靈芝孢子粉采收及加工技術規范2023-08-06發布國家市場監督管理總局國家標準化管理委員會GB/T29344—2023前言 I 2規范性引用文件 3術語和定義 4靈芝孢子粉的采收 4.1基本要求 4.2采收條件 4.3采收方法 25靈芝孢子粉的加工 25.1加工人員管理 25.2加工車間環境 35.3孢子粉的加工步驟 36貯存 7質量管理 4附錄A(規范性)靈芝孢子多糖的測定方法 附錄B(規范性)破壁靈芝孢子粉破壁率的測定方法 附錄C(規范性)含油率的測定方法 參考文獻 I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件規定了食品質量相關技術要求，食品安全相關要求見有關法律法規、政策和食品安全標準等文件。本文件代替GB/T29344—2012《靈芝孢子粉采收及加工技術規范》,與GB/T29344—2012相比，除結構調整和編輯性改動外，主要技術變化如下：——增加了“靈芝孢子多糖的含量規定”(見4.1.5);——更改了“套筒采粉”(見4.3.1,2012年版的4.3.1);——更改了“風機吸附采粉”(見4.3.2,2012年版的4.3.2);——更改了“地膜覆蓋采粉”(見4.3.3,2012年版的4.3.3);——更改了“車間潔凈度要求”(見5.2.4,2012年版的6.4);——更改了“過篩、除雜”(見5.3.2,2012年版的7.1);——更改了“滅菌”方法(見5.3.3,2012年版的7.2);——更改了“破壁”加工方法(見5.3.5,2012年版的7.4);——增加了“質量管理”(見第7章);——更改了破壁率測定方法的樣品制備(見B.4、B.5.1,2012年版的A.4、A.5.1)。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國食品工業標準化技術委員會(SAC/TC64)提出并歸口。本文件起草單位：福建仙芝樓生物科技有限公司、仙芝科技(福建)股份有限公司、中國標準化研究院、廣州白云山漢方現代藥業有限公司、中國醫學科學院藥用植物研究所、福建省標準化研究院、中國醫學科學院藥物研究所、福建省食用菌行業協會、深圳市標準技術研究院、桂林大野領御生物科技有限公司。本文件于2012年首次發布，本次為第一次修訂。1靈芝孢子粉采收及加工技術規范1范圍本文件規定了靈芝孢子粉的采收和加工技術要求。本文件適用于赤芝[Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst]和松杉靈芝(Ganodermatsugae2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法GB50073—2013潔凈廠房設計規范定量包裝商品計量監督管理辦法(國家質量監督檢驗檢疫總局〔2005〕75號令)3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。靈芝孢子ganodermaspore由靈芝子實體發育產生并可在成熟時釋放的擔孢子。破壁靈芝孢子sporoderm-brokenganodermaspore經加工，孢子壁被破碎的靈芝孢子。破壁率sporoderm-brokenrate破壁的孢子在總孢子中所占的百分比。4靈芝孢子粉的采收4.1基本要求4.1.2采收人員進入大棚、出芝房應頭戴工作帽，身穿工作服。4.1.3采收用紙張、薄膜、無紡布等材料及盛裝容器應符合相應的食品容器、包裝材料的國家標準，不應對孢子粉的質量產生影響。4.1.4采收用毛刷、剪刀等工具應干凈并專用。4.1.5不應過度采收靈芝孢子粉，以免影響孢子粉的質量，靈芝孢子粉中的多糖(以無水葡萄糖計)應不低于0.9%,靈芝孢子多糖按附錄A規定的方法測定。24.2采收條件4.2.1當靈芝菌蓋邊緣白色生長圈消失時，最后噴一次水將菌蓋清理干凈，生長1d～2d,待有少量孢4.2.2環境溫度以25℃~29℃為宜。4.3采收方法取白紙皮或無紡布，根據靈芝子實體菌蓋大小和靈芝柄長度來制作套筒的大小，把白紙皮或無紡布裁成長35cm～60cm、高20cm～26cm的矩形，然后卷成圓筒，直徑比靈芝子實體大5cm左右。待靈芝菌蓋邊緣黃白色生長圈消失，即將彈射孢子時，在地面鋪設塑料墊底薄膜，以隔離泥土。