《基因工程》思考題第一章緒論1.簡述基因操作、基因重組和基因工程的關系。2.為什么說基因工程是生物學和遺傳學發展的必然產物？3.簡述基因的結構組成對基因操作的影響。4.談談你對gene的認識，并簡要說說gene概念的演變過程.5.如何理解gene及其產物的共線性和非共線性？6.試從理論和技術兩個方面談Gene

Engineering誕生的基礎.第二章基因工程的基本原理與支撐技術1.試比較原核基因組與真核基因組的結構和功能特點2.試比較原核基因和真核基因表達調控的主要方式和特點3.分析比較瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳的異同點？4.瓊脂糖凝膠電泳中，簡述影響DNA在凝膠中遷移速率的因素.5.小量制備質粒DNA，用質粒中特定的酶切發現切割不動，試分析可能原因及克服方法？6.在基因操作實踐中有哪些檢測核酸和蛋白質分子量的常規方法？7.印跡分子雜交有哪些種類，并說明在什么情況下需要使用這些方法。8.核酸分子的標記有哪些方法，各有何特點？9.由mRNA反轉錄成cDNA和DNA的PCR擴增是兩個完全不同的酶催化反應過程，如何將兩個過程聯系在一起，實現由mRNA起始擴增出DNA？10.Primer是PCR反應體系的四大要素之一，PCR的許多應用都是通過primer設計來實現的，請問primer設計的一般原則是什么？11.在PCR反應的后期，或者循環次數過多時，反應體系中就會出現一種所謂的平臺效應（Plateaueffect），請問什么叫Plateaueffect？產生Plateaueffect的原因有哪些？12.在對PCR產物進行電泳檢測時，有時會出現拖帶或非特異性擴增條帶，請分析其原因？如果檢測結果是看不到DNA帶或DNA帶很弱，那又是為什么？13.通過雙向蛋白質電泳發現某蛋白質與某植物的一種表型密切相關，若要利用編碼該蛋白質的基因來轉基因植物，試問如何分離得到該基因？14.現有一序列已知的DNA片段和一序列未知的DNA片段，你分別如何設計測序策略？15.設想一下在什么情況下你希望知道一個基因或一段DNA的序列？16.什么叫有性PCR？有性PCR導致DNA重組的分子機制跟體內重組有何異同？17.ExplainthePCR.Listthestepsincarryingitout;includeallthecomponentsandspecialconditions,explainingwhyeachoneisused.Illustratetheprocesswithappropriatelabels.Usethecorrectscientificterminologyinyourexplanation.第三章基因工程操作的基本條件1.試指出影響限制性內切核酸酶（Restriction

endonuclease）切割效率的因素.2.在酶切緩沖液中，一般需加入BSA，請問加入BSA的作用是什么？并簡述其原理？3.何謂Star

activity？簡述Star

activity的影響因素及克服方法.4.某DNA序列中存在DpnI酶切位點，以此DNA為模板，在體外合成DNA序列，當用該酶進行酶切時，發現切割不動，試分析可能原因？5.天然的質粒載體（plasmid

vectors）通常需經改造后才能應用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位點等。試問在此過程中如何增減酶切位點？6.當向細菌培養基中加入氯霉素時，可以使細菌質粒的拷貝數得到擴增，試分析其原理.7.抗性基因（Resistant

gene）是目前使用的最廣泛的選擇標記，常用的抗生素抗性有哪幾種？并舉兩例說明其原理.8.常用的受體細胞有哪些?各有什么特點?9.在基因工程中,選擇受體細胞時要考慮什么問題?第四章基因工程的基本操作過程1.簡述大腸桿菌的經典轉化操作過程。2.用作電轉化的宿主細胞也必須處于“感受態”，這種感受態與傳統的感受態有何不同？3.電轉化技術還有哪些應用？4.DNA轉化有哪些方法，各有何優點？5.Explainwhatrestrictionenzymesare,whattheydoandwhytheywerekeytostartingthegeneticengineeringrevolution.Showhowrestrictionenzymesproducestickyandbluntendcuts.Drawatypicalrestrictionenzymesiteandexplainwhatapalindromicsiteis.6.基因克隆的篩選方法主要有哪些？它們的技術特征是什么？7.ListthebasicstepsinvolvedinGENETICENGINEERINGanddescribewhateachcomponentdoes.DrawapictureshowingthevariousstepsincloningtheInsulingene.8.抗性基因（Resistant

