中的必需具備的條件，A正確；

B；重組DNA是由目的基因和質(zhì)粒重組形成的；RNA聚合酶是轉錄需要的酶，細胞中具有該種酶，因此不是基因工程必需的條件，B錯誤；

C；信使RNA是基因轉錄的產(chǎn)物；基因工程中不需要提供該物質(zhì)，質(zhì)粒是運載體中的一種，除了質(zhì)粒還有動植物病毒和噬菌體衍生物，因此質(zhì)粒不是基因工程中必須的，C錯誤；

D；目的基因、限制酶、運載體、受體細胞是基因工程必需具備的條件；此外還需要DNA連接酶，D錯誤。

故選A。

【點睛】4、B【分析】【分析】

1；標記基因的作用：鑒定受體細胞中是否含有目的基因；從而將含有目的基因的細胞篩選出來。

2；單倍體育種過程中包括兩個技術：花藥離體培養(yǎng)、秋水仙素處理單倍體幼苗。

3；胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體；有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體．用激素進行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理）；②配種或人工授精；③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進行質(zhì)量檢查，此時的胚胎應發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段）；④對胚胎進行移植；⑤移植后的檢查。

4；單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

【詳解】

A；基因工程育種時；需要通過標記基因，篩選出含有目的基因的受體細胞，A正確；

B、單倍體育種中，通過對F1的花藥離體培養(yǎng)獲得的單倍體；需要利用秋水仙素處理幼苗使染色體加倍后，才能篩選出符合要求的品種，B錯誤；

C；胚胎移植前；需要對來自供體母牛子宮內(nèi)的胚胎進行質(zhì)量篩查，一般選擇滋養(yǎng)層細胞檢測，因為內(nèi)細胞團將來發(fā)育成胎兒各組織，C正確；

D；單克隆抗體制備過程中；第一次篩選出雜交瘤細胞，第二次從分子水平篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞，D正確。

故選B。

【點睛】5、B【分析】【分析】

蛋白質(zhì)工程就是通過對蛋白質(zhì)化學；蛋白質(zhì)晶體學和蛋白質(zhì)動力學的研究；獲得有關蛋白質(zhì)理化特性和分子特性的信息，在此基礎上對編碼蛋白質(zhì)的基因進行有目的的設計和改造，通過基因工程技術獲得可以表達蛋白質(zhì)的轉基因生物系統(tǒng)，這個生物系統(tǒng)可以是轉基因微生物、轉基因植物、轉基因動物，甚至可以是細胞系統(tǒng)。

【詳解】

A；蛋白質(zhì)工程和基因工程都要對基因進行操作；其操作對象相同，A錯誤；

B；對葡萄糖異構酶的改造屬于蛋白質(zhì)工程；需要進行蛋白質(zhì)結構的設計，B正確；

C；蛋白質(zhì)工程要通過基因工程實施；需要酶和載體作為工具，C錯誤；

D；蛋白質(zhì)工程通過基因修飾或基因合成；由于是對基因進行的改造，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，屬于可遺傳的變異，D錯誤。

故選B。二、多選題(共5題，共10分)6、A:B:C【分析】【分析】

多聚酶鏈式反應擴增DNA片段：

1；PCR原理：在解旋酶作用下；打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細胞內(nèi)DNA的復制過程。DNA的復制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。

2；PCR反應過程是：變性→復性→延伸。

【詳解】

A；基因擴增過程中需要特定的引物；該引物的作用是定位基因的位置，與模板鏈結合并為子鏈的延伸提供起點，擴增過程中引物和探針應同時結合到模板DNA上，A錯誤；

B、若最初該反應體系中只有逆轉錄而來的一個DNA分子，每個DNA分子需要1個探針，擴增n次，可得到2n個DNA分子，則共需要消耗2n-1個探針；B錯誤；

C；由題可知C值越大；該反應管內(nèi)的熒光信號到達設定閾值經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越大，即每次循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號越少。每次循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號越少，代表被檢測樣本中的病毒數(shù)目越少，C錯誤；

