GB/T40193—2021DetectionandidentificationofAmaranthuspalmeriS.Watson國家市場監督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40193—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國植物檢疫標準化技術委員會(SAC/TC271)提出并歸口。本文件起草單位：中國檢驗檢疫科學研究院、中華人民共和國銀川海關、中華人民共和國中華人民共和國青島海關、中華人民共和國寧波海關、中華人民共和國無錫海關、中國環境科學研究院。1GB/T40193—2021長芒莧檢疫鑒定方法本文件描述了長芒莧的形態學和ITS序列檢疫鑒定方法。本文件適用于長芒莧的檢疫鑒定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文本文件。GB19489—2008實驗室生物安全通用要求GB/T27402—2008實驗室質量控制規范植物檢疫3.1.1雌雄異株dioecious注：單性花是一朵花中只有雄蕊或只有雌蕊的花，與兩性花相對。3.1.23.1.3在花或花序基部的退化的葉或葉狀結構。3.1.4花冠和花萼的合稱。注：莧屬植物的花無花冠和花萼之分。下列縮略語適用于本文件。DNA:脫氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)ITS:核糖體DNA內轉錄間隔區1和內轉錄間隔區2,以及5.8S核糖體基因(internaltranscribedspacers1and2andtheintervening5.8Srim:中著絲粒染色體(metacentricchromosome)GB/T40193—2021PCR:聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction)sm:亞中著絲粒染色體(submetacentricchromosome)st:近端著絲粒染色體(subtelocentricchromosome)TAE:Tris-乙酸電泳緩沖液(Trisacetate-EDTAbuffer)t:端著絲粒染色體(telocentricchromosome)4長芒莧分類信息分類地位：植物界(Plantae),被子植物門(Angiospermae),雙子葉植物綱(Magnoliopsida),石竹目(Caryophyllales),莧科(AmaranthaceaeJussieu),莧屬(AmaranthusL.),異株莧亞屬[Amaranthussubgen.Acnida(L.)AellenexK.R.Robertson]。其他基本信息見附錄A。4.2.1整體形狀：——斜升(inclined):莖或其分枝等以平緩的角度上升?！橘?creeping):莖及其分枝延地表或緊靠地面生長。長寬比在3:1到10:1之間的卵形葉?！古樞?oblanceolate):長寬比在3:1到10:1之間的倒卵形葉?！€形(linear):長寬比大于或等于10:1。4.2.2邊緣形狀：——外卷的(revolute):先端向外反折或外翹。4.2.3頂端形狀：——急尖(acute):整個葉、苞片、花被片等靠近頂點的——圓形(rounded):頂端邊緣呈圓弧狀。中脈從先端伸出成芒刺狀的結構。3GB/T40193—2021——鉆狀(subulate):錐形或錐鉆狀結構。4.2.5表面特征：——皺紋(rugose):皺縮的?！蔹c(punctate):種子表面的小洼點。——革質(coriaceous):具有皮革般的質地。4.2.7花序形狀：5方法原理輔助手段。6器具和試劑分子量標準物質等。4GB/T40193—20217現場和實驗室檢疫在檢疫現場采集植株鑒定用樣品，要求植株完整，形態學特征完好。花部鑒定用樣品，要求處于果將現場檢疫抽取的送檢樣品充分混勻，制成平均樣品。