ICS65.120CCSB46團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/SHAAV021—2024混合型飼料添加劑甜味劑中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定高效液相色譜法Determinationofsaccharinsodium,neotameandneohesperidindihydrochalconeinsweeteneroffeedadditiveblender-Highperformanceliquidchromatography2024-04-10發(fā)布2024-04-10實(shí)施上海畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)發(fā)布T/SHAAV021-2024前言 II1范圍 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4原理 5試劑與材料 6儀器與設(shè)備 7試樣制備與保存 8測(cè)定步驟 9結(jié)果計(jì)算與表述 10精密度 2附錄A(資料性) T/SHAAV021-2024前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利,本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由上海市畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位:上海美農(nóng)生物科技股份有限公司、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所、江蘇立華牧業(yè)股份有限公司、挑戰(zhàn)集團(tuán)、通威股份有限公司、上海禾豐飼料有限公司。本文件主要起草人:李洋洋、楊海鋒、司文帥、劉惠芳、黃志英、劉海燕、李俊、陳磊。本文件首批承諾執(zhí)行單位名單:上海美農(nóng)生物科技股份有限公司、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所、江蘇立華牧業(yè)股份有限公司、挑戰(zhàn)集團(tuán)、通威股份有限公司、上海禾豐飼料有限公司。T/SHAAV021-2024混合型飼料添加劑甜味劑中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定高效液相色譜法本文件規(guī)定了混合型飼料添加劑甜味劑中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于混合型飼料添加劑甜味劑中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的測(cè)定。本方法糖精鈉檢出限為200mg/kg、紐甜檢出限為50mg/kg、新甲基橙皮苷二氫查耳酮檢出限為20mg/kg,糖精鈉定量限為400mgikg、紐甜定量限為100mg/kg、新甲基橙皮苷二氫查耳酮定量限為40mg'kg.2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GBT6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理混合型飼料添加劑甜味劑充分溶解在30%的乙腈水溶液后用配有紫外(UV)檢測(cè)器或二極管陣列 (DAD)檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量計(jì)算出糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量。5試劑與材料除非有特殊說(shuō)明,本測(cè)定方法中所用試劑均為分析純,水為GBT6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1乙腈(色譜級(jí))。5.2磷酸氫二銨。5.3磷酸。5.4糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品(CAS:6155-57-3):純度≥99%。5.5紐甜標(biāo)準(zhǔn)品(CAS:165450-17-9):純度≥98%。5.6新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)品(CAS:20702-77-6):純度≥99.5%。5.70.02molL磷酸氫二銨緩沖溶液:稱取2.64g磷酸氫二銨,加入700mL水,用磷酸調(diào)PH至2.5,定容到1000mL容量瓶中,用0.45μm濾膜抽濾。5.8糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取0.1g(精確至0.00001g)預(yù)先在120℃烘箱烘干4h的糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品(5.4)、0.1g(精確至0.00001g)紐甜標(biāo)準(zhǔn)品(5.5)、0.1g(精確至0.00001g)新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)品(5.6)于100mL容量瓶中,加入30%乙腈水溶液定容,搖勻靜置。此溶液糖精鈉濃度為1mg/mL,紐甜濃度約為1mg'mL、新甲基橙皮苷二氫查耳酮濃度為1mg/mL。5.9糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別吸取0.1mL,0.5mL,1mL,5mL,10mL糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液至10mL容量瓶中,用30%乙腈水溶液定容,臨用現(xiàn)配。T/SHAAV021-20245.10水性微孔濾膜:孔徑0.45μm6儀器與設(shè)備6.1分析天平:感量0.00001g,感量0.o00lgo6.2超聲波震蕩器。6.3高效液相色譜儀:配有紫外(UV)檢測(cè)器或二極管陣列(DAD)檢測(cè)器。7試樣制備與保存按GBiT20195制備樣品,至少200g,粉碎使其全部通過(guò)0.42mm孔徑的分析篩,充分混勻,裝入磨口瓶中,避光保存,備用。8測(cè)定步驟8.1樣品溶液制備稱取試樣0.5g(精確至0.o00lg)于50mL燒杯中,加入適量30%乙腈水溶液超聲波震蕩提取10min;將提取液移入100mL容量瓶中使用30%乙腈水溶液定容,搖勻靜置。提取液經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾后用于色譜分析。8.2高效液相色譜參考條件a)色譜柱:C8柱,柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒度5m;b)流動(dòng)相:乙腈+0.02mol/L磷酸氫二銨緩沖溶液=35+65;C)流速:lmL/min;d)檢測(cè)波長(zhǎng):糖精鈉、新甲基橙皮苷二氫查耳酮檢測(cè)波長(zhǎng)283nm;紐甜檢測(cè)波長(zhǎng)210nmoe)柱溫:30c;f)進(jìn)樣體積:10L。8.3標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液和試樣溶液測(cè)定分別吸取糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液,按8.2的色譜條件進(jìn)行色譜分析測(cè)定。測(cè)定時(shí),樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液等體積進(jìn)樣測(cè)定,并保證樣品溶液中的響應(yīng)值均應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性范圍內(nèi),試樣溶液中待測(cè)物超出線性范圍時(shí)適當(dāng)稀釋后再用于色譜分析。糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖參見(jiàn)附錄A。9結(jié)果計(jì)算與表述試樣中糖精鈉、紐甜和新甲基橙皮苷二氫查耳酮的含量rw,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)"%"表示,按下式計(jì)算:CXVXnmx1000式中:C由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的試樣中糖精鈉、紐甜、新甲基橙皮苷二氫查耳酮的濃度,