D；如果樣本內(nèi)的病毒RNA被降解；會導致無法檢測出樣本內(nèi)的正確病毒數(shù)目，D正確。

故選ABC。7、A:C:D【分析】【分析】

哺乳動物的胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞；是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞。ES細胞具有胚胎細胞的特性，在形態(tài)上，表現(xiàn)為體積小；細胞核大、核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細胞。另外，在體外培養(yǎng)條件下，ES可以增殖而不發(fā)生分化。ES細胞在飼養(yǎng)層細胞上，或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中能夠維持不分化狀態(tài)。

【詳解】

A；試管羊、轉基因羊的繁殖方式都是有性生殖；克隆羊的繁殖方式屬于無性生殖，A錯誤；

B；胚胎干細胞在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)可維持只增殖不分化狀態(tài)；B正確；

C；受精時防止多精入卵的兩屏障是透明帶反應和卵細胞膜反應；C錯誤；

D；囊胚期的滋養(yǎng)層細胞可用于性別鑒定；將來可以發(fā)育成胎膜和胎盤，D錯誤。

故選ACD。8、A:C【分析】【分析】

當胚胎細胞數(shù)目達到32個左右時；胚胎形成致密的細胞團，形似桑椹，叫做桑椹胚；實驗證實，這一階段前的每一個細胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，屬于全能細胞，這些細胞都是由受精卵經(jīng)有絲分裂產(chǎn)生的。

【詳解】

A；桑椹胚前的每一個細胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能；屬于全能細胞，A正確；

B；囊胚期細胞可分化內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層兩部分；不同部位的細胞致密化程度有差異，桑椹胚不同部位的細胞致密化程度相同，B錯誤；

C；胚胎分割是指采用機械方法將早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等；經(jīng)移植獲得同卵雙胚或多胚的技術，胚胎分割屬于無性繁殖或克隆的范疇，C正確；

D；胚胎移植一般選擇桑椹胚或囊胚期進行；D錯誤。

故選AC。9、A:B:C【分析】【分析】

1；胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞；來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細胞團）。

2；ES細胞在飼養(yǎng)層細胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中；能夠維持不分化的狀態(tài)．在培養(yǎng)液中加入分化誘導因子，如牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學物質(zhì)時，就可以誘導ES細胞向不同類型的組織細胞分化，這為揭示細胞分化和細胞凋亡機理提供了有效的手段。

【詳解】

A；為了獲得更多的囊胚；可以采用激素促進成熟雌性個體超數(shù)排卵，然后將卵細胞從母體內(nèi)取出，在試管內(nèi)與人工采集的精子進行體外受精，培育成胚胎，A錯誤；

B、細胞a和細胞b是由同一個受精卵經(jīng)過有絲分裂形成的；故核基因相同，B錯誤；

C；運用細胞培養(yǎng)技術可以從哺乳動物的早期胚胎中獲得胚胎干細胞；首先必須用胰蛋白酶處理內(nèi)細胞團，分解細胞間的膠原蛋白等，使之分散成單個細胞，C錯誤；

D、動物細胞培養(yǎng)時需要在5%CO2的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；以維持培養(yǎng)液的pH，D正確。

故選ABC。10、A:B:C【分析】【分析】

1；骨髓瘤細胞為無限增殖的細胞；分裂能力強，制備單克隆抗體的過程中還需該雜交細胞具備分泌特異性抗體的功能，而漿細胞為能夠分泌抗體的細胞，故與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞為能分泌抗體的漿細胞。

2；骨髓瘤細胞與B淋巴細胞在融合的過程中可能會出現(xiàn)多種融合結果；如骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞融合，B淋巴細胞與B淋巴細胞融合，而實驗需要的是骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合的細胞，需要用選擇性培養(yǎng)基進行篩選，但只能篩選出能雜交瘤細胞，而要篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞則需要進行專一性抗體檢測。

