微生物檢測技術金黃色葡萄球菌檢測（優選）微生物檢測技術金黃色葡萄球菌檢測主要內容金黃色葡萄球菌（GB4789.10-2010）大腸桿菌（GB4789.38-2012）沙門氏菌（GB4789.4—2010）副溶血性弧菌（GB4789.7—2013）金黃色葡萄球菌檢驗p1531、生物學特性（重點）2、致病性3、流行病學4、國標檢驗方法（重點）5、快速檢測方法Baird－Parker瓊脂平板(BP平板)利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含7.丙酮酸鈉10.金黃色葡萄球菌的流行病學血平板：可形成完全透明溶血環（溶血）5mL，放入小試管中，再加入培養24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養物0.蒸餾水1000mL腸毒素：金黃色葡萄球菌能產生數種引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。副溶血性弧菌（GB4789.酵母膏1.10—2010食品安全國家標準

食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗大多數菌株能生長在6.本標準第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗；葡萄糖2.3之間生長（最適pH為6-7）；1、生物學特性

1.1形態與染色金黃色葡萄球菌無芽孢，無鞭毛，大多數無莢膜革蘭氏染色陽性；典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。1.2培養特征易培養，對營養要求不高，在普通培養基中生長良好。需氧或兼性厭氧，在好氧條件下生長最好；大多數菌株能生長在6.5-46℃之間（最適溫度30-37℃）能在pH4.2-9.3之間生長（最適pH為6-7）；耐鹽性強，在含7～15%的氯化鈉培養基中仍能生長，可用于篩選菌種。在普通營養瓊脂平板上培養18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落。可產生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內，不滲至培養中。易培養，對營養要求不高，在普通培養基中生長良好。溶血：紅細胞破裂，血紅蛋白逸出稱紅細胞溶解，簡稱溶血。甘氨酸12.血平板：可形成完全透明溶血環（溶血）因此對其鑒別的主要實驗是測定其凝固酶。溶血素是細菌分泌的一種毒性因子Baird－Parker瓊脂平板(BP平板)近年來，美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。根據細菌對紅細胞的溶解能力可分為以下三種溶血類型及現象：本標準第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗；溶血素：外毒素，分α、β、γ多種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；4、國標檢驗方法（重點）可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。蒸餾水950mL++++當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經8-10小時即可相當數量的腸毒素。溶血：紅細胞破裂，血紅蛋白逸出稱紅細胞溶解，簡稱溶血。溶血素是細菌分泌的一種毒性因子血平板：可形成完全透明溶血環（溶血）細菌的溶血現象根據細菌對紅細胞的溶解能力可分為以下三種溶血類型及現象：α溶血:產生溶血素，不完全性溶血，在血瓊脂平皿上菌落周圍有1～2mm，較窄半透明的草綠色溶血環。β溶血:呈完全性溶血，在血平皿上菌落周圍有2～4mm寬、界限分明、無色透明的溶血環。γ溶血:不產生溶血素，在血瓊脂平皿上的菌落周圍無溶血環。可產生卵磷脂酶，在卵黃高鹽培養基上形成周圍有白色沉淀環的菌落。1.3生化反應大多數菌株分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。分解甘露醇，產酸。2、致病性金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，為條件致病菌。可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。葡萄球菌皮膚感染菌株致病力的強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲性酶：

a.溶血素：外毒素，分α、β、γ多種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；

b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；

c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關；

d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據鑒定金黃色葡萄球菌；

e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產生數種引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。2、致病性++++當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經8-10小時即可相當數量的腸毒素。腸毒素可耐受100度煮沸30min而不被破壞。人攝食該污染產品后2-3h便可出現中毒癥狀。其引起的食物中毒典型癥狀為嘔吐和腹瀉。3、流行病學在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌的流行病學近年來，美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。

++++金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發生的此類中毒事件也非常多。金黃色葡萄球菌的流行病學4、GB4789.10—2010食品安全國家標準

食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗

1范圍本標準規定了食品中金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的檢驗方法。本標準第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗；第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計數；第三法適用于金黃色葡萄球菌含量較低而雜菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計數。檢驗前準備工作采集與送檢預處理菌落總數大腸菌群致病菌純化分離培養前增菌多項鑒定及檢測實驗分析、報告食品微生物檢驗的一般程序檢測步驟---增菌利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含7.5%氯化鈉肉湯蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化鈉75g蒸餾水1000mL檢測步驟---增菌或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯（污染嚴重時）胰酪胨（或胰蛋白胨）

17.0g植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）

3.0g氯化鈉

100.0g磷酸氫二鉀

2.5g丙酮酸鈉

10.0g葡萄糖

2.5g蒸餾水

1000mL檢測步驟---分離血平板：金黃色葡萄球菌可以產生溶血素，因此在血平板上產生明顯的溶血環。血平板上其典型菌落呈金黃色，有時也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。血平板Baird－Parker瓊脂平板(BP平板)胰蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g酵母膏1.0g丙酮酸鈉10.0g甘氨酸12.0g氯化鋰5.0g瓊脂20.0g蒸餾水950mL卵黃亞碲酸鉀增菌劑50mL

檢測步驟---分離檢測步驟---分離BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉、甘氨酸和氯化鋰是一種生長促進劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產生黑色卵黃提供營養和有利于觀察卵磷脂環檢測步驟

---分離在BP平板上其典型菌落為：圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣常為淡色（米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色），周圍為一混濁帶(沉淀環)，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。B-P平板檢測步驟---鑒定染色鏡檢金黃色葡萄球菌可以產生凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉變為纖維蛋白，附著于細菌表面，產生凝固。因此對其鑒別的主要實驗是測定其凝固酶。血漿凝固酶試驗：

吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養物0.5mL，振蕩搖勻，置36±1℃溫箱或水浴內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現凝固,即將試管倒置或傾斜時，呈現凝塊者，被認為陽性結果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含7.氯化鋰5.副溶血性弧菌（GB4789.食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染沙門氏菌（GB4789.金黃色葡萄球菌無芽孢，無鞭毛，大多數無莢膜葡萄糖2.氯化鋰5.利用金黃色葡