DB12T 653-2016 鮮凍畜、禽肉中動物源性成分的定量檢測 實時熒光PCR法　　_第1頁
DB12T 653-2016 鮮凍畜、禽肉中動物源性成分的定量檢測 實時熒光PCR法　　_第2頁
DB12T 653-2016 鮮凍畜、禽肉中動物源性成分的定量檢測 實時熒光PCR法　　_第3頁
DB12T 653-2016 鮮凍畜、禽肉中動物源性成分的定量檢測 實時熒光PCR法　　_第4頁
DB12T 653-2016 鮮凍畜、禽肉中動物源性成分的定量檢測 實時熒光PCR法　　_第5頁
已閱讀5頁，還剩4頁未讀， 繼續免費閱讀

VIP免費下載

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

B45DB12QuantitativePCRmethod天津市市場和質量監督管理委員會發布本標準主要起草人：趙新、易萌、劉娜、蘭青闊、劉雪巖、陳銳、朱珠、王成、徐石鮮凍畜、禽肉中動物源性成分的定量檢測實時熒光PCR法下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版GB/T6682分析實驗室用水規格和實時熒光PCRrealtimePCR雞源性成分chicken-deriv算試樣中種屬特異性基因和內參基因的比值，從而對鮮凍畜、禽肉中動物源性成分進行定量檢測。Rd1Rd1-P：5′-FAM-CGGCACSus-ACTBSus-P：5′-FAM-TCTGDucg作為試樣，裝入清潔容器中，加封后，標明標記。將試樣于-20℃冷凍保存。SDS裂解液和20μL蛋白酶K（20mg/m緩慢顛倒混勻，12000rpm離心10min，轉移上清至一5.3.4.1標準樣品和試樣實時熒光P進行45次循環擴增反應（95℃變性15s，60℃退火延伸1min在第二階段的退火延伸（60℃)時段收集熒光信號。4—2.0μL2.0μL—25.0μL—1.0μL1.0μL0.5μL1.0μL—25.0μL情況進行調整。設定閾值處，要求不同濃度梯度標準品的擴增曲線平行，而且同一樣品的不同平根據標準溶液的擴增Ct值和初始模板含量的對數間的線性關系，分別繪制動物源性y=x+b(1yb—標準曲線的截距。n—模板靶標濃度a—標準曲線的斜率；b—標準曲線的截距。5.3.5.5.2計算試樣中動物源性成分種屬特出試樣中動物源性成分種屬特異性基因百分含量。c—試樣中動物源性成分種屬特異性基因的百n16SrDNA—內參基因16SrDNA濃度。依照6.1-6.2進行判斷；如重復實驗動物源性種屬特異性基因出現典型擴增曲線，但Ct值仍在36～38內參基因和動物源性種屬特異性基因出現典型擴增曲線，但Ct1GTAGGTGCACAGTACGTTCTGAAGCTACTTCTGTGAGGCAGA61GCTGTGTTCCTTGCCGTCATGTGCCCAGGAGACTGGCGGGGAAGGAAGAGACTGGCGGGGAAGGAA61ACAGAGCGAGTCAGAAGGCT注：劃線部分為OA-F和OA-R引物序列，方61AGCACACTTAGCCGTGTTCCTTGCACTCTCTGCATATATCCACGGTTCCGCTATG注：劃線部分為Chk-F和Chk-R引AAAACTAAAGAATCCCACTAATTAAAA

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論