實驗室菌株管理制度.目的建立實驗室菌株管理制度。.范圍適用于實驗室菌株的管理。.職責實驗員和實驗室管理員負責對本制度實施。QA負責監測本規程的執行。.規程菌種管理菌種復活4.1.3.1.凍干菌種若購入的標準菌株是玻璃安瓿瓶裝的凍干粉劑則需對凍干菌種進行復活。首先清潔安瓿，安瓿的表面用75%的酒精擦拭并讓其自然干燥；然后用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線，用手輕輕將安瓿掰開（開啟時必須小心，因為安甑遇熱時可能會破裂）；再用一無菌吸管移取1-2ml適宜的胰酪大豆胨液體培養基到安瓿中；輕輕地旋轉安瓿使凍干菌種和胰酪大豆胨液體培養基充分混合并完全溶解；最后將安瓿內菌液轉接到相應的液體培養基或固體培養基中在適宜的條件下培養，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌于30-35℃培養18-24小時，白色念珠菌于20-25℃培養24-48小時，黑曲霉于20-25℃培養5-7天。斜面菌種若購入的標準菌株是試管裝瓊脂斜面則不需要進行菌種復活。菌種確認取上述凍干菌種（細菌）的液體培養基中的培養物或斜面菌種（細菌）的斜面培養物劃線接種到胰酪大豆胨瓊脂平皿上，30-35℃培養48小時，培養結束后觀察菌落形態，然后挑取單一的純菌落，進行革蘭氏染色和鏡檢，觀察其染色特性及菌形。取上述凍干菌種（真菌）的液體培養基中的培養物或斜面菌種（真菌）的斜面培養物劃線接種到沙氏葡萄糖瓊脂平皿上，20-25℃培養5-7天，觀察菌落形態，然后挑取單一的純菌落，進行染色和鏡檢，觀察其染色特性及菌形。菌落形態A.大腸埃希菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，乳白色，光滑，薄，蔓延，半透明。B.金黃色葡萄球菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，白色至淺黃色，光滑，濕潤，全緣。C.銅綠假單胞菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，白色，伸展形，邊緣透明，不規則，培養基變為淺綠色至暗黑色。D.沙門菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，淺灰色，濕潤，光滑，半透明。E.枯草芽孢桿菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，奶油色至微褐色，粗糙，不透明，不閃光，蠟質，蔓延。F.生孢梭菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，中部突起，白色至淡黃色，邊緣模糊不規則，表面無光澤。G.白色念珠菌：沙氏葡萄糖瓊脂平皿或斜面上，乳白色，濕潤，光滑，易挑取，正、反面及邊緣、中心顏色一致，質地均勻。H.黑曲霉：沙氏葡萄糖瓊脂平皿或斜面上，起初白色，常常出現鮮黃色區域，后黑色，反面無色或中央部分略帶黃褐色。鏡檢A.大腸埃希菌：革蘭氏陰性桿菌或短桿菌，無芽孢。B.金黃色葡萄球菌：革蘭氏陽性球菌，排列不規則，堆聚似葡萄串狀。C.銅綠假單胞菌：革蘭氏陰性桿菌，長短不一，無芽孢。D.沙門菌：革蘭氏陰性桿菌，無芽孢。E.枯草芽孢桿菌：陽性桿菌，部分內含芽孢，橢圓形，中生或次端生。F.生孢梭菌：革蘭氏染色陽性，芽孢卵圓形、次端生。G.白色念珠菌：卵圓形，出芽繁殖，革蘭氏陽性。H.黑曲霉：菌絲為有隔的多細胞，分生孢子梗頂端膨大成頂囊，頂囊的表面以輻射狀長出二層小梗，小梗頂端產生一串圓形的分生孢子。菌種傳代與保藏4.1.5.1.將微生物接種至一新的培養基上/內，每萌發一次即稱為一代，菌種的傳代次數（自原始凍干菌種起）不得超過5代。本實驗室菌種保藏采用斜面低溫保藏法。將菌種在適宜的固體斜面培養基上，待菌生長充分以后，轉移到2-8℃冰箱中保藏。