【詳解】

A；與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞取自脾臟；不一定是能分泌抗體的漿細胞，A錯誤；

B；骨髓瘤細胞與B淋巴細胞在融合的過程中可能會出現(xiàn)多種融合結果；如骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞融合，B淋巴細胞與B淋巴細胞融合，而實驗需要的是骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合的細胞，需要用選擇性培養(yǎng)基進行篩選，但是只能篩選出能雜交瘤細胞，而要篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞則需要進行專一性抗體檢測，B錯誤；

C；抗體為分泌蛋白；需要內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對其進行加工，大腸桿菌為原核生物，無高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，為獲得結構正確的嵌合抗體，受體細胞不應該選用大腸桿菌，C錯誤；

D；結合題干“鼠源抗體具有外源性；會被人體免疫系統(tǒng)當作抗原而清除。用人抗體的C區(qū)替換鼠源抗體的C區(qū)，保留鼠單抗的V區(qū)，可構建人一鼠嵌合抗體”可知，該抗體不是原本的鼠源抗體，保留了其V區(qū)，但是其中還有一部分來自于人本身，使得人一鼠嵌合抗體在保留抗體特異性的同時外源性下降，D正確。

故選ABC。三、填空題(共9題，共18分)11、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】基因重組基因拼接技術DNA重組技術人們意愿某種基因修飾改造另一種生物細胞里定向12、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇13、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】磷酸二酯14、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】含有基因表達載體受體細胞標記基因是否表達。15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】噬菌體、動植物病毒16、略

【分析】【分析】

微生物實驗中常用的滅菌方法有干熱滅菌；高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌；其中對于培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌，對于接種環(huán)一般用灼燒滅菌，對于培養(yǎng)皿等可以用干熱滅菌。培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中需要倒置培養(yǎng)，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法，即將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)，當菌落長成后將試管放入4℃的冰箱中保藏，以后每3-6個月都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉移到新鮮的培養(yǎng)基上；對于需要長期保存的菌種可以采用甘油管藏法，在3mL的甘油瓶中裝入1mL甘油后滅菌，將1mL培養(yǎng)的菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后放在-20℃的冷凍箱中保存。植物有效成分的提取方法主要有蒸餾法、壓榨法和萃取法，如玫瑰精油的化學性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾，常采用蒸餾法提取；對于如橘皮精油，其主要儲存在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生部分水解，又會產(chǎn)生原料焦糊問題，所以一般采用壓榨法提取。

【詳解】

（1）微生物培養(yǎng)中常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法；灼燒滅菌法、干熱滅菌法等。用平板培養(yǎng)沙門氏菌時一般需要將平板倒置；可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因此單個細菌在平板上會形成菌落，通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小和顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物。

（2）從雞糞便取樣；經(jīng)選擇培養(yǎng)后，如果要將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上，需要經(jīng)過一系列梯度稀釋。對獲得的沙門氏菌進行長期保存常采用甘油管藏法。

（3）根據(jù)題干信息；沙門氏菌的最適繁殖溫度為37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其對熱抵抗力不強，在60℃的條件下15min就能被殺死，因此為避免食用被沙門氏菌污染的食品而引發(fā)的食物中毒，家庭中可采取低溫儲存；高溫加工方法進行處理。