采用四分法，視樣品多少取平均樣品的二分之一至四分之三(較少樣品時)作為試驗樣品，稱取其質量并記錄，每份試驗樣品不少于1kg,剩余的平均樣品加貼標簽作為保留樣品保存。送檢樣品不足1kg的全部檢測。7.2實驗室根據樣品個體的直徑確定套篩的規格，從大到小依次套上不同孔徑的規格篩并加上底篩，將適量樣品倒入規格篩的上層內，蓋上篩蓋，用回旋法過篩(或用電動篩振蕩),使樣品充分分離，把過篩的篩上物和篩下物分別倒入白瓷盤內，用鑷子挑取雜草籽實，放于培養皿內。混雜于植物原糧和種子中的莧屬胞果或種子，一般在孔徑為5mm篩下物中獲得。當樣品量少時，也可將全部樣品放入白瓷盤中進行人工挑檢。在解剖鏡或放大鏡下鏡檢。進行植株花部特征和胞果內部特征觀察時，輔以解剖刀、解剖針等8鑒定方法8.1形態學鑒定狀花序、聚傘圓錐花序或球狀花序，頂生花序通常具退化的葉，每個二歧聚傘花序單元具苞片。花單性，雌雄同株或異株，腋生或頂生，聚生成單一或圓錐狀穗狀花序；每花有1苞片及2小苞片，干膜質；花被片0～5,大小相等或不等，綠色或著色，薄膜質，直立或向外反折，在果期直立，間或在花期后變硬或基部加厚；雄蕊5,少數1～4,花絲鉆狀或絲狀，基部離生，花藥2室；無退化雄蕊；子房具1直生胚珠，花柱有時具不明顯點狀或網狀。胚環形。x=16,17。GB/T40193—2021附錄B。序較短，短圓柱狀或球狀。雌株花序在花果期增厚，苞片及最外側花被片向外舒展先端變硬直。見附錄C。雄花苞片長4mm,等長或長于外側花被片，先端具長漸尖。頭2(-3)。見附錄C。被片長3.5mm～4mm,具突出外延成硬尖的中脈，先端長漸尖或小短尖；雄蕊5,短于內側花被片。種子近圓形至闊卵形、闊橢圓形，長0.90mm～1.12mm,深紅褐色至褐色，有光澤。常見莧屬種子形態特征見附錄C、附錄D和附錄E。56GB/T40193—20212n=34,2n=4m+2sm+5st+6t。見附錄C。8.2.1DNA提取及濃度測定使用常見商品化試劑盒提取植物基因組DNA。用以提取核酸的植物組織用量參照所采用商品化試劑盒使用說明。用紫外分光光度計或核酸濃度測定儀檢測所提取核酸濃度，濃度以達到8.2.2步驟中使用的商品化PCR試劑盒中要求的DNA模板用量為準。ITS序列擴增及測序的信息見附錄F。9結果判定參照8.1及附錄B、附錄C、附錄D和附錄E所述種子或葉片等部分組織形態特征，并與附錄G所列ITS參考序列一致性在99.70%以上時，可判定為長芒莧。標本的保存方法應符合GB/T27402—2008中4.5標本的要求。無害化處理應符合GB19489—2008中7.19廢物處置。7GB/T40193—2021(資料性)長芒莧其他基本信息A.1地理分布莧屬在全世界約74種，根據花部形態及雌雄異株等特性分為莧亞屬(Amaranthussubgen.Ama-ranthus),約13種，白莧亞屬[Amaranthussubgen.Albersia(Kunth)Gren.&.Godr.],約52種，和異株莧亞屬[Amaranthussubgen.Acnida(L.)AellenexK.R.Robertson],約9種。我國有20余種。長芒莧原產北美洲墨西哥西北部、美國加利福尼亞州南部至新墨西哥州和得克薩斯州。西印度群島(古巴、A.2經濟危害幾乎可以為害熱帶、亞熱帶地區種植的所有重要作物。與作物爭奪生長空間和資源，導致作物嚴重的經濟損失難以評估。A.3生物學特性條件有較好的抗逆生長。一年四季均可開花，主要花期在夏季。雌株每株生產種子20萬至60萬粒，在土壤中可存活數年。種子在5℃~35℃時均能發芽，在全光照時，生長速率可達每天5cm,有效地與作A.4傳播途徑種子易混雜在植物及植物產品中，如大豆、玉米等，遠距離傳播。還可通過農業灌溉體系和其他水流，或借助鳥類、牲畜、農機具等自然傳播。此外，長芒莧還是風媒傳粉植物，其花粉最遠可傳播至46km以外地區，可授粉遠處雌株。8GB/T40193—2021(資料性) 綠紋莧Amaranthusacanthochiton 22.花被片缺失或不規則宿存或敗育(短于1mm且不具明顯中脈) 32.花被片宿存且發育完好(至少1mm長且具明顯中脈) 53.