第三章病毒第一節概述第二節病毒的形態和結構第三節病毒的復制第四節病毒的溶原性第五節病毒對理化因素抵抗力一、病毒的特點和定義第一節概述1、特點1）不具有細胞結構，具有一般化學大分子的特征。2）一種病毒的毒粒內只含有一種核酸，DNA或者RNA。3）大部分病毒沒有酶或酶系極不完全，不含催化能量代謝的酶，不能進行獨立的代謝作用。4）嚴格的活細胞內寄生，沒有自身的核糖體，沒有個體生長，也不進行二均分裂，必須依賴宿主細胞進行自身的核酸復制，形成子代。5）個體微小，在電子顯微鏡下才能看見。6）對大多數抗生素不敏感，對干擾素敏感。例如一些簡單的病毒僅由核酸和蛋白質外殼（coat）構成，故可把它們視為核蛋白分子。朊病毒甚至僅由蛋白質構成例如利福平可抑制痘病毒復制病毒感染敏感宿主細胞后，病毒核酸進入細胞，通過其復制與表達產生子代病毒基因組和新的蛋白質，然后由這些新合成的病毒組分裝配（assembly）成子代毒粒，并以一定方式釋放到細胞外。病毒的這種特殊繁殖方式稱做復制（replication）。第一節概述1、特點一、病毒的特點和定義病毒是一類既具有化學大分子屬性，又具有生物體基本特征；既具有細胞外的感染性顆粒形式，又具有細胞內的繁殖性基因形式的獨特生物類群。超顯微的、沒有細胞結構的、專性活細胞內寄生的實體第一節概述1、特點一、病毒的特點和定義單細胞微生物與病毒性質的比較aDNA病毒和RNA病毒中的一部分;b利福平可抑制痘病毒復制第一節概述2、定義一、病毒的特點和定義迄今仍無一個科學而嚴謹的定義病毒為具有獨立于其宿主的進化史的絕對細胞內寄生物，它的DNA或RNA基因組被其所編碼的蛋白質殼體化（encapsidation）。

（Fields等，1990年）非細胞生物（真）病毒：至少含核酸和蛋白質二種組分亞病毒(subvirus)類病毒（viroid)：只含具侵染性的RNA組分擬病毒（virusoid)：只含有不具侵染性的RNA組分朊病毒（prion)：只含蛋白質二病毒的宿主范圍第一節概述病毒幾乎可以感染所有的細胞生物，并具有宿主特異性噬菌體（phage）、植物病毒（plantviruses）動物病毒（animalviruses）Microbiology雙層平板法優點：①彌補玻璃皿底面不平的缺陷②所形成全部噬菌體斑都接近處于同一平面上③形成的噬菌斑較大，更有利于計數Microbiology噬菌斑四、病毒的培養和純化

1、病毒的培養動物病毒實驗動物雞胚多種細胞培養四、病毒的培養和純化

1、病毒的培養植物病毒敏感植物葉片產生壞死斑，或稱枯斑

蛋白質提純方法（鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、凝膠層析、離子交換等）四、病毒的培養和純化

2、病毒純化標準純化的病毒制備物應保持其感染性病毒是有感染性的生物體病毒具有化學大分子的屬性純化的病毒制備物的理化性質應具有均一性方法主要化學組成為蛋白質具有一定的大小、形狀和密度差速離心梯度離心（超速離心）第二節毒粒的性質病毒是一類既具有化學大分子屬性，又具有生物體基本特征；既具有細胞外的感染性顆粒形式，又具有細胞內的繁殖性基因形式的獨特生物類群。毒粒（病毒顆粒）：

