真菌的微生物檢驗右江民族醫學院檢驗醫學系潘國剛真菌〔Fungus〕具有典型細胞構造〔細胞核、細胞器、細胞壁〕細胞壁含幾丁質和〔或〕纖維素無根、莖、葉，不含葉綠素以腐生或寄生方式攝取養料能進展有性生殖和〔或〕無性繁衍第一部分病原性真菌概述對人類致病的真菌分為：淺部真菌：進犯皮膚、毛發、指甲，為慢性，對治療有頑固性，但影響身體較小，深部真菌：可進犯全身內臟，嚴重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產生毒素引起中毒性真菌病。一、生物學性狀

〔一〕形狀構造真菌細胞構造比細菌復雜細胞壁為幾丁質(Chitin)〔多聚N－乙酰葡萄糖組成〕，并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白質，某些酵母菌還含類脂體。細胞內有較為典型的核構造和細胞器。真菌形狀分單細胞和多細胞兩類單細胞真菌主要為酵母和類酵母菌〔如隱球菌、念珠菌〕，呈圓形或橢圓形。以出芽方式繁衍。多細胞真菌由菌絲和孢子組成菌絲分枝交錯成團，構成菌絲體〔Mycelium〕，并長有各種孢子，這類真菌即普通稱為霉菌〔Mold〕。由于生活環境〔如營養、溫度、氧氣等〕的改動，有些真菌的孢子與菌絲兩種形狀可以互變，這類真菌稱為二相性真菌〔dimorphicfungus〕，如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。真菌孢子和細菌芽胞的區別真菌孢子細菌芽胞抵抗力不強，60-70短時間殺死強，煮沸短時間不死數目一條菌絲可產生多個孢子一個細菌體只形成一個芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細胞內外形成只在細菌細胞內形成形狀形態、色澤多樣圓形或橢圓形真菌的形狀構成菌絲營養菌絲氣生菌絲→生殖菌絲孢子有性孢子由同一菌體或不同菌體上的二個細胞融合形成

絕大多數屬于非致病性真菌所具有

無性孢子分生孢子分生孢子梗的頂端或側面大分生孢子小孢子菌屬、表皮癬菌屬小分生孢子毛癬菌屬葉狀孢子菌絲細胞直接形成芽生孢子

隱球菌、念珠菌

關節孢子

厚膜孢子

新型隱球菌子囊孢子菌絲末端形成膨大的囊狀結構即孢子囊，內含很多孢子

根霉菌

真菌菌絲形狀真菌孢子形狀〔二〕培育特性大多數真菌營養要求不高，常用沙保氏培育基〔SDA〕培育。淺部病原性真菌的最適溫度為22～28℃，生長緩慢，大多于1～4周出現典型菌落。深部病原性真菌培育在37℃中生長最好，生長較快，經3-4天即長出菌落。真菌菌落類型類型定義特征顏色舉例酵母型菌落為單細胞真菌的菌落，形態與一般細菌菌落相似，以出芽形式繁殖光滑、濕潤，一般為乳白色新型隱珠菌類酵母型菌落外觀似酵母菌落，但可見伸入培養基中的假菌絲，由伸長的芽生孢子形成光滑、濕潤，一般為乳白色白色念珠菌絲狀菌落為多細胞真菌的菌落，由許多管狀、分枝菌絲體組成絨毛狀、絮狀、粉末狀、顆粒狀、石膏狀。可產生各種色素。毛癬菌〔三〕變異性真菌易發生變異，在人工培育基中多次傳代或孵育過久，可出現形狀構造、菌落性狀、色素及毒力等改動。〔四〕抵抗力真菌對枯燥、陽光、紫外線及普通化學消毒劑有一定的耐受力，但充分暴露于陽光，紫外線及枯燥情況下大多數真菌可被殺死，且對2.5%碘酒，10%福爾馬林都敏感，普通可用福爾馬林薰蒸被真菌感染的房間。對熱敏感，普通60℃1小時可殺死真菌菌絲和孢子。二、致病性與免疫性

