化學(xué)品急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗方法I前言 12規(guī)范性引用文件 l3術(shù)語和定義 4試驗方法 14.1實(shí)驗動物 l4.2受試物 24.3試驗步驟 25試驗結(jié)果 25.1臨床觀察和評分 25.2結(jié)果評價 35.3結(jié)果解釋 35.4試驗報告 3參考文獻(xiàn) 5Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T21604—2008《化學(xué)品急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗方法》,與GB/T21604—2008相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：a)更改了術(shù)語和定義內(nèi)容(見第3章，2008年版的第3章);b)刪除了飼養(yǎng)條件應(yīng)符合GB14924.4的要求(見2008年版的4.1.3);c)刪除了實(shí)驗動物的性別和數(shù)量(見2008年版的4.1.2);d)更改了試驗方法規(guī)定中的試驗步驟及試驗方法描述(見4.3,2008年版的4.3);e)更改了結(jié)果評價規(guī)定中的內(nèi)容(見5.2,2008年版的5.2);f)增加了試驗報告規(guī)定中的部分內(nèi)容(見5.4)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國危險化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC251)提出并歸口。本文件起草單位：天津海關(guān)工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心、天津工業(yè)大學(xué)、中檢科健(天津)檢驗檢測有限責(zé)任公司、廈門豐力揚(yáng)科技有限公司、廣東義勝檢測有限公司。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2008年首次發(fā)布為GB/T21604—2008;——本次為第一次修訂。1化學(xué)品急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗方法1范圍本文件規(guī)定了化學(xué)品對動物急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗的術(shù)語和定義、試驗方法和試驗結(jié)果。本文件適用于化學(xué)品急性皮膚刺激性/腐蝕性的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB14925實(shí)驗動物環(huán)境及設(shè)施3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。皮膚刺激性dermalirritation皮膚涂敷受試樣品4h后產(chǎn)生的可逆性損傷。皮膚腐蝕性dermalcorrosion皮膚涂敷受試樣品不超過4h后產(chǎn)生的不可逆性損傷。注：皮膚腐蝕典型特征為潰瘍、出血和帶血的結(jié)痂，觀察14d后，因皮膚變白而導(dǎo)致的皮膚變色、脫毛和瘢痕。4試驗方法4.1實(shí)驗動物首選健康成年的白色家兔。如選擇其他動物應(yīng)說明理由。4.1.2飼養(yǎng)及觀察條件飼養(yǎng)條件應(yīng)符合GB14925的要求。實(shí)驗動物應(yīng)單籠飼養(yǎng)。采用人工光源時，應(yīng)保持12h明暗交替。受試動物正常飲食，飲水不限。試驗前實(shí)驗動物應(yīng)有適宜檢疫期。試驗前24h,去除實(shí)驗動物背部脊柱兩側(cè)的被毛，范圍為左右2各約3cm×3cm,注意不得損傷皮膚。選擇健康無損的皮區(qū)進(jìn)行試驗，一側(cè)做受試物，另一側(cè)做陰性對照。4.2.2如果受試物為固體，應(yīng)將其粉碎，并用水或其他適宜的介質(zhì)溶解或者濕潤，以保證受試物與皮膚有良好的接觸。若使用水以外的其他介質(zhì)，應(yīng)考慮到該介質(zhì)對受試物皮膚刺激作用的影響。4.2.3暴露期結(jié)束后，應(yīng)用溫水或其他適宜的溶劑去除受試物，且不改變皮膚現(xiàn)有的反應(yīng)或表皮的完整性。4.2.4如果受試物為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，pH值小于或等于2,或者pH值大于或等于11.5,不必再進(jìn)行皮膚刺激試驗。若已知受試物具有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性，或在急性經(jīng)皮毒性試驗中，當(dāng)限量試驗劑量2000mg/kg體重時仍未出現(xiàn)皮膚刺激作用，或根據(jù)體外試驗的結(jié)果預(yù)知具有腐蝕作用，也無需再進(jìn)行皮膚刺激性試驗。