（4）根據(jù)題意；肉桂精油不溶于水；易溶于有機溶劑且易揮發(fā)，故可采用水蒸氣蒸餾法進行提取，提取過程中蒸餾的溫度、時間都會影響精油品質(zhì)。

【點睛】

本題主要考查現(xiàn)代生物科技的原理和運用，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡結構的能力，能運用所學知識，準確判斷問題的能力?！窘馕觥孔茻郎缇ā⒏邏赫羝麥缇?、干熱滅菌法倒置在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征梯度稀釋甘油管藏低溫儲存、高溫加工水蒸氣蒸餾蒸餾的溫度、時間17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】細胞膜流動性植物細胞全能性纖維素酶果膠酶18、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設計預期的蛋白質(zhì)結構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的脫氧核苷酸序列，以下按照基因工程的一般步驟進行。該蛋白質(zhì)的氨基酸序列已知，因此通過蛋白質(zhì)工程，生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥的基本過程為：根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構建形成基因表達載體→將重組質(zhì)粒導入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥?！窘馕觥扛鶕?jù)已知的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構建形成基因表達載體→將重組質(zhì)粒導入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥19、略

【分析】略【解析】目的基因標記基因啟動子終止子啟動子上游RNA聚合酶終止子下游轉錄標記四、判斷題(共2題，共18分)20、A【分析】【詳解】

轉基因生物可能會破壞生態(tài)平衡，特別是對生物多樣性的影響。大自然經(jīng)過億萬年的演化，各種生物相對處于一種和諧的生態(tài)平衡狀態(tài)。但是，如果我們用轉基因技術把某種生物人為地變得更加“強悍”，那其他物種就會衰敗以至滅絕，故本題正確。21、B【分析】【詳解】

動物細胞核移植技術體現(xiàn)了動物細胞核的全能性，不能體現(xiàn)動物細胞的全能性，高度分化的動物細胞的全能性受到了限制，故錯誤。五、實驗題(共3題，共30分)22、略

【分析】【分析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因；啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同；導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因??DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA??分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）利用RT—PCR技術即逆轉錄—多聚酶鏈式反應制備PG基因；由于多聚半乳糖醛酸酶（PG）可降解果膠使細胞壁破損，從而使果實變紅變軟，說明PG基因在果肉中表達量較高，所以最好從番茄的果肉細胞中提取mRNA，此技術所需要的酶主要有逆轉錄酶和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）；

（2）據(jù)圖可知；轉基因番茄PG基因與反向連接PG基因的轉錄產(chǎn)物mRNA1和mRNA2相結合形成雙鏈，從而抑制PG基因的翻譯過程，使PG合成量減少，從而延長果實保質(zhì)期；

（3）分析表達載體的構建過程圖可知；目的基因插入到圖中農(nóng)桿菌的四環(huán)素抗性基因上，導致農(nóng)桿菌失去了四環(huán)素的抗性，所以圖中農(nóng)桿菌能夠在含卡那霉素的培養(yǎng)基中生存，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生存的即為已轉化的所需農(nóng)桿菌；

（4）圖中是利用農(nóng)桿菌將反向連接PC基因?qū)敕鸭毎模淮朔椒ǚQ為農(nóng)桿菌轉化法。不能用標記的PG基因的單鏈作為探針進行檢測番茄細胞染色體DNA上是否插入了反向連接PC基因，理由是番茄細胞內(nèi)原有的天然PG基因和插入的反向連接PG基因，均會與該探針形成雜交帶；

（5）將轉化的番茄細胞通過植物組織培養(yǎng)技術形成番茄幼苗過程中；需要在培養(yǎng)基中添加有機營養(yǎng)物質(zhì)，原因是該培養(yǎng)過程中植物細胞不能進行光合作用（或光合作用很弱）。

【點睛】

本題結合圖解，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟；識記植物組織培養(yǎng)的過程及應用，能結合圖中信息準確答題?！窘馕觥抗饽孓D錄酶和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）翻譯卡那霉素四環(huán)素農(nóng)桿菌轉化法不能番茄細胞內(nèi)原有的天然PG基因和插入的反向連接PG基因，均會與該探針形成雜交帶要該培養(yǎng)過程中植物細胞不能進行光合作用（或光合作用很弱）23、略

【分析】【分析】

1、微生物常見的接種的方法：

（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2、實驗室常用的滅菌方法

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)；為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。

