乙型肝炎實驗室檢測技術學習

病毒形態與基因結構嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒屬電鏡：3種形態HBV基因組和基因表達產物3200bp4openreadingframes7proteins

大蛋白(preS1-preS2-S)

中蛋白(preS2-S)

小蛋白(HBsAg)

核衣殼(HBcAg)HBeAg

聚合酶X蛋白要注意避免出現嚴重溶血注射乙肝疫苗或乙肝高效價免疫球蛋白(HBIG)后，產生的主動或被動免疫HBsAgdistributionintheyearof2006要注意避免出現嚴重溶血蒸餾水或去離子水應保證質量抗-HBs特異性中和抗體、保護性抗體adr,ayr,adw2慢性乙肝北歐、西歐、非洲、美洲乙型肝炎實驗室檢測技術學習抗-HbeHBeAg消失后出現無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內復制減少或終止，傳染性減弱或消失東亞、中國、日本、波利尼西亞等判斷預后的指標：HBeAg轉陰，表示HBV復制減少或終止，預后好；一、臨床標本的收集和保存HBsAg陰性的急性感染HBVcarrierdistributioninChinain19924-8%8-12%4-8%海南黑龍江吉林遼寧山東福建江西安徽湖北湖南廣東廣西上海河南山西內蒙古陜西寧夏甘肅青海四川貴州云南西藏新疆江蘇浙江北京臺灣over7%3~7%Lowerthen3%HBsAgdistributionintheyearof2006NodataComparingofHBsAgprevalencebetween1992and2006age

世界高流行區≥8%

中流行區2～7%

低流行區＜2%

我國農村>城市南方>北方中南和華東>華北

地區分布

年齡和性別高流行區青少年和30～40歲的成人中流行區仍以成人感染為主低流行區多20～29歲年齡組發病高峰

職業高危人群醫務人員托幼機構兒童妓女靜脈內濫用毒品者男性同性戀者

家庭聚集性明顯人群分布基因型血清型主要地區Aadw2,ayw1北歐、西歐、非洲、美洲Badw2,ayw1東南亞、中國、日本Cadr,ayr,adw2東亞、中國、日本、波利尼西亞等Dayw2,ayw3南歐、地中海、印度Eayw4西非Fadw4,adw2,ayw4美國土著人、波利尼西亞、中南美Gadw2美國、法國H?尼加拉瓜、墨西哥、美國HBV不同基因型和血清型的地區分布血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存意義體內HBV復制、傳染性強的標志臨床ELISA檢驗影響因素HBeAg與HBsAg平行出現，較HBsAg消失早冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融中南和華東>華北一、臨床標本的收集和保存HBV不同基因型和血清型的地區分布冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融Dane顆粒經去垢劑處理HBcAg釋放檢測慢性乙肝，病毒長期攜帶樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染HBVcarrierdistributioninChinain1992急性乙型肝炎的輔助診斷Source:NNDSS/VHSP經血傳播醫源性傳播母嬰傳播性接觸傳播日常生活接觸傳播

傳播途徑

HBsAg

最早出現的血清學標志之一是HBV感染的基本標志

HBsAg陽性見于乙肝的潛伏期、急性期慢性乙肝病毒攜帶與HBV感染有關的肝硬化和原發性肝細胞癌抗原抗體系統抗-HBs特異性中和抗體、保護性抗體抗-HBs陽性可見于乙型肝炎恢復期，在HBsAg消失后間隔一定時間抗-HBs出現隱性感染的健康人，自身產生了免疫力注射乙肝疫苗或乙肝高效價免疫球蛋白(HBIG)后，產生的主動或被動免疫HBcAg

不能從血清中直接檢出

Dane顆粒經去垢劑處理HBcAg釋放檢測抗-HBc

非中和抗體、分IgM和IgG

主要見于慢性感染和既往感染抗-HBcIgM

通常在出現癥狀時即可檢出，一般持續約6個月，提示HBV復制，是急性感染的重要指標，也是慢性活動性肝炎的重要標志抗-HBcIgG

在抗-HBcIgM下降及消失后出現，可伴隨感染者終生存在HBeAg

與HBsAg平行出現，較HBsAg消失早意義體內HBV復制、傳染性強的標志急性乙型肝炎的輔助診斷判斷預后的指標：HBeAg轉陰，表示HBV復制減少或終止，預后好；若HBeAg持續陽性，則預后不良，易轉為慢性抗-HbeHBeAg消失后出現無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內復制減少或終止，傳染性減弱或消失HBV感染血清學常見模式臨床及流行病學意義HBsAg抗-HBs

抗-HBcIgGIgMHBeAg抗-HBe潛伏期末期+﹣﹣﹣+/﹣﹣急性乙肝，病毒長期攜帶+﹣+++﹣HBsAg陰性的急性感染﹣﹣﹣+﹣﹣感染消除，抗-HBs尚未出現﹣﹣+﹣﹣﹣健康攜帶者+﹣++/-﹣+慢性乙肝，病毒長期攜帶+-++/-+-HBV近期感染，恢復期﹣+++/-﹣+HBV既往感染，已恢復﹣+/-+﹣﹣﹣﹣乙肝疫苗接種﹣+﹣﹣﹣﹣ELISA（最常用，定性）免疫層析法（膠體金或硒標法）發光免疫分析（定量）反相間接血凝試驗（少用）HBV感染的血清學診斷方法利用抗原和抗體特異性結合方法間接法:測定抗-HBs夾心法：測定HBsAg和HBeAg競爭法：測定抗-HBc和抗-HBe酶聯免疫吸附試驗ELISA優點快速簡便，成本低敏感血清標本用量少缺點精密度差難以自動化容易出現交叉反應酶標技術臨床ELISA檢驗影響因素臨床ELISA測定現通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚一、臨床標本的收集和保存要注意避免出現嚴重溶血樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測

二、試劑準備實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定蒸餾水或去離子水應保證質量抗-HbeHBeAg消失后出現無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內復制減少或終止，傳染性減弱或消失三、加血清樣本及反應試劑病毒攜帶HBsAg陰性的急性感染抗-HbeHBeAg消失后出現無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者表示HBV在體內復制減少或終止，傳染性減弱或消失臨床ELISA檢驗影響因素要注意避免出現嚴重溶血反相間接血凝試驗（少用）ComparingofHBsAgprevalencebetween1992and2006低流行區＜2%東亞、中國、日本、波利尼西亞等冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融高流行區青少年和30～40歲的成人血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染三、加血清樣本及反應試劑加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡四、溫育要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間溫育溫度的選擇“邊緣效應”的排除大蛋白(preS1-preS2-S)反相間接血凝試驗（少用）酶聯免疫吸附試驗ELISA感染消除，抗-HBs尚未出現HBV近期感染，恢復期急性乙肝，病毒長期攜帶抗-HBc非中和抗體、分IgM和IgG乙肝的潛伏期、急性期HBeAg與HBsAg平行出現，較HBsAg消失早反相間接血凝試驗（少用）低流行區多20～29歲年齡組發病高峰抗-HBc非中和抗體、分IgM和IgG夾心法：測定HBsAg和HBeAgHBV近期感染，恢復期抗-HBs特異性中和抗體、保護性抗體

五、洗板固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術，需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性六、顯色在加入底物開始顯色反應前，最好是先檢查一下底