再鋪上方形的接粉薄膜或無紡布，其邊長應比套筒直徑長3cm以上。鋪好接粉薄膜或無紡布后，將準備好的紙筒或無紡布筒逐個套住靈芝子實體。筒壁距菌蓋邊緣應至少2.5cm。筒口用紙封蓋或無紡布板蓋上，蓋板與靈芝菌蓋應有不少于5cm的空隙距離。收粉時將蓋板和套筒取下后，將收集在套筒內側的孢子粉刷入容器中。然后把靈芝子實體從基部剪切下來，將子實體上面的靈芝孢子粉掃入容器內。最后提起接粉薄膜或無紡布，將孢子粉倒入容器內。4.3.2風機吸附采粉當靈芝生長至有靈芝孢子粉彈射時，將靈芝栽培房或大棚適當密封，大棚栽培的地面鋪上塑料薄膜，以隔離泥沙。當靈芝孢子開始釋放時，將孢子收集器放置在出芝棚中間，應距地面1m～1.5m高，開動風機，形成負壓流，收集靈芝孢子粉，應每日將收集的靈芝孢子粉取出。4.3.3地膜覆蓋采粉當靈芝菌蓋邊緣白色生長圈消失，菌蓋表面有少量孢子彈射時，在平整過的地面上鋪設塑料墊底薄膜，隔離泥土，然后再鋪接粉薄膜或無紡布，最后利用能通風透氣的食品級的茶濾紙或無紡布搭建成小拱棚，棚高50cm以上，不高于80cm。采收孢子粉時先用專用的軟毛刷把靈芝菌蓋表面孢子粉刷入專用的容器內，再將靈芝子實體剪下，采收地膜上的孢子粉時只采收上層膜粉，避免采收黏附在地膜上的下層孢子粉。5靈芝孢子粉的加工5.1加工人員管理5.1.1加工人員應每年進行健康體檢，并符合相關法律、法規的規定。5.1.2進入車間的人員應按規定程序進行更衣。35.2加工車間環境5.2.2滅菌后的出料應置于凈化車間內。5.2.4需凈化的車間，潔凈度應至少達到GB50073—2013中3.0.1中的第8級。5.3孢子粉的加工步驟采收后的孢子粉應及時進行干燥，應在防風避雨的棚內曬干或用烘箱烘干，干燥至水分不大于先用孔徑180μm篩網除去較大雜質，再用孔徑50μm篩網篩去細小雜質，灰分不應大于3.0%。可采用高壓蒸汽、輻照等滅菌方式，采用輻照滅菌的，輻照劑量應符合食品安全標準規定，滅菌后的微生物指標應符合相應的規定。將高壓蒸汽滅菌后需要烘干的孢子粉用烘干設備進行烘干，烘干至水分不大于9.0g/100g。應采用低溫物理方法破壁，如用機械碾壓、氣流粉碎等方式對滅菌后的靈芝孢子粉進行破壁，不應采用金屬撞擊的方法破壁，破壁率應不低于95.0%,破壁孢子粉的含油率應不低于25.0%,破壁率按附錄B規定的方法測定，含油率按附錄C規定的方法測定。當破壁后的孢子粉結成片狀或粒狀時，應進行粉碎處理，并過孔徑180μm篩網。封裝應平整嚴密，破壁靈芝孢子粉應避光，包裝材料應符合相應的國家標準要求，凈含量應符合《定量包裝商品計量監督管理辦法》的規定。6貯存產品應存放于通風、干燥、陰涼的倉庫內，不應與有害、有異味、有腐蝕性的物品混貯，堆放應隔墻離地。47質量管理5(規范性)靈芝孢子多糖的測定方法A.1試劑和材料A.1.1硫酸(分析純)。A.1.3無水葡萄糖對照品。A.1.4硫酸蒽酮溶液：精密稱取蒽酮0.1g,加硫酸溶液100mL使溶解，搖勻，置于棕色瓶中。A.1.5實驗用水應符合GB/T6682規定的三級水規格。A.2儀器和設備A.2.2分光光度計(士2nm)。A.2.5容量瓶25mL,容量瓶50mL。A.2.7具塞試管10mL。A.3標準曲線的制備A.3.1對照品溶液的制備取無水葡萄糖對照品12mg,準確稱取，加水制成每1mL含0.12mg的溶液。A.3.2標準曲線繪制吸取對照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL,分別置于10mL的具塞試管中，各加水補充至2.0mL,緩慢勻速加入硫酸蒽酮溶液6mL,立即搖勻，靜置15min后置于冰水浴中冷卻15min,取出，以相應的試劑為空白，在625nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，質量濃度為橫坐標繪制標準曲線。A.4供試品溶液的制備取本品約1g(精確至0.001g),置圓底燒瓶中，加水60mL,靜置1h,加熱回流4h,趁熱過濾，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾紙和濾渣置圓底燒瓶中，加水60mL,加熱回流3h,趁熱過濾，合并濾液，置水浴鍋上蒸干，殘渣用水5mL溶解，邊攪拌邊緩慢加入無水乙醇75mL,搖勻，在4℃放置12h,離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉移至50mL容量瓶，放冷，加水至刻度，搖勻后取適量溶液于具塞離心管中，離心，精密量取上清液3mL,置25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。