視菌種的生長情況，正常情況下芽孢桿菌（枯草芽孢桿菌）每3個月傳代接種一次，其他細菌（大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、生孢梭菌）每月傳代接種一次，酵母菌（白色念珠菌）每4個月傳代接種一次，絲狀真菌（黑曲霉）每4個月傳代接種一次。每次傳代接種2支或2支以上試管，一支作為下一次傳代使用，其他的作為日常檢驗中使用。菌種傳代操作步驟細菌和酵母菌：右手執接種工具，左手執試管，燒針滅菌，拔塞燒口，挑菌移植，燒口塞管，燒針滅菌，培養。霉菌：將2-3ml0.9%無菌氯化鈉溶液加入到原菌種管內，反復震搖，將孢子洗脫，取適量孢子懸液接種于瓊脂斜面上，燒口塞管，培養。培養基及培養條件大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌使用胰酪大豆胨瓊脂培養基，培養條件為30-35℃培養24小時（枯草芽孢桿菌培養48小時），白色念珠菌和黑曲霉使用沙氏葡萄糖瓊脂培養基，20-25℃培養5-7天。質量控制菌種儲存菌種需單獨放置于2-8℃冰箱內保藏，有專人負責保管并建立實驗室現有菌種清單（見附件四：實驗室現有菌種清單）。菌種的使用菌種必須在有效期內才能使用，每次使用應做好相應的記錄工作（具體見附錄五：菌種使用記錄）菌懸液的制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌和枯草芽孢桿菌接種于胰酪大豆胨液體培養基中，生孢梭菌接種于硫乙醇酸鹽流體培養基，30-35℃培養18-24小時；白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖液體培養基中，20-25℃培養24-48小時；黑曲霉接種于沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基中，20-25℃培養5-7天。用0.9%無菌氯化鈉溶液（稀釋黑曲霉孢子時加入0.05%聚山梨醇酯-80）制成實驗中規定濃度的菌懸液或孢子懸液。稀釋后菌懸液于2-8℃條件下保存，制備后的24小時內使用。菌種的銷毀使用后的菌種，必須經過121℃、30分鐘高溫高壓濕熱滅菌處理，方可遺棄，同時做好銷毀記錄。其他相關事項菌種是特殊的標準品，在一定條件下，許多都是病原菌，如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、白色念珠菌等。所以必須實行嚴密安全的保藏管理，用于菌種保藏的冰箱需上鎖；有關菌種的所有操作都應在生物安全柜中進行，僅有微生物實驗員才能使用菌種；操作人員必須穿工作服，配戴手套，口罩等防護用品；在操作過程中，要求無菌操作，防止交叉污染或將污染傳播到別的地方。.記錄實驗室管理規程HYT/SMP-QA-ZB-004偏差調查與處理管理規程HYT/SMP-QA-ZB-008檢驗異常管理規程HYT/SMP-QA-ZB-0107.參考文獻無菌醫療器具生產管理規范YY0033-2000中國藥典2022版8.修訂歷史附件1：菌種采購清單附件2：HYT/SMP-QA-ZB-028菌種名稱標準號接種日期傳代數有效期傳代人附件3：HYT/SMP-QA-ZB-028菌種名稱菌號來源代菌種傳代接種情況：菌種確認菌落形態：鏡檢：API鑒定：確認結果口符合規定口不符合規定操作人:復核人：保藏條件有效期附件4：HYT/SMP-QA-ZB-028菌種名稱狀態菌號大腸埃希菌Echerichiacoli金黃色葡萄球菌Staphylococcuaureu銅綠假單胞菌Peudomonaaeruginoa沙門菌Salmonellaapecie枯草芽孢桿菌Bacilluubtili生孢梭菌Clotridiumporogene白色念珠菌Candidaalbican黑曲霉Apergilluniger“O”表示無