4.3試驗步驟4.3.1.1取受試物0.5mL(或0.5g)直接涂布在2.5cm×2.5cm大小的皮膚上，仔細(xì)、緩慢涂布，不使藥液流失。涂畢用2～4層紗布和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶固定。4.3.1.2當(dāng)受試物可能具有腐蝕性時，用1只動物進(jìn)行試驗。最多使用3塊試驗貼連續(xù)作用于動物皮膚。貼敷第1塊試驗貼3min后取下，如未觀察到嚴(yán)重的皮膚反應(yīng)，換位置貼敷第2塊試驗帖，1h后取下，如仍未觀察到嚴(yán)重的皮膚反應(yīng)，貼敷時間延長至4h,然后取下試驗貼并對皮膚反應(yīng)進(jìn)行分類。其中任何一步觀察到腐蝕性反應(yīng)時，應(yīng)立即結(jié)束試驗。如果第3塊試驗帖取下后仍未觀察到腐蝕性，繼續(xù)觀察14d。如果懷疑受試物無腐蝕性而有刺激性時，可直接使用1塊試驗帖作用于1只動物皮膚4h。4.3.2.1如初始試驗未觀察到腐蝕性作用，需確認(rèn)陰性結(jié)果或刺激性結(jié)果，用追加2只動物來完成試驗。每只動物貼敷1塊染毒紗布4h。4.3.2.2如初始試驗觀察到刺激性作用，確認(rèn)試驗可采用順序方式或者同時暴露2只動物。如動物反應(yīng)不一致，應(yīng)再額外追加動物進(jìn)行試驗。4.3.2.3特殊情況下，如果沒有進(jìn)行初始試驗，可用2～3只動物，只涂敷一塊受試物敷貼并作用于皮膚5試驗結(jié)果5.1臨床觀察和評分5.1.1為確定皮膚反應(yīng)的可逆性，動物觀察期為去除受試物后14d。如果觀察期出現(xiàn)皮膚反應(yīng)可逆，或者動物出現(xiàn)劇烈疼痛、瀕死的表現(xiàn)，應(yīng)停止試驗。5.1.2初始試驗的動物應(yīng)在去除受試物后立即進(jìn)行觀察。確認(rèn)試驗于除去受試物后的1h、24h、48h、72h,分別觀察受試部位皮膚的反應(yīng)，按表1進(jìn)行皮膚反應(yīng)評分。如72h時未能確定皮膚損傷為皮膚刺激性或腐蝕性時，則觀察期應(yīng)延長至14d以確定該損傷是否可逆。除刺激作用外，對觀察到的任何皮膚損傷和其他毒性作用都應(yīng)詳盡描述和記錄，如有可疑反應(yīng)需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。3表1皮膚刺激反應(yīng)評分皮膚反應(yīng)評分紅斑與焦痂形成無紅斑很輕微的紅斑(勉強(qiáng)可見)紅斑清晰可見易于確定中度至重度紅斑嚴(yán)重紅斑(紫紅色)到焦痂形成01234水腫形成無水腫很輕微的水腫(勉強(qiáng)可見)輕度水腫(皮膚隆起輪廓清楚)中度水腫(皮膚隆起約1mm)嚴(yán)重水腫(隆起超過1mm,范圍超出染毒區(qū))012345.2結(jié)果評價5.2.1在各個觀察時間點(diǎn)，將所有動物皮膚反應(yīng)評分相加，除以動物數(shù)，獲得不同時間點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)評分均值。5.2.2取各觀察時間點(diǎn)的最高皮膚刺激反應(yīng)評分均值，按表2判定受試物對皮膚刺激強(qiáng)度。表2皮膚刺激強(qiáng)度分級皮膚刺激強(qiáng)度最高總分均值無刺激性輕刺激性中等刺激性強(qiáng)刺激性0～<0.50.5～<2.02.0～<6.06.0～<8.0將動物皮膚刺激、腐蝕性試驗的結(jié)果外推到人，結(jié)果的可靠性有限。受試動物的種、系，受試前皮膚的性狀，試驗的條件，試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境等因素，都可影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度。封閉式染毒是一種超常的實(shí)驗室條件下的試驗方法，而實(shí)際人群接觸化學(xué)物的方式絕大多數(shù)不是封閉狀態(tài)的。試驗動物的數(shù)量有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其他種、系動物進(jìn)行試驗也得到類似結(jié)果，則會增加從動物外推到人的可靠性。5.4試驗報告試驗報告應(yīng)包括但不限于以下內(nèi)容：4期等)、存儲條件。如是混合物，成分種類和相對百分比。受試物的前處理方式。——實(shí)驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、動物房的溫度、相對濕度、單籠飼養(yǎng)、實(shí)驗動物使用許可證號。——試驗條件，包括試驗部位皮膚的準(zhǔn)備、受試物的制備、染毒方法和使用的材料、受試物的清