ICS66.020.20CCSB00/09YNZYC云南省中藥材種植養殖行業協會團體標準GreenMedicinalMaterialsTechnicalregulationsfortheproductionoftissuecultureseedlingofCurculigoorchioidesIT/YNZYC0122—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容有可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由云南省中藥材種植養殖行業協會提出并歸口。本文件起草單位：云南省農業科學院藥用植物研究所、云南昊晨農業有限公司、云南植蟲藥生物科技有限公司。本文件主要起草人：起明菊、楊美權、張金渝、曾祥飛、楊維澤、楊天梅、左應梅、趙露琴、許宗亮、王麗、李紀潮、朱新焰。1T/YNZYC0122—2024綠色藥材仙茅組培苗生產技術規程本文件規定了仙茅組培苗培養準備、外植體采集和處理、組織培養、馴化、包裝、標識和運輸。本文件適用于云南省仙茅組培苗的生產。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T496肥料合理使用準則通則NY/T2306花卉種苗組培快繁技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1組織培養利用植物細胞的全能性，采集仙茅幼嫩葉，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養以獲得再生的完整仙茅植株。3.2外植體從健壯鮮活植物體上獲取的用于植物組織培養的組織或器官。3.3馴化組培苗從人工控制的培養條件到自然適應的過渡過程。4培養準備4.1生產場地與設備應符合“NY/T2306”的規定要求。4.2接種室消毒按照每15m2配置1根30w紫外燈的標準，每天用紫外燈照射殺菌1h,每周用臭氧發生器消毒2次~3次，臭氧濃度≥20mg/m3,時間≥30min。4.3培養基配制以MS培養基為基本培養基，添加瓊脂4.0g/L～4.5g/L，蔗糖30g/L，調節pH值為5.8，激素和添加物配方見附錄A。4.4培養基消毒分裝并密封好的培養基放入121℃下高壓滅菌20min，自然冷卻至壓力表指針降至0時，開鍋取出備用。5外植體的采集和處理2T/YNZYC0122—20245.1外植體選擇取生長旺盛，無病蟲害的植株。5.2采集時間4月～6月，用75%多菌靈粉劑500倍液噴施植株，每隔3d噴施一次，連續噴施5次。5.3采集方法取幼嫩葉，采集后加標簽，標明母株編號、采集地點、采集時間等。若葉片30min內不能處理，則需裝入自封袋中，排除空氣后密封保存；若需長途運輸2d～3d,需冷藏保存。5.4表面清潔用肥皂液清洗10min～15min，滴加3滴～4滴吐溫-80振搖10min～15min，置于自來水下沖洗50min～70min。5.5消毒外植體消毒按以下步驟進行：a在超凈工作臺上，用75%酒精消毒10s～15s，無菌水沖洗2次～3次。b用飽和漂白粉溶液消毒20min～30min，無菌水沖洗4次～5次。c用0.05%升汞溶液消毒10min～15min，無菌水沖洗8次～9次。5.6消毒廢液的處理使用過的氯化汞溶液按照國家有關劇毒化學品使用的法規進行回收處理。6組織培養6.1初代培養將消毒好的仙茅葉片，剪去接觸消毒液的傷口，剪成長約0.5cm～1.0cm的小段，將剪好材料平鋪于培養基中，接種材料與培養基充分接觸，分布均勻，接種完畢立即蓋好瓶蓋并作好標記，注明材料名稱、接種日期等事項，先暗培養20d～30d再轉光培養30d～40d，形成增殖苗。6.2增殖培養取誘導或繼代獲得叢生芽，將叢生芽剪成單芽，將單芽從基部剪成葉片和莖段。莖段基部接種于繼代培養基中，葉片剪成長約0.5cm～1cm的小段，平鋪于繼代培養基中，轉接周期為50d～60d。6.3生根培養將增殖的叢芽切割成單個完整的幼芽，按極性接種于生根培養基中，培養50d～60d可煉苗。6.4培養條件培養溫度為25℃±2℃,光照強度為2000lux～3000lux，每日光照12h。6.5生根苗質量要求植株生長健壯，苗高5cm以上，根系多于3條。7馴化7.1馴化棚搭建與栽培環境相近的設施大棚或小拱棚，遮光率40%～60%，架設噴灌或滴灌。移植前擰松瓶蓋放置在馴化棚內培養5d～7d。3T/YNZYC0122—20247.3移植取出組培苗，用清水洗凈培養基，按5cm×10cm的密度栽植于泥炭土：壤土：珍珠巖（1:1;1）的混合基質中。7.4馴化管理7.4.1溫度要求苗床溫度應控制在15℃~30℃,當溫度高于30℃時，兩側通風或揭膜降溫。7.4.2空氣濕度1個月內，保持空氣濕度在80%以上。2月后，保持空氣濕度在60%～80%。7.4.3施肥管理移植2個月后，每隔10d噴施0.2%氮磷鉀為15:15:15的水溶肥1次；定植3個月后，每隔15d噴施0.3%氮磷鉀為15:15:15的水溶肥1次。肥料的使用應符合NY/T496的要求。7.5病蟲害防控采用75%的百菌清600倍液或65%的代森錳鋅500倍液交替使用，每月噴藥1次～2次。7.6出圃培育90d以上，株高12cm以上可出苗。8包裝、標識和運輸8.1包裝以100株為單位捆綁，用塑料袋或無紡布袋包裹根部，放入箱內包裝。8.2標識外包裝箱上需貼上標識，注明品種（含品系）、規格、等級、數量、生產