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文檔簡介

植物組織培養技術植物組織培養的理論依據:植物細胞全能性。植物細胞全能性(totipotency):指植物的每個細胞都包含著該物種的全部遺傳信息,從而具備發育成完整植株的遺傳能力。在適宜條件下,任何一個細胞都可以發育成一個新個體。2一植物組織培養一些的概念外植體(explant):在植物組織培養過程中,從植物體上被分離下來的,接種在培養基上,供培養用的原生質體、細胞、組織、器官等成為外植體。愈傷組織(callus):植物受傷后的傷口處或在植物組織培養中外植體切口處不斷增殖產生的一團不定形的薄壁組織。愈傷組織可使傷口愈合,使表面細胞呈木栓化而起到保護作用;植物扦插時,愈傷組織可形成不定根;植物嫁接時,愈傷組織可使接穗和砧木愈合;在植物組織培養中,愈傷組織常可形成不定芽。3脫分化(dedifferentiation):指已分化的組織又恢復到無分化的狀態。在組織培養過程中,將已經分化的莖、葉、花等外植體進行培養,令其形成愈傷組織,回到沒有分化的狀態,稱為脫分化。再分化(redifferentiation):指在植物組織培養中,對處于脫分化狀態的愈傷組織進行培養,誘導其形成新的植物體的過程。4植株再生(plantregeneration):指通過組織培養技術將植物的細胞、組織、器官培養成完整植株的過程。試管苗(test-tubeplantlet):指在無菌條件下的人工培養基上,對植物細胞、組織或器官進行培養所獲得的再生植株。5初代培養(primaryculture):指在組織培養過程中,最初建立的外植體無菌培養階段。由于首批外植體來源復雜,攜帶較多細菌,要對培養條件進行適應,因此,初代培養一般比較困難。繼代培養(subculture):在組織培養過程中,當外植體被接種一段時間后,將已經形成愈傷組織或已經分化根、莖、葉、花等的培養物重新切割,轉接到其它培養基上以進一步擴大培養的過程稱為繼代培養。6

運用組織培養方法可以在比較簡單易觀察的條件下研究細胞、組織或器官的繁殖、生長和分化,以及各種外界因素對它們的影響,從而為解決農業生產和藥物生產中的某些問題開辟了廣闊的前景。目前已有若干重要成果應用于生產實踐中,一為營養繁殖系的快速繁殖,如以甘蔗為例;原來每畝要用蔗種0.5~1噸,用組織培養快速繁殖的幼苗進行栽培可節省大量蔗種。又如貝母繁殖率非常低,而用組織培養分化出的三個月左右的鱗莖,其大小就相當于用種子繁殖二年生的鱗莖。7

另一為藥物和生物制品的工業生產,探索天然藥物生產工業化的途徑是當前藥物生產的一個新方向,有可能用組織培養法來代替全植物提取有效成分。組織培養應用在藥學方面的工作雖然歷史不長,但發展很迅速,它具有如下一些優點:

1.利用組織培養代替原植物的栽培以獲得所需的有效成分,達到產量高,成本低的目的,還可節約土地。

2.除了應用于產生次生物質外,還可應用于生物轉化。例如煙草組織培養中蒂巴因去甲基后可能生成嗎啡。

8大家應該也有點累了,稍作休息大家有疑問的,可以詢問和交流9

目前中國已成功地將麥角菌、靈芝、猴頭菇等真菌進行工業化生產,高等植物組織培養在工業化中的應用也正在研究。總之,植物組織培養這一新技術在中草藥方面應用的前途是無限廣闊的,它不僅有利于探討和闡明藥用植物生理、遺傳和成分生物合成等一系列理論問題,而且一旦工業化生產問題得到解決,將可以為防病治病做出很大的貢獻。

10一、培養基的組成和配制法

1培養基的成分(1)無機營養物(2)有機物質(3)植物生長刺激物質(4)其它附加物(5)其它對生長有益的未知復合成分:如椰子汁、酵母提取液、麥芽浸出液等。培養基中如加入0.5~1%的瓊脂即為靜止培養的固體培養基,否則為懸浮培養的液體培養基。不同植物材料常需要改變配方,如維持生長和誘導細胞分裂和分化的培養基配方就不同,因此配方的種類很多,目前以Ms(MurashigeandSkoog)培養基配方為最常用的一種基本培養基,它利于一般植物組織和細胞的快速生長。112培養基的種類MS培養基、B5培養基、White培養基、N6培養基等等。3培養基的配制(1)混和培養基中的各成分(2)融化瓊脂(3)調整pH為5.8(4)分裝(5)滅菌(6)放置備用12二組織培養操作的一般流程1器皿的洗滌2培養基的配制和滅菌3接種室及用具消毒4材料滅菌:70%酒精、氯化汞5接種6無菌培養13三、選材和滅菌方法

從低等的藻類到苔蘚、蕨類、種子植物等高等植物的各類、各部分都可采用作為組織培養的材料,一般裸子植物多采用幼苗、芽、韌皮部細胞,被子植物采用胚、胚乳、子葉、幼苗、莖尖、根、莖、葉、花藥、花粉、子房和胚珠等各個部分。由于植物在自然條件下,表面常被霉菌和細菌污染,故材料必須進行滅菌處理。一般用漂白粉溶液(1~10%)、次氯酸鈉溶液(0.5~10%)、升汞溶液(0.01%)、乙醇(70%)或過氧化氫(3~10%)等處理后,再用無菌水反復沖洗至凈,然后在無菌室內,將所取的組織迅速培養在固體培養基上。在適宜的條件下,受傷組織切口表面不久即能長出一種脫分化的組織堆塊,稱為愈傷組織(Callus)。14四、培養條件(一)溫度:對大多數植物組織20~28℃即可滿足生長所需,其中26~27℃最適合。(二)光:組織培養通常在散射光線下進行。光的影響可導致不同的結果。有些植物組織在暗處生長較好,而另一些植物組織在光亮處生長較好,但由愈傷組織分化成器官時,則每日必須要有一定時間的光照才能形成芽和根。有些次生物質的形成,光是決定三因素。15(三)滲透壓:滲透壓對植物組織的生長和分化很有關系。在培養基中添加食鹽、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物質可以調整滲透壓。通常1~2個大氣壓可促進植物組織生長,2個大氣壓以上時,出現生長障礙,6個大氣壓時植物組織即無法生存。(四)酸堿度:一般植物組

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