指畫顏料中苦味劑柚皮苷和苯甲酸地那銨含量的測定高效液相色譜法2022-04-15發布2022-04-15實施國家標準化管理委員會I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中國輕工業聯合會提出。本文件由全國玩具標準化技術委員會(SAC/TC253)歸口。本文件起草單位：上海海關機電產品檢測技術中心、深圳市計量質量檢測研究院、福建銘塔玩具股份有限公司、北京中輕聯認證中心有限公司、華測檢測認證集團股份有限公司、廣州海關技術中心。1指畫顏料中苦味劑柚皮苷和苯甲酸地那銨含量的測定高效液相色譜法警示——使用本文件的人員應有正規實驗室工作的實踐經驗。本文件并未指出所有可能的安全問題。使用者有責任采取適當的安全和健康措施，并保證符合國家有關法規規定的條件。本文件描述了指畫顏料中柚皮苷和苯甲酸地那銨含量的高效液相色譜測定方法。本文件適用于指畫顏料中柚皮苷和苯甲酸地那銨含量的測定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。采用乙醇作為提取溶劑，經超聲提取10min,離心，取出清液，殘留物再次提取，合并兩次提取清液，蒸至近干，加入50%甲醇水溶液溶解殘留物，過濾后，采用高效液相色譜進行分離，二極管陣列檢測5試劑和材料以下試劑除非另有規定，僅使用色譜純試劑及以上。實驗室用水符合GB/T6682規定的一級水要求。5.2甲醇。5.350%甲醇水溶液(體積分數)。5.4乙腈。5.5磷酸二氫鉀。5.6磷酸。5.70.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=4.3):稱取2.72g磷酸二氫鉀(5.5),溶于符合GB/T6682規定的一級水中，定容至1L,用磷酸(5.6)調至pH值為4.3。25.8柚皮苷(CAS號：10236-47-2)和苯甲酸地那銨(CAS號：3734-33-6)標準品：純度不低于98%。5.9柚皮苷標準儲備溶液：稱取適量柚皮苷(精確到0.1mg)標準品，以甲醇(5.2)配制成質量濃度為1000mg/L的標準儲備溶液，置于一18℃冰箱中，有效期為6個月。5.10苯甲酸地那銨標準儲備溶液：稱取適量苯甲酸地那銨(精確到0.1mg)標準品，以符合GB/T6682規定的一級水配制成質量濃度為1000mg/L的標準儲備溶液，置于4℃冰箱中，有效期為6個月。5.11柚皮苷標準工作溶液：以50%甲醇水溶液(5.3)逐級稀釋柚皮苷標準儲備溶液(5.9)制備一組標準工作溶液質量濃度為0.08mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L和10mg/L。有效期為24h。5.12苯甲酸地那銨標準工作溶液：以50%甲醇水溶液(5.3)逐級稀釋苯甲酸地那銨標準儲備溶液(5.10)制備一組標準工作溶液質量濃度為0.08mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L和10mg/L。有效期為24h。6儀器設備6.1高效液相色譜儀：配置二極管陣列檢測器或滿足條件的紫外檢測器。6.3離心機：離心能力為16000g,g=9.80665m/s2。6.4電加熱板：配溫度控制顯示裝置。6.5分析天平：精確至0.1mg。6.750mL具蓋離心管。7試驗步驟7.1試樣制備準確稱取0.2g(精確至0.1mg)待測樣品，置于50mL離心管(6.7)中，加入10mL乙醇(5.1),振蕩1min使試樣充分浸潤，在超聲波清洗器(6.2)中室溫下超聲提取10min,使用離心機(6.3)于16000g下離心5min,取出清液，向殘留物中再次加入10mL乙醇(5.1),按上述方式提取，離心并取出清液。合并兩次提取清液，在電加熱板(6.4)上蒸至近干，溫度應不高于150℃。加入50%甲醇水溶液(5.3)溶解殘留物，將溶液轉移至10mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液(5.3)定容至刻度，震蕩搖勻。取溶液過膜過濾器(6.6)后，所得濾液經高效液相色譜儀(6.1)測定。7.2空白實驗除不加試樣外，按7.1步驟進行。7.3高效液相色譜測定7.3.1高效液相色譜條件由于測試結果取決于所使用儀器，因此不可能給出高效液相色譜分析的通用參數。設定的參數應保證色譜測定時被測組分與其他組分能夠得到有效的分離，下列給出的參數證明是可行的。b)流動相：流動相A為乙腈，流動相B為0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=4.3)(5.7),梯度洗脫程序見表1;3表1流動相梯度洗脫程序時間/min027d)檢測波長：柚皮苷測定波長為282nm,苯甲酸地那銨測定波長為210nm(以苯甲酸地那銨分解生產的地那銨離子進行測定);按照5.11和5.12配制柚皮苷和苯甲酸地那銨標準工作溶液，按照(7.3.1)色譜條件進行測定，柚皮苷和苯甲酸地那銨標準溶液的色譜圖見附錄A中圖A.1,以色譜峰的峰面積為縱坐標，以其對應的濃度為橫坐標作圖，繪制標準工作曲線。取7.1所得樣品待測溶液，按照(7.3.1)色譜條件進行測定，記錄色譜峰的保留時間，通過對比試樣和標準工作溶液中目標化合物的保留時間進行定性分析。記錄色譜峰的峰面積響應值，在線性范圍內，用外標法定量。若柚皮苷和苯甲酸地那銨的含量超出標準曲線的范圍，用適量50%甲醇水溶液稀釋至標準曲線范圍內。8試驗數據處理指畫顏料中柚皮苷和苯甲酸地那銨的含量按式(1)進行計算： (1)式中：X;——試樣中柚皮苷和苯甲酸地那銨的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——試液中柚皮苷和苯甲酸地那銨的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L);V——試樣的定容體積，單位為毫升(mL);f——稀釋倍數；m——試樣的質量，單位為克(g)。按照上述公式計算樣品中柚皮苷和地那銨離子的含量，以地那銨離子的含量表示苯甲酸地那銨的4含量，結果保留至小數點后一位。9定量限、回收率和精密度9.1定量限本文件中柚皮苷和苯甲酸地那銨的方法定量限均為：4.0mg/kg。9.2回收率在試樣中定量加入適當的已知濃度的標準溶液，按第7章進行回收率分析，回收率應為85%～110%。9.3精密度實驗室間精密度試驗結果見附錄B。10測試報告測試報告應至少包括以下信息內容：a)樣品的來源及描述；b)本文件的編號(包括年號);c)測定結果，用mg/kg表示；d)與本文件的任何偏離；e)在測試中觀察到的異常現象；f)測試日期。5(資料性)柚皮苷和苯甲酸地那銨的色譜圖按7.3.1給出的測定條件得到的柚皮苷和苯甲酸地那銨的高效液相色譜分離圖見圖A.1。安圖A.1柚皮苷和苯甲酸地那銨的高效液相色譜分離圖6(資料性)選取有代表性的實際指畫顏料樣品，在8間實驗室中按照本文件進行測試，參照GB/T6379.1和GB/T6379.2計算精密度，結果見表B.1。表B.1精密度試驗結果樣品化合物Mmg/kgmg/kg%rmg/kgmg/kg%Rmg/kg黃色指畫顏料柚皮苷苯甲酸地那銨M——結論平均值；sr——重復性標準偏差；CV,——重復性變異系數；r——重復性限，r=