(1)

取附著在手機上細菌進行取樣培養(yǎng)后；對菌液進行系列梯度稀釋的目的是將微生物分散成單個細胞，進而獲得單個的菌落。

(2)

A平板上生長的菌落有多種形態(tài)；說明附著在手機細菌種類較多。牛肉膏；蛋白胨提供的主要營養(yǎng)是氮源、維生素和生長因子。培養(yǎng)基乙含有碳源、氮源、水、無機鹽這幾類營養(yǎng)物質(zhì)，且加入了瓊脂作為凝固劑，可以達到實驗效果；培養(yǎng)基甲不含蛋白胨（氮源），菌落無法在該培養(yǎng)基上生長；培養(yǎng)基丙不含凝固劑（瓊脂），無法形成固體培養(yǎng)基，無法在培養(yǎng)基表面形成菌落。檢測培養(yǎng)基A制備是否合格，可將培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測其是否雜菌生成。

(3)

伊紅為酸性染料；美藍為堿性染料。當大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。由圖可知3號菌落為大腸桿菌菌落。

(4)

采用平板劃線法接種培養(yǎng)一段時間后；發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域上都不間斷長滿菌落，第二劃線區(qū)域幾乎無菌落，原因可能是接種環(huán)灼燒后未冷卻就劃線或未從第一區(qū)域末端開始劃線。

【點睛】

本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記微生物接種的方法、菌落計數(shù)、以及菌種保存等知識，意在考查考生對基礎知識的掌握和靈活運用基礎知識的能力。【解析】(1)將微生物分散成單個細胞；進而獲得單個的菌落。

(2)多乙培養(yǎng)基乙含有碳源；氮源、水、無機鹽這幾類營養(yǎng)物質(zhì)；且加入了瓊脂作為凝固劑，可以達到實驗效果將培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測其是否雜菌生成。

(3)3

(4)第一次劃線后接種環(huán)灼燒后沒有冷卻；未從第一次劃線區(qū)開始劃線24、略

【分析】【分析】

單克隆抗體的制備過程：（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原；然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應的B淋巴細胞。（2）獲得雜交瘤細胞：①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

【詳解】

（1）用丙肝病毒對小鼠進行免疫后；小鼠的B淋巴細胞能產(chǎn)生抗丙肝病毒的抗體，從該小鼠的脾細胞中能獲得產(chǎn)生該抗體的B淋巴細胞。B淋巴細胞在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖，而骨髓瘤細胞能無限增殖，故融合之前的兩種細胞中，能通過動物細胞培養(yǎng)大量增加數(shù)量的是骨髓瘤細胞。

（2）誘導細胞融合的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶；能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使得細胞互相凝聚，細胞膜具有一定的流動性，在滅活病毒的誘導下，其上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜會發(fā)生融合。細胞融合后產(chǎn)生的融合細胞有B細胞間的融合；骨髓瘤細胞間的融合及B細胞和骨髓瘤細胞的融合，會產(chǎn)生三類細胞。篩選1是指利用選擇培養(yǎng)基進行篩選得到雜交瘤細胞。由于雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體除了抗丙肝病毒的抗體外，還可能有其他類型，故篩選2是指進行多次的克隆化培養(yǎng)和專一性抗體檢測，以得到能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。

（3）實驗的自變量是培養(yǎng)液中接種雜交瘤細胞的數(shù)量，因變量為一定時間內(nèi)抗丙肝病毒抗體的數(shù)量，除自變量外，其他條件要相同且適宜。所以實驗思路為：將適宜的動物細胞培養(yǎng)液分為體積相同的幾組（可自設組數(shù)）。在不同組別中接種不同量的能產(chǎn)生丙肝病毒的單克隆抗體的雜交瘤細胞，一定時間后測定培養(yǎng)液中的抗體含量。【解析】(1)給小鼠注射丙肝病毒使小鼠產(chǎn)生免疫反應骨髓瘤細胞。

