丙型肝炎病毒實驗室檢測技術《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術規范》《丙型病毒性肝炎診斷的行業標準》一、丙型肝炎病毒（HCV）概況

單股線性正鏈RNA病毒（一）、丙肝病毒的發現史

20世紀60年代后期，首次被發現曾被稱為輸血后非甲非乙型肝炎因子是第一個在沒有看到病毒顆粒條件下確認的人類病毒1989年，電鏡下觀察到病毒顆粒1991年，歸為黃病毒科2005年，Huh7細胞培養成功

（二）、丙肝病毒的主要特點HCV可分為6個主要基因型及>80個亞型，病毒基因組具有高度變異性。經體液或血液傳播。目前尚無有效的疫苗，但可防可治。約3000氨基酸組成的多聚蛋白。

每日復制量：10兆(1012)病毒顆粒。促使HCV傳播的危險因素仍然廣泛存在！血液傳播

（傳播效率高，主要因素）醫源性：不安全注射、侵入性醫學檢查（透析、胃鏡、腸鏡等）、牙科、輸血/血制品等非醫源性：穿耳孔、紋身、美容、理發、修腳等家庭：共用牙刷、剃須刀等吸毒：共用針具注射吸毒

性傳播：STD/HIV促進傳播

（傳播效率較低）母嬰傳播：HCV+孕婦

（傳播效率低）（三）、全球和中國丙肝現狀

全球HCV感染率約為3%，每年新發丙型肝炎病例300-400萬，約有1.5億慢性丙肝患者約15-35%慢性丙肝患者在20-30年后發展為肝硬化，這些患者中每年約1%-3%發展為肝細胞癌估計每年有35萬人死于丙肝相關的肝臟疾病全球HCV傳播的最主要危險因素是靜脈注射吸毒和醫源性感染近年來丙肝病例報告呈逐年上升趨勢排序省份報告數

排序省份報告數1河南省

17黑龍江省2廣東省

18貴州省3湖南省

19山東省4新疆

20重慶市5云南省

21江西省6四川省

22海南省7河北省

23江蘇省8廣西

24福建省9遼寧省

25浙江省10湖北省

26青海省11山西省

27上海市12陜西省

28北京市13內蒙古

29寧夏14甘肅省

30天津市15吉林省

31西藏16安徽省

全國2015年全國丙肝病例報告情況（發病日期）2015年哨點監測

特定人群HCV感染率人群檢測人數HCV抗體陽性率%腎透析醫院侵入性診療單位體檢無償獻血計劃生育門診就診人群檢測人數HCV抗體陽性率%吸毒者男性STD就診者男男性行為者暗娼男性流動人口長卡司機孕產婦青年學生2015年監測哨點HCV抗體檢測結果：共檢測_____人，HCV抗體陽性檢出率____%。2009-2015艾滋病哨點監測人群HCV陽性率2009-2015艾滋病哨點監測人群HCV陽性率（吸毒者人群除外）2010-2015丙肝哨點監測人群HCV陽性率2010-2015丙肝哨點監測人群HCV陽性率（腎透析人群除外）我國乙肝和丙肝現狀~9000萬~700萬重點人群急需乙肝治療慢性乙肝~2800萬HBV攜帶者~760萬HCV感染者~250萬重點人群急需治療我國的肝癌約80%由乙肝相關導致，約10-15%由丙肝相關導致。~456萬慢性丙肝患者

（四）、丙肝的治療現狀和前景丙肝能夠治愈，但大多數患者沒有得到治療丙肝治療藥物發展迅速：普通干擾素+利巴韋林（48周）長效干擾素(聚乙二醇干擾素)+利巴韋林（48周）長效干擾素+利巴韋林

+蛋白酶抑制劑（Boceprevir波西普韋/Telaprevir特拉普韋）（24周）2011年美國和歐洲上市HCVNS5A復制復合體抑制劑

Daclatasvir（12周）單獨使用HCVRNA聚合酶抑制劑Sofosbuvi（12周）單獨使用

丙肝治療藥物面臨的挑戰索非布韋（Sofosbuvir）是世界衛生組織推薦的四種治療丙肝新藥之一。目前，索非布韋在美國每個療程的價格為8.4萬美元；歐洲價格為5.7-6.6萬美元。但該藥在泰國價格為3600美元，給予埃及、巴基斯坦的價格為900美元/人/療程。目前該藥尚未在我國注冊，也無價格。世界衛生組織推薦的治療丙肝藥物1.

Harvoni(Sofosbuvir+Ledupasvir),

吉利德公司（用于基因1型和3型）2.

Sofosbuvir,

吉利德公司(Gilead)

（用于基因2型和3型）3.

