實驗六網織紅細胞計數血小板計數01熟悉網織紅細胞染色的原理及形態學特點，掌握計數方法，了解注意事項和臨床應用。學會鏡下辨認血小板的形態，掌握血小板計數的方法和參考值，了解注意事項及臨床應用。02要求一、網織紅細胞計數紅系祖細胞原紅早幼紅中幼紅晚幼紅網織紅紅細胞骨髓外周血網織紅細胞（reticulocyte,Ret）是有核紅細胞轉向無核到完全成熟紅細胞的過度型細胞，其胞質中尚殘留部分嗜堿性物質(核糖體和核糖核酸)，能被煌焦油藍、燦爛甲酚藍、中性紅等活體染料染色。根據網織紅細胞的形態特征和成熟程度將其分為四型：

I型(絲球型)，沉淀顆粒呈致密結塊的網織紅細胞；Ⅱ型(網型)，沉淀顆粒呈疏松結構；Ⅲ型(破網型)，沉淀顆粒呈散在結構；在外周血中僅占0.15%Ⅳ型(點粒型)，沉淀顆粒呈少數散在分布。多見于外周血，60%以上染色原理網織紅細胞內RNA的磷酸基（帶負電荷）能與溴甲酚藍、新亞甲藍等堿性染料的有色反應基（帶正點荷）結合，形成核酸與堿性染料復合物的藍黑色多聚顆粒，其顆粒又聯綴成線狀甚至網狀。凡含有兩個以上深染顆粒（或具有線網狀結構）的無核紅細胞，即為網織紅細胞。煌焦油藍染液（1%）煌焦油藍1g枸櫞酸鈉0.4g氯化鈉0.85g蒸餾水加到100ml，充分溶解過濾備用。試劑操作顯微鏡計數法2d染料+2d全血（1：1）混勻后染15min，傾少許玻片上，制備薄膜片，晃動玻片使迅速干燥，低倍鏡瀏覽全片，選細胞分布均勻無重疊染色良好部位，油鏡下觀察1000個紅細胞中網織紅細胞數目。參考范圍成人：0.008~0.02新生兒：0.02~0.06其它方法：網織紅細胞計數儀熒光激活細胞術流式細胞術紅細胞必須含兩個或兩個以上藍色顆粒，且無需微調顯微鏡即可見。顆粒必須遠離細胞邊緣，以免與變性珠蛋白小體混淆。染料配制必須祛除沉渣。復染會使網織紅數值降低，因此不采用瑞氏染料復染，用二甲苯擦涂片也會使結果降低。制片應厚薄適宜，否則會造成網織紅細胞分布不均。染色時間必須充分，當室溫較低時，需適當延長染色時間或置37℃水浴箱內。網織紅細胞體積較大，常在血膜尾部和兩側較多，計數應該兼顧。注意事項可直接觀察細胞形態，不需特殊儀器，其中試管法操作簡便，重復性較好，被列為手工網織紅細胞計數的參考方法但工作效率不高，實驗精密度低。受主觀因素影響較多，且耗時費力。顯微鏡法01測定快速，重復性好，避免主觀因素，易于標準化，測量細胞多，精確性高。根據熒光強度可反映網織紅細胞幼稚程度，并計算出網織紅細胞成熟指數但幼稚白細胞、晚幼紅細胞及巨大血小板等可干擾計數結果，儀器價格貴，試劑成本較高。儀器法02方法學評價臨床應用網織紅細胞計數是反映骨髓紅細胞造血功能的重要指標網織紅細胞計數增多

①溶血性貧血

②放療化療后，造血恢復

③貧血治療有效時

④脾功能亢進

⑤紅細胞生成素治療后

⑥骨髓移植功能良好的指標網織紅細胞計數降低

①再生障礙性貧血

②慢性病性貧血，如惡性腫瘤、慢性腎衰、內分泌疾病等將血液用適當的稀釋液稀釋后，充入計數池中，計數一定體積內血小板的數目，再換算成每升血液中的血小板數。原理分為破壞紅細胞稀釋液：如草酸銨溶液不破壞紅細胞稀釋液：如紅細胞稀釋液血細胞計數板試劑與器材二、血小板計數操作步驟2ml紅細胞稀釋液采集10ul末梢血，充分混勻混勻的血小板懸液充池，靜置10min，高倍鏡下計數中央大方格的血小板數。計算：N*10*200*106/L參考范圍（100-300）*109/L注意事項針刺應稍深，保證采血順暢，忌擠壓，操作要迅速，無需擦掉第一滴血，若同時做其他實驗時，先做血小板計數。所用器材和稀釋液必須清潔，無菌無塵。器材應標準化血小板易聚集，充池前應充分混勻但不能用力太大，會破壞血小板待血小板下沉后再計數，否則結果偏低應在1h內計數完畢，否則結果偏低注意血小板與雜質、結晶等區別。檢查前，應避免服用影響到血小板功能的藥物不需特殊儀器，操作簡便，成本低，但影響因素較多，耗時費力。重復性好，測定速度快，適用于臨床應用。目前血細胞分析儀逐步普及，一般均以全血作為標本。但由于血細胞分析儀不能完全將血小板與其他類似大小的物質(如紅細胞或白細胞碎片、灰塵等雜物)區別開來，因此計數結果有時仍需顯微鏡目視計數法來作校正。目視顯微鏡法血細胞分析儀法（五）方法學評價靜脈血比毛細血管血高10%。妊娠中晚期升高，分娩后即降低；平原較低，高原較高；早晨較低，午后較高；運動后升高，休息后恢復；月經前較低，月經后較高；春季較低，冬季略高；生理性正常人血小板數1d內可有6%～10%的變化，表現為（六）臨床意義血小板減少：血小板數量低于100×109/L，原因：01血小板破壞增加：如ITP、脾亢；03血小板分布異常：如脾腫大（肝硬化）、血液被稀釋（輸入大量庫存血或血漿）05血小板生成障礙：如再障、巨幼貧、急白、骨髓纖維化、放射線損傷；02血小板消耗增多：如DIC、TTP、SLE、輸血后血小板減少癥04病理性骨髓增生性疾病：如原發性血小板增多癥、真性紅細胞增多癥、慢性粒細胞白血病；01急性大出血、急性溶血；02