實驗二微生物培養基的配制和滅菌實驗二微生物培養基的配制和滅菌1一、實驗目的了解培養基的配制原理和方法，掌握其配制過程。掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。（一）培養基的配制一、實驗目的了解培養基的配制原理和方法，掌握其配制過2二.實驗原理1.培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。不同微生物對營養物質的要求各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養角度分析，培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。二.實驗原理1.培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混3培養基按成分可分為天然培養基、合成培養基和半合成培養基；按物理狀態可分為固體培養基、半固體培養基（0.2%～0.5%的瓊脂）和液體培養基；按用途可分為基礎培養基、營養培養基、鑒別培養基和選擇培養基等。培養基按成分可分為天然培養基、合成培養基和半合成培養基；按物4培養基是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產生代謝產物用的混合營養料。培養基簡介碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水營養物質的濃度要適宜營養物質之間的配比要適宜培養基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學條件要適宜。培養基培養基簡介碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水營養物5細菌：pH7.0~8.0放線菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻類：pH6.0~7.0原生動物：pH6.0~8.0初始pH通常培養條件：細菌：pH7.0~8.0初始pH通常培養條件：6培養基的種類按照培養基的物理狀態可分為1.液體培養基：不加凝固劑的液體狀態培養基。2.固體培養基：在液體培養基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態的培養基。3.半固體培養基：在液體培養基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養基。培養基的種類按照培養基的物理狀態可分為7

瓊脂是最優良的凝固劑，自1880年開始用于配制微生物培養基以來，至今經久不衰。瓊脂是最優良的凝固劑，自1880年開始用于配制微生物8實驗室的常用培養基：細菌：牛肉膏蛋白胨培養基；放線菌：高氏1號合成培養基培養；酵母菌：麥芽汁培養基；霉菌：查氏合成培養基；實驗室的常用培養基：9稱量--配置--調節pH值--過濾--分裝--滅菌

1.稱量

按照培養基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不是粉狀（如肉膏），應用燒杯稱量。

培養基配制的基本步驟稱量--配置--調節pH值--過濾--分裝--滅菌

培養基配102.配調

向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。如是配制固體培養基，在瓊脂的熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養基溢出或燒焦。待完全熔化后，補足所失水分。如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補足所失水分。2.配調

向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加113.調節pH值

培養基溶解均勻并冷卻至室溫時用pH試紙測pH，然后根據要求加酸或堿（一般用1molHcl和1molNaOH），要緩慢少量且多加攪拌。培養基配方為自然pH時，不用調節。

4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。

3.調節pH值

培養基溶解均勻并冷卻至室溫時用pH125.分裝

將制好的培養基分裝入試管內或三角瓶內，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養基要趁熱裝。分裝時要避免培養基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：

（1）斜面：裝量為管長的1/4-1/5。

（2）液體培養基、高層培養基、半固體培養基：裝載量不超過管長的1/3。

（3）三角瓶：裝量不超過容積1/2。5.分裝

將制好的培養基分裝入試管內或三角瓶內，管（136.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。

高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內進行，加熱使器內的水產生蒸汽，由于密閉，增加了器內的壓力，使水的沸點升高，從而獲得高于100度的蒸汽溫度。6.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。

高壓蒸汽滅菌14牛肉膏蛋白胨固體培養基配方：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化鈉0.5g瓊脂2g水100mLpH7.2~7.4滅菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固體培養基配方：

瓊脂0.3g牛肉膏蛋白胨液體培養基配方：

瓊脂0g牛肉膏蛋白胨固體培養基配方：牛肉膏蛋白胨半固體培養基配方：牛15牛肉膏蛋白胨培養基的配制1、固體培養基（平板制作）2、固體培養基（斜面制作）2、半固體培養基3、液體培養基三.操作步驟及本次實驗具體安排牛肉膏蛋白胨培養基的配制1、固體培養基（平板制作）三.操作步16（一）平板固體培養基制作1.按配方稱取各組分(按100ml計算)到的三角瓶中.2.加入100mL水.3.在酒精燈上完全融化，取部分制作斜面培養基3.其余部分塞上硅膠塞,用牛皮紙包扎好;4.高壓蒸汽滅菌5.滅菌后,當培養基冷卻至50℃左右時,傾注平皿(每100ml可制備5-6個平皿)6.凝固后放冰箱備用