Paritaprevir+Ombitasvir+Dasabuvir

（用于基因1型）4.

Sofosbuvir+Simeprevir

(強生公司)

（用于基因1型）5.

Sofosbuvir+Daclatasvir

(施貴寶公司)

（用于1型、2型和3型）

（五）、丙型肝炎的疾病進展正常的肝臟急性感染慢性感染(80%)慢性肝炎疾病自發緩解(20%)肝硬化(20%)肝細胞癌(1–4%每年)失代償(~20%)緩慢進展(~75%)穩定的肝炎(80%)疾病進展率(Fast)(Slow)感染后20年飲酒,合并HIV或HBV感染，肥胖≥感染后30年女性,年輕LauerG&WalkerB.NEnglJMed2001;345:41HCC=hepatocellularcarcinoma6個月15－50天20－30年不等急性HCV感染后自愈急性HCV感染后慢性化（六）、傳染病報告卡與丙肝診斷標準傳染病報告卡（病例分類）：

分類一：1.疑似病例

2.臨床診斷病例

3.實驗室確診病例

4.病原攜帶者

分類二：1.急性、2.慢性丙型病毒性肝炎診斷行業標準(WS213-2008)病例診斷：

1.疑似丙肝病例：流病史+癥狀/轉氨酶升高

2.臨床診斷丙肝病例：丙肝抗體陽性+流病史/癥狀/轉氨酶升高3.確診丙肝病例：疑似/臨床病例+HCVRNA陽性

（1）急性丙肝診斷

（2）慢性丙肝診斷報病例卡的注意事項：臨床診斷病例無需區分急性、慢性HCVRNA陽性但抗-HCV陰性者，提示為急性確診丙肝病例HCV抗體檢測已非常普遍，無需報告疑似病例對于抗-HCV檢測結果陽性，但HCVRNA檢測結果陰性者，無須進行病例報告；已按照抗-HCV檢測陽性結果報告“臨床診斷病例”的，應予以刪除。抗-HCV+有

RNA檢測結果無RNA檢測結果RNA陰性RNA陽性肝功癥狀流病史臨床診斷病例確診病例上報不上報慢性急性未分類備注或刪除訂正報告

診斷、監測方法HCV血清學試驗EIA檢測抗HCV、ImmunoblotassayHCV-RNA定性試驗PCR、TMAHCV-RNA定量試驗PCR、bDNAALT肝纖維化非損傷試驗肝活檢基因分型

二、診斷丙肝感染者和現患病人的實驗室方法NationalInstituteofHealthConsensusDevelopmentConferenceStatement:ManagementofHepatitisC:2002-June10-12,2002（一）、丙型肝炎病毒抗體檢測HCV感染疫情報告的檢測流程HCV血液篩查的檢測流程HCV臨床診斷篩查的檢測流程HCV病毒的基因結構及免疫診斷資源core

E1

E2NS2

NS3

NS4

NS5

各種基因產物作為免疫診斷的特異性：

NS3>core>NS4>NS5

抗－HCV檢測分為篩查實驗（酶聯免疫吸附試驗、膠體金法快速試驗、化學發光試驗、免疫熒光試驗）和補充試驗（免疫印跡試驗）。丙肝抗體假陰性問題HCV窗口期—TRANSFUSIONVolume40,February2000抗-HCV檢查的特點：優點：經濟，方便快捷，易于開展；第三代EIA檢測免疫功能正常者敏感度和特異度可達99%，窗口期6-12周；檢測陽性率高，慢性感染>95%，急性感染50~70%；適用于高危人群篩查，也可用于HCV感染者的初篩。缺點：出現較晚，不能作為HCV感染的早期診斷，也不能區分既往感染或現癥感染；單項抗-HCV結果呈陽性須檢測HCVRNA來確定是否為現癥HCV感染；急性HCV感染早期抗-HCV可為陰性，需依據HCVRNA陽性或動態監測來進行診斷；透析、免疫功能缺陷以及自身免疫性疾病患者可出現抗-HCV假陰性。HCV臨床診斷補充試驗檢測流程（1）HCV臨床診斷補充試驗檢測流程（2）HCV核酸定性檢測用于臨床診斷策略及結果報告3（二）、丙型肝炎病毒抗原檢測丙型肝炎病毒抗原檢測結果解釋（三）、丙型肝炎病毒核酸檢測HCV核酸定性檢測用于血液篩查策略及結果報告