gene）是目前使用的最廣泛的選擇標記，常用的抗生素抗性有哪幾種？并舉兩例說明其原理.9.何為α-complement？如何利用α-complement來篩選插入了外源DNA的重組質粒？10.以pUC18系列為載體，外源基因經酶切和載體連接后，將其導入處于感受態的宿主細胞中，篩選菌落，設計一個實驗證明外源基因能在宿主細胞中轉錄表達。第五章目的基因的克隆和基因文庫的構建1.簡述目的基因的克隆策略。2.采用同聚物加尾的方法進行dscDNA克隆，一般采用dC/dG而不采用dA/dT，簡述其原因？3.克隆cDNA常見的問題是什么？4.如何使用Methylase對克隆DNA進行保護？此步驟有什么意義？5.cDNA法克隆目的基因的局限性表現在哪里？6.構建大片段基因組文庫過程中需要注意哪些問題？7.均一化cDNA文庫構建的基本原理是什么？8.何謂基因組DNA文庫？何謂cDNA文庫？兩者有何區別？9.在構建基因組文庫的過程中，最需要注意的問題是什么？如何解決？10.何謂基因文庫的代表性？在構建基因文庫的過程中，要提高文庫的代表性，通常采用什么策略？第六章基因表達體系及其應用1.試比較外源基因在細菌中三種表達方式（融合蛋白、分泌蛋白、包涵體）的優缺點。2.試述細菌基因工程的發展現狀及前景。3.工程酵母和工程細菌在表達外源蛋白時有何顯著的區別？4.舉例說明酵母基因工程相對于大腸桿菌基因工程的優勢與不足。5.一個酵母表達載體應包括哪些基本元件？6.簡述附加型表達載體和整合型表達載體在表達外源基因上的區別。7.如何改善酵母工程菌的表達質量？8.釀酒酵母表達系統的不足之處表現在哪里？9.如何實現酵母工程菌高效表達外源蛋白？第七章基因工程菌的大規模培養1.與普通的微生物發酵相比，基因工程菌發酵有何特點？2.基因工程菌的不穩定性表現在哪里？如何改善？3.常見的深層培養方式有哪些?有什么特點?4.根據目前啤酒生產存在的問題，你認為基因工程技術在改良啤酒生產菌株方面有哪些可做的工作？綜合:專業術語解釋1.markergene2.geneticallymodifiedorganisms3.Insertionalinactivation4.Competent

cell5.gene6.genecloning7.Insitucolonyhybridization8.complementaryDNAcloning9.cloningvector10.genelibrary11.clone12.geneticengineering13.Southernblot14.expressionvector15.Polymerase

chain

reaction16.restrictionenzyme17.selectablemarker18.geneprobe19.recombinantDNAtechnology20.plasmid1.試以pUC18為例說明pUC系列質粒在基因工程中得到最廣泛應用的原因。2.試述利用α-complement篩選重組子的原理。3.試述提高外源基因在大腸桿菌細胞中表達水平的措施及其依據。4.如何獲得目的基因？其策略和選擇原則是什么?5.試以pBR322為例說明一個理想的質粒載體必須具備的條件.6.試述影響限制性內切酶活性的因素及對策。7.試述核酸分子雜交的基本原理。8.試比較原核基因組和真核基因組的結構與功能特點。9.寫出利用畢赤酵母生產乙肝表面抗原的技術過程,并與釀酒酵母表達系統相比較，評價其經濟性。10.試述利用大腸桿菌生產分泌型人胰島素的兩條技術途徑,并對其優越性進行評價。11.寫出從細菌基因組中克隆糖化酶基因并通過微生物基因工程技術生產糖化酶的基本步驟。12.試對人血清白蛋白的市場現狀和前景進行分析,并比較不同酵母細胞表達人血清白蛋白的優劣.13.基因工程載體應具備什么條件？。14.試述構建基因組文庫的目的和意義15.與真核表達系統相比，原核表達系統的基因表達有何特點？16.如何科學地看待基因工程技術對人類社會的影響？1.第四次工業大革命（1）醫藥：抗病毒劑、抗癌因子、新型抗生素、疫苗、抗衰老保健品、心腦血管藥物、生長因子、診斷試劑等（2）輕工食品產業：氨基酸、助鮮劑、甜味劑、淀粉酶、纖維素酶等（3）能源：二次采油、燃料乙醇（4）環境保護：生物材料、超級降解細菌（5）信息產業：生物芯片、生物電腦第二次農業革命（1）生物農藥（2）抗除草劑、抗病蟲害農作物（3）高產、優質新品種（4）抗逆（抗寒、抗旱、耐鹽）農作物（5