吸取供試品溶液2.0mL,置10mL具塞試管中，按照A.3.2標準曲線繪制的方法，自“緩慢勻速加6GB/T29344—2023入硫酸蒽酮溶液6mL”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的質量A.6結果計算按式(A.1)計算。式中：…………(A.1)wA——多糖的含量，%,pA——從標準曲線上查得的多糖的質量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);ma——樣品質量，單位為毫克(mg); 50——水提醇沉后獲得的沉淀物經熱水溶解定容的體積，單位為毫升(mL)。A.7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。7(規范性)破壁靈芝孢子粉破壁率的測定方法B.1方法提要利用血球計數板對未破壁的孢子進行計數，分別計算出單位質量孢子粉中靈芝孢子的數量和單位質量破壁孢子粉中未破壁靈芝孢子的數量，從而獲得破壁孢子粉的破壁率。B.2儀器與設備B.2.1血球計數板：25中格×16個小格或16個中格×25個小格。B.2.4光學顯微鏡：放大倍數≥200。B.3試劑和溶液B.3.2吐溫80(分析純)。B.3.3蔗糖(分析純)。B.4樣品制備分別取有代表性的靈芝孢子粉和破壁靈芝孢子粉的樣品各至少50g,分別充分混勻，置于密閉的容器內。B.5.1取適量的靈芝孢子粉A和破壁靈芝孢子粉B,于烘箱60℃下烘干5h。B.5.2準確稱取經烘干的靈芝孢子粉A和破壁靈芝孢子粉B,其中m?=0.1000g,mg=0.1500g。B.5.3分別稱取5.0g經過研磨后過孔徑為0.15mm(100目)篩的蔗糖粉末，分別與靈芝孢子粉A、破壁靈芝孢子粉B充分混合至色澤均一。用蒸餾水分別溶解上述樣品，在樣品溶液中加0.1mL吐溫80,用蒸餾水定容到100mL的容量瓶中，并在室溫超聲振蕩30min,使孢子充分分散。B.5.4將待測孢子懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使液體緩緩滲入，多余的液體用吸水紙吸取，進樣完成后靜置約30s,然后將血球計數板置于200倍及以上放大倍數的光學顯微鏡下進行觀察計數。B.5.5使用25中格×16個小格的計數板時，應計算出血球計數板4個角上與中央共5個中格中含完整靈芝孢子的數目(即以80個小格為一個計數單位);當使用16個中格×25個小格的計數板時，應計算出血球計數板4個角上的4個中格中含完整靈芝孢子的數目(即以100個小格為一個計數單位)。如有部分孢子處于中格邊線上，計數時應僅統計位于中格四個邊線的其中兩個邊線的孢子數，每個樣品觀察計數時應去掉離群較大的值，每個樣品有效觀察計數不少于3次，然后計算它們的平均數n。8GB/T29344—2023………………(B.1式中：N——每克孢子粉中含完整靈芝孢子數，單位為個每克(個/g);nm——80個小方格內含完整靈芝孢子的總數，單位為個；100——孢子稀釋液的體積數值；m——樣品的質量，單位為克(g);400——指血球計數板的計數室內共有400個小方格；10000——血球計數板計數室的容積為0.1mm3,1mL相當于10000個血球計數板計數室的容積。B.6.2使用16個中格×25個小格的計數板時，每克孢子粉中含完整靈芝孢子數按式(B.2)計算。……………(B.2)式中：N——每克孢子粉中含完整靈芝孢子數，單位為個每克(個/g);ne——100個小方格內含完整靈芝孢子的總數，單位為個；100——孢子稀釋液的體積數值；m——樣品的質量，單位為克(g);400——指血球計數板的計數室內共有400個小方格；10000——血球計數板計數室的容積為0.1mm3,1mL相當于10000個血球計數板計數室的容積。B.6.3破壁率的計算按式(B.3)計算破壁率。………