乳酸含量檢測方法（高效液相色譜法）儀器設備高效液相色譜儀（配紫外檢測器）色譜柱（C18）柱溫箱超聲波清洗器分析天平：感量0.0001gPH計微孔濾膜：0.45μm微孔濾膜：0.45μm(有機系）一次性無菌注射器（帶針）：1mL微量進樣器：100μL離心管：2mL離心管架燒杯：100mL玻璃棒萬用電爐容量瓶（50mL、100mL）刻度吸管（5mL、10mL、15mL、20mL）注射器（20mL）帶有進樣閥清洗頭試劑2.1磷酸：色譜純2.2乙腈：色譜純2.30.1%磷酸：精確吸取1mL磷酸，用高純水定容至1000mL2.4流動相：0.1%磷酸溶液：乙腈=2.5：97.5（體積比）2.550%濃硫酸：濃硫酸：水=1:1（濃硫酸緩慢注入水中，并用玻璃棒引流，并不斷攪動）2.60.5mol/L氫氧化鈉：吸取27mL氫氧化鈉飽和溶液，用水定容至1000mL2.7高純水（注：使用高效液相色譜儀的過程中，所用的水都是高純水）操作液相條件3.1流速：1.0mL/min;3.2檢測波長：210nm;3.3柱溫：30℃3.4進樣量：20μL操作方法4.1標準品/樣品處理方法精確稱取0.4g乳酸標準品/樣品于100mL的燒杯中，向燒杯中加20mL的高純水將標準品溶解，然后再加10mL0.5mol/L的氫氧化鈉，用玻璃棒攪拌均勻，并沖洗玻璃棒。然后放到萬用電爐上進行加熱待溶液煮沸后開始計時5min，冷卻后用50%的硫酸調節PH值為2.2-2.5，然后將溶液轉移到100mL容量瓶中，用高純水少量多次沖洗燒杯，將沖洗液一并移入到容量瓶中，最后用高純水定容到100mL.此時標準品的濃度為2mg/mL（標準品1）4.2樣品處理方法用電子天平稱取0.4g左右的樣品100mL的燒杯中，向燒杯中加20mL的高純水將樣品溶解，然后再加10mL0.5mol/L的氫氧化鈉，用玻璃棒攪拌均勻并沖洗玻璃棒。然后放到萬用電爐上進行加熱待溶液煮沸后開始計時5min，冷卻后用50%的硫酸調節PH值為2.2-2.5，然后將溶液轉移到100mL容量瓶中，用高純水少量多次沖洗燒杯，將沖洗液一并移入到容量瓶中，最后用高純水定容到100mL.4.3系統設置4.3.1依據檢測條件設置高效液相，并將清洗瓶內的高純水置換（清洗瓶內的高純水必須是過濾并經過超聲清洗的）4.3.2流動相（2.4）用微孔濾膜（1.7有機系）過濾后，然后用超聲清洗器（1.4）超聲20min；4.3.3用過濾并超聲清洗后的流動相平衡高效液相系統20min（不接柱子C18);觀察輸送流動相的管路中是否有氣泡，如果有氣泡要及時把氣泡排出。（排氣泡方法：打開放空閥，按儀器前面板的“沖洗”功能鍵，用大流量沖洗系統直到流出的液體連續，證明氣泡已經排除）4.3.4設置柱溫箱（1.3）溫度為30℃，連接C18柱子，觀察柱子兩端是否漏液，如果不漏液，將柱子放置到柱溫箱中。并觀察高壓恒流泵的壓力，一般在18mpa左右為正常壓力。繼續用流動相平衡系統和C18柱20min4.3.5跑基線（依據液相系統操作），直到基線成一條直線4.4進標準樣從標準品1中各吸取15mL，20mL，25mL，30mL溶液分別定容至50mL,（此時溶液濃度分別為0.6mg/mL（標準品2）0.8mg/mL（標準品3）1.0mg/mL（標準品4）1.2mg/mL（標準品5）)，將5個標準品分別過濾至5個離心管（1.11）中并棄去初濾液。（將微孔濾膜（1.8）套在一次性無菌注射器（1.9）上進行過濾），用微量進樣器（1.10）分別吸取5個離心管中溶液上機檢測，進樣量為30μL，以峰高為縱坐標，樣品濃度為橫坐標，作出直線方程。4.5進樣品樣先用一次性無菌注射器（1.9）吸取定容至100mL的樣品溶液，經微孔濾膜（1.8）過濾至離心管（1.11）中并棄去初濾液，用微量進樣器（1.10）吸取離心管中樣品溶液上機檢測，進樣量為30μL，記錄峰高值帶入直線方程中，求出濃度計算公式C×100C×100×標準品純度×100%m×1000m×