35DB35/T2034—2021鴨瘟強(qiáng)弱毒核酸鑒別診斷技術(shù)Quarantineprotocolforvirulentandattenuatedstrainsofduckplaguevirusinfection2021-12-29發(fā)布2022-03-29實(shí)施福建省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)DNA：脫氧核糖核酸（DeoxyriboPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymerasTAE：三羥甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸（Trihydroxymethylaminomethane-boricacid-5.2UL2基因特點(diǎn)非必需基因，在DNA復(fù)制過(guò)程中可將脫氧尿嘧啶核苷三磷酸錯(cuò)誤插入或是胞嘧啶的脫氨基造成的尿嘧啶殘基切除，保證DNA復(fù)制的正確性和順利進(jìn)行。對(duì)GenBank中登錄的鴨瘟病毒（強(qiáng)毒株和弱毒株）的UL226.2.9引物（Primer10μmol/L。根將采集的組織（肝臟、食道粘膜假膜）經(jīng)剪碎處理后，與磷酸鹽緩沖液按體積比1:3的比例制成組25℃)作用20min。），6.4.5加入1/10體積的3M乙酸鈉和2倍體積冰凍預(yù)冷的無(wú)水乙醇混勻后，-20℃放置1h。3以56℃30min滅活的鴨瘟強(qiáng)毒、弱毒病毒），瘟弱毒陽(yáng)性；當(dāng)待檢樣品出現(xiàn)約1019bp和42O2.9gKH2PO4將上述試劑溶于800mL水中，定容至1000mL，高壓滅菌A.210%十二烷基磺酸鈉溶液取10g的SDS粉末溶解在70mL水中，加熱到70℃,攪拌待完全溶解后，定容到100mL，高壓滅菌A.5.1配制0.5mol/L乙二銨四乙酸二鈉溶液（5A.6溴化乙錠溶液置微波爐中加熱至完全融化，待冷至50℃~60℃時(shí)，加溴化乙錠（EB）溶液5μL，搖勻后倒入6(資料性)電泳圖鴨瘟強(qiáng)弱毒核酸PCR檢測(cè)結(jié)果電泳圖見(jiàn)圖B.1。bp圖B.1鴨瘟強(qiáng)弱毒核酸PCR檢測(cè)結(jié)果電泳圖7TAACGTCGTTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTGCCAGTCAACCGGCTCAACGCCACGACCTTCCAGGTATTCATTGGATCACATAAGATGAATGGCTTTCTAGACAGCGGTGATGGATGGCTATATTTCAAAACACAATGCTTGCGACAATTCGGTTCCTGAGCATGCACGCCCCACAGCATAAACACTAATCCTTCCTTATTGTCATGTAACCATTGTAATACAGATTTGACTATACCAACGTCTACATGCGATCCCGGATGCCCCTTTCGTACTGTGAGGGTGGTATTTAACAACAAAACTCCAGCTTTGGCCCGGCAGCCATGATCAACAATTTTCGTCTCTGGGTAAGAGCGCCGAACGGCCGATAATATATTACGTAGGCTAGGAGGTATCCTCCGCACGCTGAATGCGAGCCCGTGAGCCTGGCCGGGTTGATGATATGGATCTTGCCCAACTATGATGACTTTTACATCACAGTACCTCGTCCATGTAAATATTTCATTTTTTGGCGGCAGGACTTCTTCGATGTCACAGCGCCGTTCATACTCAAGTAACCCCACTTCCGATTGTAGCTCTTGGTATAATACTTCCCGCCAAGCATCGCCAATACAATAATCGCCGCTCAATTTTTCCGGACTATTAAACCACGAAGGCGCGACCTCACCGCGACCGCTGCTGTTCGACGTCTGAGGTTGTTGTGCTATACCGCCCCCACAGGCAACGAAACCCGCTGGCGCACCACAAGGCCTGCGTCGTTTCGGCGCCTGGGACGGAGACGGGAGCCTATCGTCGGCCGGGTTCACTTTTGTCATGTCTTCGGCCATATCTCGAGTCTGGATCGAATGCATAACGGATGCTGGCCTGAGGGTCTTTCATATTCGCGTTTCCGTGGCAGGTTCTGTCATTTGTAACGTCGTTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTGCCAGTCAACCGGCTCAACGCCACGACCTTCCAGGTATTCATTGGATCACATAAGATGAATGGCTTTCTAGACAGCGGTGATGGATGGCTATATTTCAAAACACAATGCTTGCGACAATTCGGTTCCTGAGCATGCACGCCCCACAGCATAAACACTAATCCTTCCTTATTGTCATGTAACCATTGTAATACAGATTTGACTATACCAACGTCTACATGCGATCCCGCTGGCGCACCACAAGGCCTGCGTCGTTTCGGCGCCTGGG