ICS65.020CCSB62DB502024—10—08發布重慶市市場監督管理局發布IDB50/T1692—2024本文件按照GB/T1.1―2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由重慶市農業科學院提出。本文件由重慶市農業農村委員會歸口并組織實施。本文件起草單位：重慶市農業科學院、重慶市巴南區農業技術推廣站。本文件主要起草人：韓垚、王忠偉、秦小婷、王紅娟、謝樹章、楊小艷、吳紅。DB50/T1692—2024玉簪組培快繁技術規程本文件規定了玉簪組培快繁所需主要設施設備、組培快繁操作流程、煉苗、組培苗移栽、養護管理、生產記錄及檔案管理等技術要求。本文件適用于玉簪種苗組培快繁。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法GB/T8321農藥合理使用準則NY/T496肥料合理使用準則通則NY/T2306花卉種苗組培快繁技術規程3術語和定義NY/T2306確立的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1玉簪Hostaplantaginea天門冬科玉簪屬植物統稱，多年生草本。3.2組織培養Tissueculture又叫離體培養，指從植物體分離出符合需要的組織。器官或細胞，原生質體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養以獲得再生的完整植株或生產具有經濟價值的其他產品的技術。3.3煉苗Acclimatization在保護地育苗的情況下，采取放風、降溫、適當控水等措施對幼苗強行鍛煉的過程。4縮略語下列縮略語適用于本文件。6-BA：6-芐基腺嘌呤（6-benzylaminopurine）IBA：吲哚丁酸（3-indolebutyricacid）MS：一種常用基本培養基（Murashige和Skoog（1962））NAA：萘乙酸（naphthyleneaceticacid）2DB50/T1692—2024Tween-20：聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯（Polyoxyethy-lene(20)SorbaitanMonolaurate）5主要設施設備5.1設施包括準備室、滅菌室、更衣室、風淋室、接種室、培養室、馴化室等。5.2儀器設備包括實驗設備、滅菌設備、接種設備、培養設備等。6組培快繁操作流程6.1接種前準備6.1.1培養基配制實驗用水應符合GB/T6682的要求。培養基配制按照NY/T2306的要求執行，所用培養基配方如下：a）芽誘導培養基：MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5.6～5.8；b）增殖培養基：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5.6～5.8；c）生根培養基：1/2MS+0.5mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5.6～5.8。6.1.2接種人員準備穿戴實驗服、醫用手套和口罩，經風淋室后進入接種室，在操作前和操作中使用75%酒精棉球消毒。6.1.3超凈工作臺消毒打開超凈工作臺紫外燈照射30min，啟動風機，打開接種用電熱滅菌器，用75%酒精擦拭超凈工作臺臺面。6.2外植體預處理6.2.1外植體的選擇選擇長勢健壯、無病蟲害的優良植株，取其新長出的1cm～2cm嫩芽為外植體。6.2.2外植體消毒消毒處理過程如下：a）切除暴露在外的葉片，用洗衣粉水將外植體表面清洗干凈，流水沖洗30min～60min；b）用75%酒精浸泡消毒30s～60s；c）無菌水沖洗2遍；d）0.1%HgCl2溶液加1～2滴Tween-20消毒10min～15min，期間不斷搖動；e）無菌水沖洗5～6次，無菌濾紙吸干水分。6.3組培快繁育苗6.3.1初代培養DB50/T1692—2024用解剖刀將消毒處理后的外植體外層葉片剝掉，接種到芽誘導培養基中，初代培養外植體每瓶宜接種2～3個。培養室溫度保持在（25±1）℃,光照強度2000lx～3000lx，光暗交替12h，誘導時間為40d～60d。6.3.2繼代增殖用解剖刀將叢生芽的黃葉和原有的培養基去除干凈，分割并接種到繼代增殖培養基上，繼代增殖每瓶宜接種6～8株。培養室環境同初代培養，30d繼代1次。6.3.3生根培養將叢生芽分割成單芽，接種在生根培養基中進行生根，每瓶宜接種8～10株。培養室環境同初代培養。7煉苗7.1組培苗質量要求植株應健壯挺拔、形態完整，株高2.5cm～5.0cm，葉數3～5片，幼苗基部長出3條以上、長1cm~3cm的新根，根系粗壯有活力。7.2煉苗方法將符合7.1要求的瓶苗移出培養室，瓶中加入少量水，松蓋煉苗2d～3d，馴化室溫度保持在20℃~28℃,光照強度在3000lx～5000lx之間。8組培苗移栽8.1基質準備宜采用泥炭土和珍珠巖（或蛭石）按4:1比例配制。8.2移栽方法將組培苗根部培養基清洗干凈，用0.2%的多菌靈+0.1%生根粉混合溶液浸泡2min～5min，栽至裝有基質的穴盤中，用0.2%的多菌靈+0.1%生根粉溶液澆透基質。9養護管理9.1溫度培養室溫度控制在20℃~25℃。9.2濕度移栽后，宜用薄膜和遮陽網保濕遮光，保持空氣濕度在70%～80%。9.3光照培養室光照強度保持在3000lx～5000lx之間。移栽14d后，逐漸打開薄膜和遮陽網。9.4肥水管理4DB50/T1692—2024移栽14d內，采用噴霧補水，以后采用噴淋澆水