HCV核酸定性檢測用于臨床診斷策略及結果報告HCV核酸定量檢測用于臨床治療策略及結果報告丙型肝炎病毒指標檢測的臨床意義抗-HCVHCVRNA意義陰性陰性無HCV感染陰性陽性急性HCV感染早期；或假陽性假陰性，需復查陽性陰性既往感染，病毒已被清除；或假陽性假陰性，需復查陽性陽性現癥感染，可診斷為丙型肝炎（四）、丙型肝炎病毒基因型檢測（中國區HCV流行主要基因亞型)HCV基因分型的臨床意義基因型的測定有助于決定抗病毒療程和藥物劑量。1和4型為難治性丙肝，療程為48周，利巴韋林的用量達到1000～1200mg/d。2和3型，療程為24周，利巴韋林的用量達到800mg/d。HCV診治框架中的試驗

GhanyM,etal.Hepatology2009;49:1335試驗類別監測確診治療療程評估治療應答預測持續應答HCV抗體(EIA)HCVRNAHCV基因型XXXX?隨著定量分析（10-50IU/mL）的敏感性增加，定性分析的重要性下降

EIA=酶聯免疫分析X其它章節第六章：丙型肝炎病毒細胞培養第七章：實驗樣品的采集、保存、運輸第八章：丙型肝炎病毒檢測實驗室的室內質量控制及能力驗證第九章：實驗室生物安全。第七章實驗樣品的采集、保存和運輸采集：多為靜脈血，HCV抗體檢測血清或血漿均可，HCV-RNA檢測最好用血漿，肝素抗凝劑除外。保存：一定要分離血清或血漿保存，短期冷藏，長期冷凍，特別是用于HCV-RNA檢測的樣品，最好盡快分離，冷凍保存，低溫運輸。HIV和HCV的異同點1、病毒種類2、傳播途徑3、感染后轉歸4、病毒體外存活時間5、治療6、疫苗什么是丙肝？

丙肝是由于感染丙型肝炎病毒引起的肝臟炎癥。急性丙型肝炎是指感染丙型肝炎病毒后的最初幾個月。急性丙肝的嚴重程度因人而異，從輕微甚至沒有癥狀的溫和狀態，到嚴重到需要入院治療。由于一些還不太清楚的原因，大約有20%的感染者在感染的最初6個月內，未經治療卻可自發清除掉體內的丙肝病毒而達到自愈。不幸的是大多數感染者并不能夠自行清除掉體內的丙肝病毒，而發展成為慢性丙型肝炎。隨著時間的推移，慢性丙肝可以引起一些嚴重的健康問題，比如肝病、肝衰竭甚至是肝癌。丙肝怎樣傳播？

丙肝主要通過丙肝病毒感染者的血液進入未感染者的體內傳播的。今天，大多數的丙肝感染都是通過共用針頭、針管或者其他注射毒品的器具引起的。1992年開始的廣泛血源篩查之前，丙肝也可以通過輸血和器官移植傳播。在一些非正常情況下，由于醫療機構的感染控制措施缺乏而引起的丙肝暴發。個別情況下，性行為也可以造成丙肝的傳播。在患有性病或艾滋病、多性伴或不潔性行為等都會增加丙肝感染的風險。在一些無執照場所或使用未嚴格消毒的工具紋身或身體穿刺也會造成丙肝的傳播。感染丙肝的母親所生產的新生兒中，大約6%會感染丙肝。然而，還有一部分人并不清楚自己怎樣感染以及何時感染了丙肝。丙肝的癥狀?

很多丙肝感染者并沒有癥狀，也不知道自己被感染。一些人會出現以下癥狀：發熱、乏力、食欲不振、惡心、嘔吐、小便赤黃、陶土樣便、關節疼痛和皮膚、眼部的黃疸等。

急性丙肝的癥狀出現在感染后的2周至6個月之間的任何時間。而慢性丙肝一般需要數十年才能表現出癥狀。一旦出現癥狀，往往是肝病晚期的征兆。怎樣知道自己是否感染丙肝？知道自己是否感染丙肝的唯一方法就是丙肝檢測。臨床醫生通過檢測血液，即丙肝抗體實驗，檢測人體血液中是否存在丙肝病毒抗體。抗體是在人體被感染時釋放到血液中的化學物質，即使體內的丙肝病毒已經被清除，抗體也會一直存在于血液中。

丙肝抗體檢測陽性或者反應性，表明一個人過去某個時間感染過丙肝病毒，但丙肝抗體陽性不能確定現在是否患有丙肝。需要通過進一步的核酸檢測來確認當前是否患有丙肝。丙肝聚集性疫情概念

短期內局部地區出現丙肝病例異常增多的情況。風險大量HCV感染者“隱匿”存在

（既往感染者可以“集中發現”）促使HCV傳播的危險因素存在

（新近感染者可以“集中爆發”）丙