背景介紹甲胎蛋白（AFP）是臨床診斷肝細胞癌（HCC）最廣泛使用的血清標志物，可用于HCC的診斷、治療評估、預后預測和復發監測。傳統的AFP蛋白的檢測方法存在分析成本高、操作復雜等問題。因此，迫切需要開發一種簡便、高效且成本低的方法用于癌蛋白檢測。銀納米粒子具有較好的光學性能，制備成本低，可用于構建比色傳感實現蛋白檢測。基于銀納米粒子的比色法與傳統的蛋白檢測方法相比，具有操作簡單、快速且具有較低的成本效益。文章亮點1.提出了一種銀納米粒子比色傳感器可實現甲胎蛋白AFP的靈敏、高效檢測;2.操作簡單，只需要將分析樣本和免疫試劑相混合，發生免疫識別后即可檢測;3.與傳統的ELISA和其他蛋白檢測方法相比，本方法具有操作簡單、快速且具有較低的成本效益，為癌蛋白的檢測提供了一種新方案。內容介紹1

實驗部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實驗方法1.2.1

AgNPs的制備種子銀納米顆粒的制備：將20mL質量濃度1%檸檬酸三鈉溶液和75mL超純水加入至250mL圓底燒瓶中，然后將混合液加熱至70°C，恒溫反應15min。2

結果與討論2.1

AFP檢測原理由于AgNPs具有較大的消光系數，表現出尺寸依賴的光學特性，在生物傳感領域展現出優異的性能。2.2

AgNPs的表征圖2aTEM表征表明制備的銀納米顆粒的形貌為球形，粒徑均勻，且具有較好的分散性，平均粒徑為20nm（圖2b）。a.TEM；b.

粒徑分布；c.XRD；d.UV-vis圖2

AgNPs的表征Fig.2

AgNPscharacterization2.3

AgNPs-抗體偶聯物表征為實現AFP特異性檢測，需采用AFP特異性抗體對AgNP表面進行修飾。在制備AgNPs-抗體偶聯物之前，首先采用SH-PEG-COOH對AgNPs表面進行功能化，以通過碳二亞酰胺法進行抗體與AgNPs的連接，并且修飾的PEG可以保持AgNPs膠體的穩定性，使其自身不發生團聚。圖3a展示了AgNPs與抗體探針結合前后的UV-vis表征，可以看到經過層層修飾后，AgNPs的最大紫外吸收峰發生了紅移；裸AgNPs的吸收峰為392nm，經過PEG修飾后，移動至397nm，繼而連接完抗體（包被或標記）后，其紫外吸收峰位置移動至403nm。圖中I-IV分別表示裸AgNPs，AgNPs-PEG，AgNPs-PEG-antiAFP(包被)偶聯物，AgNPs-PEG-antiAFP(標記)偶聯物a.UV-vis；b.DLS圖3

AgNPs經PEG和抗體修飾前后的表征Fig.3

CharacterizationofAgNPsbeforeandaftermodificationwithPEGandantibody2.4

免疫反應條件優化免疫反應時間是影響免疫測定性能的重要參數，因此，我們研究了孵育時間對免疫復合物形成的影響。圖4展示了AgNPs免疫復合物的粒徑和孵育時間的關系。a.不同孵育時間下AgNPs免疫復合物的DLS圖；

b.AgNPs免疫復合物的粒徑和孵育時間的關系圖4

AgNPs免疫復合物在不同免疫反應時間下的DLS表征Fig.4

DLScharacterizationofAgNPsimmune-complexesunderdifferentimmunereactiontime3

結論本文采用三明治夾心結構，以AgNPs標記抗體作為檢測探針，當體系中存在目標蛋白AFP時，抗原-抗體發生免疫識別，形成納米顆粒團聚體，可通過銀納米顆粒溶液顏色的變化檢測樣品中目標蛋白含量。