種子長2mm～3mm;胞果長2.5mm～4mm;葉片狹披針形至線形 大麻莧A.cannabinus3.種子長約1mm;胞果不長于2mm;葉片闊披針形 4 南方莧A.australis4.胞果光滑或具不規則瘤突；苞片短于1.5mm,具纖細且伸出的中脈 5.花被片1或2,披針形至線形 65.花被片5,至少內花被片匙形 7 佛羅里達莧A.floridanus 7.胞果周裂，約1.5mm長；葉片薄膜質 8 葛氏莧A.greggii8.最長(最外側)花被片急尖或漸尖具伸出成硬尖的中脈；苞片和最外側花被片明顯長于內側花被片 長芒莧A.palmeri 9 瓦氏莧A.watsoni9.苞片具十分深重的中脈，中脈不伸出；花柱分支3 B.2雄株檢索表 2 52.苞片短于1mm,中脈幾乎不伸出 大麻莧A.cannabinus2.苞片長于1mm,或如果短于1mm時中脈明顯伸出 3 43.葉片常線形，寬少于1cm;葉片上面的花序不分支 佛羅里達莧A.floridanus 南方莧A.australis4.苞片具纖細中脈；外側花被片中脈不伸出 6 76.苞片約2mm長，長于外側花被片 6.苞片約4mm長，等長于外側花被片 長芒莧A.palmeri7.苞片等長于花被片，被明顯柔毛 瓦氏莧A.watsoni 898.葉片邊緣光滑 98.葉片邊緣具圓齒 綠紋莧A.acanthochiton9.葉片薄膜質 葛氏莧A.greggiiGB/T40193—2021(資料性)長芒莧形態特征C.1長芒莧植株長芒莧植株形態特征見圖C.1。圖C.1長芒莧植株C.2長芒莧花序長芒莧花序形態見圖C.2。C.3長芒莧花長芒莧花部形態特征見圖C.3。圖C.3長芒莧花部形態特征長芒莧種子形態特征見圖C.4和圖C.5。GB/T40193—2021寬頂端環狀邊種臍基端圖C.4種子形態示意圖(正面觀和側面觀)圖C.5長芒莧種子C.5長芒莧染色體及核型長芒莧染色體形態見圖C.6,核型分析見圖C.7。圖C.6長芒莧染色體形態(2n=34)(圖中標尺為2μm)GB/T40193—2021圖C.7長芒莧染色體核型分析(2n=4m+2sm+5st+6t)GB/T40193—2021(資料性)口岸常見莧屬種子形態特征比對口岸常見莧屬種子形態特征比對見表D.1。表D.1口岸常見莧屬種子形態特征比對表中文名形狀顏色長/mm寬/mm環狀邊長芒莧闊卵形紅褐色、褐色、深褐色明顯糙果莧闊卵形、近圓形紅褐色、褐色不明顯白莧近圓形褐色、深褐色明顯凹頭莧近圓形紅褐色、褐色、深褐色、黑色明顯或不明顯，種臍基部下凹布氏莧闊卵形褐色、深褐色明顯綠穗莧闊卵形、近圓形褐色、深褐色、黑色明顯刺莧闊卵形、近圓形紅褐色、褐色、深褐色明顯假刺莧闊卵形、近圓形紅褐色、褐色明顯反枝莧闊卵形褐色、深褐色、黑色明顯莧闊卵形、近圓形褐色、深褐色、黑色明顯合被莧闊卵形褐色明顯，種臍基部下凹菱葉莧闊卵形褐色、深褐色明顯，種臍基部下凹皺果莧近圓形黑色明顯或不明顯地中海莧近圓形黑色、深褐色明顯，種臍基部下凹南非莧近圓形黑色明顯北美莧近圓形黑色明顯GB/T40193—2021(資料性)常見莧屬種子特征圖c)白莧A.albusL.d)凹頭莧A.blitumL.圖E.1常見莧屬種子GB/T40193—2021g)刺莧A.spinosusL.j)莧A.tricolorL.圖E.1常見莧屬種子(續)GB/T40193—2021p)北美莧A.blitoidesS.Watson圖E.1常見莧屬種子(續)GB/T40193—2021(資料性)ITS序列擴增及測序信息ITS4:5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'ITS5:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3F.2擴增體系及程序模板DNA含量約20ng或以所采用的商品化PCR試劑盒說明書為準。擴增程序中，ITS序列退火溫度推薦為52℃~55℃。其余參數參照所采用商品化PCR試劑盒說ITS序列測序引物為ITS4及ITS5。GB/T40193