(2)糖蛋白蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。

(3)將適宜的動物細胞培養(yǎng)液分為體積相同的幾組（可自設組數(shù)）。在不同組別中接種不同量的能產(chǎn)生丙肝病毒的單克隆抗體的雜交瘤細胞，一定時間后測定培養(yǎng)液中的抗體含量六、綜合題(共4題，共16分)25、略

【分析】【分析】

1；如圖：單鏈向?qū)NA與目標DNA發(fā)生堿基互補配對。Cas9蛋白是基因的剪刀；相當于限制酶，催化磷酸二酯鍵水解。

2；基因工程的原理是基因重組。

3；基因突變指的是堿基對的增添、缺失、替換而引起的基因結構的改變。

4；目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

5；啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位。

【詳解】

（1）圖1為CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖；該系統(tǒng)能精準識別相關基因的原理是單鏈向?qū)NA與目標DNA發(fā)生堿基互補配對，Cas9蛋白可催化磷酸二酯鍵水解。

（2）細菌這種清除入侵病毒DNA的生理意義是防止外源基因插入并表達；保證了細菌遺傳性狀的穩(wěn)定。

（3）要借助現(xiàn)代生物技術將CRISPR/Cas9基因?qū)胂嚓P細胞；屬于基因工程，基因工程的原理是基因重組。

（4）①把兩個DNA片段進行連接的酶是DNA連接酶；由于插入了堿基A，生物發(fā)生的變異屬于基因突變。②基因上游的啟動子作用是：RNA聚合酶識別和結合的部位。基因表達載體通過農(nóng)桿菌侵染水稻愈傷組織，并整合到水稻細胞的染色體DNA上，愈傷組織再經(jīng)過再分化過程形成水稻幼苗。③由于使TMS5基因表達的蛋白質(zhì)不能產(chǎn)生，用抗原—抗體雜交技術檢測TMS5基因編輯是否成功，若未出現(xiàn)雜交帶，則表明基因編輯成功。

（5）RNA的序列越短與其它DNA配對的幾率越高；所以越短脫靶率越高，即其他DNA序列也含有與向?qū)NA互補配對的序列，造成向?qū)NA錯誤結合而脫靶。

【點睛】

本題主要是基因工程，屬于考察理解識記的基礎上綜合分析得出結論的能力。【解析】堿基互補配對磷酸二酯鍵防止外源基因插入并表達，保證了細菌遺傳性狀的穩(wěn)定基因重組①DNA連接酶基因突變②RNA聚合酶染色體DNA再分化③未出現(xiàn)高其他DNA序列也含有與向?qū)NA互補配對的序列，造成向?qū)NA錯誤結合而脫靶26、略

【分析】【分析】

基因工程的基本操作程序。

1；目的基因的獲?。涸嘶虿扇≈苯臃蛛x獲得；真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法及PCR技術擴增目的基因。

2；基因表達載體的構建組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。

3、將目的基因?qū)胧荏w細胞：將目的基因?qū)胫参锛毎翰捎米疃嗟姆椒ㄊ寝r(nóng)桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱游锛毎鹤畛Ｓ玫姆椒ㄊ秋@微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛毎浩滢D化方法是：先用Ca2+處理細胞；使其成為感受態(tài)細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。

4；目的基因的檢測和表達：（1）首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因；方法是采用DNA分子雜交技術。（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與mRNA雜交。（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交。（4）有時還需進行個體生物學水平的鑒定．如轉基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。

【詳解】

（1）步驟②為基因表達載體的構建；為基因工程的核心步驟，構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因表達和發(fā)揮作用。

（2）用大腸桿菌作為受體細胞時，常用Ca2+處理大腸桿菌使其成為易于吸收DNA的感受態(tài)細胞。

（3）將目的基因插入質(zhì)粒構建表達載體時；會破會四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存，所以培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有氨芐