〔一〕致病性真菌引起的疾病大致包括真菌性感染：主要是外源性感染淺部真菌進犯皮膚、指甲及須發等組織，頑強繁衍，發活力械刺激損害，同時產生酶及酸等代謝產物，引起炎癥反響和細胞病變。深部真菌進犯皮下，內臟及腦膜等處，引起慢性肉芽腫及壞死。2．條件致病性真菌感染：主要是內源性感染〔如白色念珠菌〕，亦有外源性感染〔如曲霉菌〕。3．過敏性真菌病：由真菌性過敏原〔如孢子抗原〕引起過敏癥，如哮喘，變態反應性肺泡炎和癬菌疹等。4．真菌毒素中毒癥：進犯害肝、腎、腦、中樞神經系統及造血組織。如黃曲霉毒素、某些鐮刀菌素和黑葡萄穗素。〔二〕免疫性1．非特異性免疫：人類對真菌感染有天然免疫力。皮膚分泌短鏈脂肪酸和乳酸、血液中轉鐵蛋白、中性粒細胞和單核巨噬細胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2．特異性免疫：真菌感染中細胞免疫是機體排菌殺菌及復原的關鍵，T細胞分泌的淋巴因子、以T細胞為主導的遲發型變態反響引起免疫病理損傷能局限和消滅真菌，以終止感染。三、微生物學診斷

〔一〕

直接檢查1．不染色標本的直接鏡檢：直接采取標本制片、顯微鏡下直接察看，假設發現真菌菌絲或孢子存在時，即可初步斷定為真菌感染。1〕標本制備：2〕檢查方法：3〕封固液：①KOH溶液：本液適于檢查致密的難以透明的資料〔如毛發、指甲、鱗屑等〕。②墨汁：主要用于檢查有莢膜的真菌〔如新型隱球菌等〕。③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力較強，只限于不透明的標本。④生理鹽水：為察看真菌的出芽景象可用生理鹽水替代氫氧化鉀溶液。2．染色標本檢查：1〕革蘭氏染色：各種真菌均為革蘭氏陽性，為深藍色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子絲菌、諾卡菌及組織胞漿菌等。2〕乳酸酚棉藍染色3〕糖原染色：菌體均染成紅色。用于標本直接涂片及組織病理切片染色。4〕嗜銀染色〔GMS〕：染成黑色。5〕粘蛋白卡紅染色法〔MCS〕：主要用于新型隱球菌莢膜的染色。隱球菌莢膜和細胞壁呈紅色，細胞核呈黑色。6〕熒光染色：主要運用吖啶橙和氫氧化鉀來染直接涂片、培育涂片及組織切片。〔二〕培育檢查本法可確定菌種，輔助直接檢查的缺乏；通常用沙保氏培育基〔SDA〕〔22～28℃〕；深部真菌可用血瓊脂或腦心葡萄糖血瓊脂37℃培育；〔三〕免疫學實驗用于檢測深部感染真菌的抗體，作為輔助診斷組織胞漿菌、念珠菌、曲霉菌。檢測深部感染真菌的抗原，用于早期、快速、特異的診斷。乳膠凝集法檢測新型隱球菌病患者的莢膜多糖抗原ELISA法檢測白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原免疫熒光法檢測孢子絲菌病患者的可溶性抗原四、防治原那么真菌感染尚無特異預防，主要留意公共衛生和個人衛生；碘化物治療孢子絲菌病、毛霉菌病有一定療效；制霉素、灰黃霉素、克霉唑〔三苯甲霉唑〕等外用或內服對癬癥和白色念珠菌病等有較好療效；近年報道5-氟胞嘧啶〔5-FC〕治療單細胞真菌感染療效顯著；二性霉素B可用于深部全身真菌感染。第二部分淺部真菌淺部真菌主要為皮膚絲狀菌〔Dermatophytes〕，進犯皮膚、毛發、指甲等角化組織引起癬癥，又稱癬菌(Ringworm)，分為三屬，共37個種。(一)、生物學特征皮膚癬菌的特征