（一）平板固體培養基制作17（二）斜面培養基制作

1.在空試管內倒入2～3mL上述已經溶解好的培養基，【注意盡量不要讓培養基沾到試管口】塞好硅膠塞.2.放入燒杯中,高壓蒸汽滅菌.3.擺斜面,凝固后放冰箱備用.（二）斜面培養基制作

1.在空試管內倒入2～3mL上述已經18用于活化菌種，或培養菌種的斜面用于保存菌種的斜面用于活化菌種，用于保存菌種的斜面19擱置斜面當培養基冷卻至50℃左右時，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要合適，使培養基形成的斜面的長度不超過試管總長的一半。擱置斜面20（三）液體培養基制作

1.按牛肉膏蛋白胨液體培養基配方稱取相應成分到250ml的三角瓶中.2.加入100mL水.3.充分溶解.（取出50ml用于半固體培養基制作）4.在空試管內倒入2～3mL已經溶解好的培養基，【注意盡量不要讓培養基沾到試管口】塞好硅膠塞.5.放入燒杯中,高壓蒸汽滅菌.6.冷卻后放冰箱備用.（三）液體培養基制作

1.按牛肉膏蛋白胨液體培養基配方稱取相21牛肉膏蛋白胨

液體體培養基按下列配方及方法配制牛肉膏:0.3g蛋白胨:1gNaCl:0.5g水:100mlpH:

7.0-7.2放入水浴鍋內溶解后,分裝到試管中,滅菌備用.牛肉膏蛋白胨

液體體培養基按下列配方及方法配制牛肉膏:022（三）半固體培養基制作

1.在25ml液體培養基中加入0.3%的瓊脂粉3.完全溶解.4.在空試管內倒入2～3mL已經溶解好的培養基，【注意盡量不要讓培養基沾到試管口】塞好硅膠塞.5.放入燒杯中,高壓蒸汽滅菌.6.凝固后放冰箱備用.（三）半固體培養基制作

1.在25ml液體培養基中加入0.23牛肉膏蛋白胨

半固體培養基按下列配方及方法配制牛肉膏:0.3g蛋白胨:1gNaCl:0.5g瓊脂:0.3g水:100mlpH:

7.0-7.2放入水浴鍋內溶解后,分裝到試管中,滅菌備用.牛肉膏蛋白胨

半固體培養基按下列配方及方法配制牛肉膏:024注：試管加棉塞(最好)培養基分裝完畢以后，在管口上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時，應使棉塞長度的2/3在試管口內，如下圖所示。注：試管加棉塞(最好)培養基分裝完畢以后，在管口上加一個25配制好后，寫好培養基名稱、班級、組別，再滅菌每組留部分同學等滅菌結束之后，倒固體平板和擺斜面配制好后，寫好培養基名稱、班級、組別，再滅菌26任何一種培養基一經制成就應及時徹底滅菌，以備純培養用。一般培養基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學藥品滅菌等方法。本實驗培養基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的。（二）培養基的滅菌任何一種培養基一經制成就應及時徹底滅菌，以備純培養用。一般培27高壓蒸氣滅菌一般培養基:1.05Kg/cm2,121.3℃,15-30min含糖培養基:0.56Kg/cm2,112.6℃,15-30min

培養基的滅菌高壓蒸氣滅菌培養基的滅菌28器皿的滅菌：

干熱空氣：160℃，2小時無菌室的消毒：

紫外光化學藥物熏蒸（苯酚；高錳酸鉀+甲醛）器皿的滅菌：29滅菌鍋濕熱滅菌使用的設備滅菌鍋濕熱滅菌使用的設備30操作過程

加水