長沙能潤醫學檢驗所鄧鵬HLA基因檢測1.HLA和HLA分型檢測2.HLA分型方法比較3.強直柱脊椎炎TableofContents1.HLA和HLA分型檢測2.HLA分型方法比較3.強直柱脊椎炎TableofContents什么是HLAMHC、HLA、亞型、關聯什么是HLA分型I型，II型，III型，IV型HLA分型與疾病檢測骨髓與器官移植，免疫性疾病，代謝性疾病，神經內科疾病，骨科疾病等根本概念

人類白細胞抗原humanleukocyteantigen,HLA

MHCMajorhistocompatibilitycomplex，主要組織相容性復合體〔包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、SLA、RLA、GpLA、B等〕1940年代，Snell和Gorer小鼠間的腫瘤及皮膚移植試驗發現：決定小鼠間移植排斥與否〔即組織相容性〕的基因位于17號染色體短臂命名為組織相容性-2〔H-2〕H-2是一個由許多緊密連鎖的基因位點構成的復雜系統1950年代Dausset經產婦血清進行個體之間抗體與白細胞凝集和細胞毒試驗發現人的MHC，命名為HLA基因位于第6號染色體短臂

1960年代，Benacerraf不同品系的豚鼠對一些抗原的免疫應答能力比較發現：控制機體對不同抗原的免疫應答能力的基因〔Ir基因〕位于MHC基因復合體內。Benacerraf、Dausset和Snell三位科學家分別從不同角度對MHC的免疫遺傳學進行的開拓性研究，榮膺1980年的諾貝爾醫學和生理獎。HLA共分為4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，廣泛存在與各種組織細胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B細胞、巨噬細胞和活化T細胞中；III型分子為補體系統，包括C2和C4位點，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴細胞、某些細胞毒性T細胞和白細胞中。HLA分型

HLA基因系統的多態性及一些主要基因座位的等位基因數正式命名顯示多態性的HLA基因座位有31個，共2320個等位基因。

圖中所示為常見基因座位的等位基因數。及一些主要基因座位的等位基因數正式命名顯示多態性的HLA基因座位有31個，共2320個等位基因。

圖中所示為常見基因座位的等位基因數。HLA分型的根本檢測方法：細胞學方法測抗原特異性〔型〕血清學方法測抗原特異性〔型〕〔微量淋巴細胞毒試驗〕分子生物學方法測等位基因PCR/SSPPCR/LuminexPCR/SBTPCR/二代測序PCR/流式細胞儀HLA抗原和等位基因命名:用血清學及細胞學方法檢測抗原特異性:HLA-B27,HLA-DR4〔血清學方法〕HLA-DPw2〔細胞學方法〕用分子生物學方法檢測等位基因：HLA-DRB1*0405

位點名主型等位基因序號HLA-B*27

07例如HLA-B27HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B*2706HLA-B*2707HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711...HLA-B*2723LociConsideredtobeMatchedACBDRDQDP4MbpFather’sMother’sHLA:無血源相關10/10

同胞兄妹單倍型全相合，半相合父母親半相合

17臍血干細胞移植外周血干細胞移植骨髓干細胞移植

常見HLA與疾病關聯疾病HLA抗原相對風險—————————————————————————強直性脊椎炎B2789.8Behcet綜合征B5110-15多發性硬化癥DR24.8乳糜瀉DR310.8Grave’s病DR33.7系統性紅斑狼瘡DR35.8類風關DR44.2胰島素依賴型糖尿病DR3/DR425.0重癥肌無力DR32.5小結HLA的三個特性使其成為熱點：決定組織相容性高度多態性與疾病關聯1.HLA和HLA分型檢測2.HLA分型方法比較3.強直柱脊椎炎TableofContentsHLA基因分型

低分辨:SSPrSSOLuminexbeadforclassI&classII中等分辨HLA分型24Nextgenerationsequencing高分辨高通量HLA分型IlluminaSequencingbySynthesis(SBS)chemistryMiSeqPacificBiosciences-Single-moleculereal-timesequencing27Sequencingbasedtyping(SBT)高等分辨HLA分型Sanger測序原理Sanger測序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ACGTACGdNTPddNTP-DyesATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TTGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACACGTACGTSanger測序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACHLA分型模板的擴增LongPCR(each:HLA-A,-B,-C,-DR,-DQ,DP,MICA)2.Amplicons(PCR:exon+loci)LongPCRtoamplifythetargetgeneAssemblyandAlignmentProblemsinsequenceassemblyAmplicons-HLACoverageHLA-AHLA-BHLA-CHLA-DQB1HLA-DPB1HLA-DQA1HLA-DRB1HLA-DRB3HLA-DRB4HLA-DRB5HLA-DPA14.1kb2.6kb4.2kb10.3kb9.7kb7.3kb7.1kb4.1kb1.HLA和HLA分型檢測2.HLA分型方法比較3.強直柱脊椎炎TableofContentsAS的病因基因有關：HLA-B27的轉基因大鼠成功地培育出強直性脊柱炎的動物模型。目前已發現包括B27在內的3種基因與此病相關；并且有明顯家族發病傾向。免疫有關：MHC，T-Cells感染有關：相關學說認為，來自尿道、前列腺、精囊的抗原經Batson循環到達骶髂關節、脊柱和眼睛等部位而發生相關病變，解釋了男性好發的原因。AS的經典檢查體征：骶髂關節炎檢查：“4〞字試驗、骶髂關節壓迫試驗、髂棘推壓試驗、骨盆擠壓試驗附著點炎檢查：坐骨結節、肋軟骨、肋胸關節、恥骨聯合等壓痛脊柱和胸廓檢查：Schober試驗、指地距、枕墻距、胸廓活動度等骶髂關節

AS的經典檢查B27測序的AS檢查HLA-B27陰性的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27陰性AS患者的HLA-B27陽性率達90-95%我國漢族人群HLA-B27陽性率2-7%（3千萬-1億），AS患病率為0.3%（＞4百萬），大部分HLA-B27陽性者并不發生AS。HLA-B27與AS強直性脊柱炎類風濕性關節炎地區分布種族差異大世界性性別分布男＞女女＞男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類風濕因子（－）（

）HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標志。連鎖不平衡學說分子模擬學說關節源性肽假說其他：

T細胞受體庫假說

超抗原假說

B27