屬名種數

侵犯部位形態特征皮膚指甲毛發大分生孢子小分生孢子菌絲毛癬菌屬

21+++細長、棒形、壁薄，少見或無梨形、棒形，較多見螺旋狀、鹿角狀、結節狀、球拍狀、破梳狀，單純細菌絲小孢子癬菌屬

15+-+紡錘形，壁較厚，較多見棒形，卵圓形，較少見球拍狀及破梳狀菌絲表皮癬菌屬

1++－梨形、壁較薄，多見無單純菌絲〔二〕檢驗方法：1．直接鏡檢：直接采取病變部位的標本，用顯微鏡檢查有無菌絲及孢子的存在，本法迅速簡便，是臨床真菌檢查最常用的方法2．分別培育：取毛發、皮屑、甲屑等標本，用70％乙醇消毒，接種沙保氏瓊脂斜面培育基，25℃培育7～14天，根據菌落形狀及顏色、并挑取菌落鏡檢菌絲及孢子的特征進展鑒定。毛癬菌屬小孢子菌屬表皮癬菌屬3．熒光檢查：本法主要用于頭癬檢查。病發在濾過紫外燈照射下可發出不同色澤的熒光，如黃癬菌病發呈暗綠色熒光，白癬小孢子菌屬的病發呈亮綠色熒光等。第三部分深部感染真菌深部真菌是進犯皮下組織和內臟，引起全身性感染的真菌。多數能引起慢性肉芽腫樣炎癥、潰瘍及壞死等病變深部感染真菌分兩大類：1.致病性真菌：此類真菌在正常人體內部不存在，一旦侵入機體，即可致病，如組織胞漿菌、球孢子菌、芽生菌等，屬外源性，我國少見；2.條件致病性真菌：是人體正常菌群的成員，當機體抵抗力下降時才致病，如新型隱球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。一、白色念珠菌白色念珠菌〔canidiaAlbicans〕又稱白色假絲酵母菌，廣泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，腸道及陰道，普通在正常機體中數量少，不引起疾病。為條件致病性真菌。〔一〕生物學特性卵圓形，大小2μm×4μm，革蘭氏染色陽性。有假菌絲。培育特性：典型類酵母型菌落，外表光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母氣味。涂片鏡檢，可看到表層為卵圓形芽生細胞，底層有較多假菌絲。〔二〕致病性和免疫性白色念珠菌可進犯人體許多部位，可引起：1.皮膚念珠菌病：好發于皮膚皺褶處；2.粘膜念珠菌病：鵝口瘡、口角炎、陰道炎最多見。3.內臟及中樞神經念珠菌病：肺炎、腸胃炎、心內膜炎、腦膜炎、腦炎等。機體可產生一定免疫力。〔三〕檢驗方法及鑒定1．直接鏡檢：革蘭氏染色鏡檢2．培育特點：典型的酵母菌落。3．鑒定實驗1〕芽管實驗：取少許待檢的白色念珠菌接種于0.5ml人或兔血清中，混勻，直37℃水浴2-3h后，取出一接種環菌液，涂片、鏡檢。有芽管產生者為白色念珠菌，其他念珠菌不產生芽管。2〕TZC實驗：將白色念珠菌接種于含0.005％氯化三本四氮唑的沙保培育基中，經22～25℃，24～48h培育，白色念珠菌不變色或僅淡紅色，其他念珠菌或酵母菌呈紅色或深紅色。3〕糖發酵和糖同化實驗：根據這兩種實驗可將常見的幾種念珠菌進展鑒別。4〕動物實驗：本菌對兔有致病力。給兔耳靜脈注射本菌，經4～5天死亡。解剖可見腎、肝腫脹、充血，并有小膿腫，涂片及培育均可見本菌及其假菌絲存在。5〕厚膜孢子構成實驗：本實驗亦是鑒定白色念珠菌的重要方法之一，在玉米粉聚山梨酯－80瓊脂培育基培育本菌，鏡檢察看到厚膜孢子及假菌絲。4．血清學診斷用于診斷全身性念珠菌病。以念珠菌為抗原測定機體抗念珠菌抗體二、新型隱球菌新型隱球菌又名溶組織酵母菌，是土壤，鴿類，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中。可進犯人和動物，普通為外源性感染，但也能夠為內源性感染，對人類而言，它通常是條件致病菌。〔一〕生物學特性較大球形，直徑可達5～20um，有肥厚的莢膜，折光性強，普通染料不易著色，難以發現，稱隱球菌，用墨汁陰性顯影法鏡檢，可見到透明莢膜包裹著菌細胞，菌細胞常有出芽，但不生成假菌絲。在沙保氏瓊脂及血瓊脂培育基上，于25及37℃皆可生長，而非病原性隱球菌在37℃不能繁衍。酵母型菌落，呈白色。本菌能分解尿素，以此與酵母菌和念珠菌鑒別。〔二〕致病性本菌大多由呼吸道轉入，在肺部引起輕度炎癥，或隱性傳染。進犯中樞神經系統，發生腦膜炎、腦炎、腦肉芽腫等。此外可侵入骨骼、肌肉、淋巴結、皮膚粘膜引起慢性炎癥和膿腫。〔三〕微生物學檢驗1．直接鏡檢：常用