病毒的細胞外顆粒形式，也是病毒的感染性形式。一團能夠自主復制的遺傳物質保護遺傳物質免遭環境破壞，并作為將遺傳物質從一個宿主細胞傳遞給另一個宿主細胞的載體。蛋白質外殼包膜第二節毒粒的性質一、毒粒的形態結構1、病毒的大小和形狀個體小，必需在電鏡下觀察；不同病毒的毒粒大小差別很大；毒粒的形狀:動物病毒有球狀、卵圓狀、磚形植物病毒有桿狀、絲狀、球狀噬菌體有蝌蚪狀和絲狀采用各種電鏡技術觀察毒粒的形態結構Orfvirus：口瘡病毒(接觸性膿皰皮炎病毒)（負染技術）Ebolavirus：埃博拉病毒（正染技術）Vacciniavirus痘苗病毒（投影技術）第二節毒粒的性質毒粒的化學組成毒粒（化學組成）核酸；蛋白質；脂類；碳水化合物；基本化學組成病毒顆粒在化學上表現為核蛋白二、毒粒的化學組成1、病毒的核酸核酸是病毒的遺傳物質；一種病毒的毒粒只含有一種核酸：DNA或是RNA；病毒核酸單鏈DNA（ssDNA，single-strandedDNA）；雙鏈DNA（dsDNA）；單鏈RNA（ssRNA）；雙鏈RNA（dsRNA）；二、毒粒的化學組成2、病毒的蛋白質病毒蛋白質結構蛋白非結構蛋白病毒基因組編碼的，在病毒復制過程中產生并具有一定功能，但并不結合于毒粒中的蛋白質。構成一個形態成熟的有感染性的病毒顆粒所必需的蛋白質殼體蛋白；包膜蛋白；存在于毒粒中的酶；二、毒粒的化學組成2、病毒的蛋白質病毒結構蛋白的主要生理功能：1）構成蛋白質外殼，保護病毒核酸免受核酸酶及其它理化因子的破壞；2）決定病毒感染的特異性，與易感細胞表面存在的受體具特異性親和力，促使病毒粒子的吸附和入侵；3）決定病毒的抗原性，能刺激機體產生相應的抗體；4）構成毒粒酶，或參與病毒對宿主細胞的入侵（如T4噬菌體的溶菌酶等），或參與病毒復制過程中所需要病毒大分子的合成（如逆轉錄酶等）；一般來說，病毒是不具酶或酶系極不完全的，所以一旦離開宿主就不能獨立進行代謝和繁殖。第二節病毒的性質2、病毒的殼體結構殼體或衣殼（capsid）：包圍著病毒核酸的蛋白質外殼，由蛋白質亞基按對稱的形式、有規律地排列而成，是病毒毒粒的基本結構。殼體結構類型螺旋對稱殼體二十面體對稱殼體雙對稱結構螺旋對稱殼體：亞基有規律地沿著中心軸（核酸）呈螺旋排列，進而形成高度有序、對稱的穩定結構。二十面體對稱殼體：構成對稱結構殼體的第二種方式是蛋白質亞基圍繞具立方對稱的正多面體的角或邊排列，進而形成一個封閉的蛋白質的鞘。具有雙對稱結構的典型例子是有尾噬菌體（tailedphage）,其殼體由頭部和尾部組成。包裝有病毒核酸的頭部通常呈二十面體對稱，尾部呈螺旋對稱。一、病毒的形態結構3、病毒的包膜結構病毒包膜的基本結構與生物膜相似，是脂雙層膜。在包膜形成時，細胞膜蛋白被病毒的包糖蛋白取代。刺突（spike）：包膜或核衣殼上的突起。第二節病毒的性質一、病毒的形態結構3、病毒的包膜結構病毒的蛋白質殼體和病毒核酸（核心）構成的復合物，又稱核衣殼。核殼（nucleocapsid）：僅由核衣殼構成的病毒顆粒裸露毒粒（nakedvirion）：如煙草花葉病毒、脊髓灰質炎病毒（Poliovirus）等一些簡單的病毒的毒粒。包膜（envelope）：有些病毒核衣殼包裹著的一層脂蛋白膜，它是病毒以出芽（budding）方式成熟時，由細胞膜衍生而來的。有維系毒粒結構，保護病毒核殼的作用。特別是病毒的包膜糖蛋白，具有多種生物學活性，是啟動病毒感染所必需的。有包膜的病毒第二節病毒的性質一、病毒的形態結構4、病毒的結構類型四種主要結構類型裸露的二十面體；裸露的螺旋；有包膜的二十面體；有包膜的螺旋；有些病毒，如有尾噬菌體、痘病毒等結構更為復雜，不能包括在這些結構類型之內。不同病毒的毒粒結構復雜程度有很大的區別第三節病毒的復制病毒的特點：嚴格細胞內寄生物，只能在活細胞內繁殖。毒粒宿主細胞有繁殖性的病毒基因組具有感染性的毒粒消失病毒基因組復制、表達病毒核酸和蛋白質裝配形成具有感染性的毒粒釋放至細胞外原料；能量；生物合成場所；第三節病毒的復制病毒的復制：病毒感染敏感宿主細胞后，病毒核酸進入細胞，通過其復制與表達產生子代病毒基因組和新的蛋白質，然后由這些新合成的病毒組分裝配（assembly）成子代毒粒，并以一定方式釋放到細胞外。病毒的這種特殊繁殖方式稱做復制（replication）。第三節病毒的復制一、病毒的復制周期1、一步生長曲線（onestepgrowthcurve）1939年，MaxDelbruck&EmoryEllis：E.coli/bacteriopage1、用噬菌體的稀釋液感染高濃度的宿主細胞；2、數分鐘后，加入抗噬菌體的抗血清（中和未吸附的噬菌體）；3、將上述混合物大量稀釋，終止抗血清的作用和防止新釋放的噬菌體感染其它細胞；4、保溫培養并定期檢測培養物中的噬菌體效價（對噬菌體含量進行計數）；5、以感染時間為橫坐標，病毒的感染效價為縱坐標，繪制出病毒特征性的繁殖曲線；該實驗標志著分子病毒學、分子生物學和分子遺傳學的建立MaxDelbruck因此榮獲1969年NobelPrize一、病毒的復制周期1、一步生長曲線（onestepgrowthcurve）噬菌體復制（繁殖）的三個階段：1、吸附期；游離的噬菌體吸附到宿主細胞2、潛伏期；從噬菌體吸附到細胞到釋放出新噬菌體的最短時期3、裂解期；隨著菌體不斷破裂，新噬菌體數目增加，直到最高值一、病毒的復制周期1、一步生長曲線（onestepgrowthcurve）取培養物直接測定病毒數量將培養物過濾去細胞后測定病毒數量將細胞裂解后測定病毒的數量。前期可將培養物先離心去上清以消除未吸附病毒的影響裂解量：每個受染細胞所產生的子代病毒顆粒的平均數目。其值等于潛伏期受染細胞的數目除以穩定期受染細胞所釋放的全部子代病毒數目，即等于穩定期病毒效價與潛伏期病毒效價之比。一、病毒的復制周期2、隱蔽期（eclipseperiod）在潛伏期的前一段，受染細胞內檢測不到感染性病毒，后一階段，感染性病毒在受染細胞內的數量急劇增加。自病毒在受染細胞內消失到細胞內出現新的感染性病毒的時間為為隱蔽期。隱蔽期病毒在細胞內存在的動力學曲線呈線性函數，而非指數關系，從而證明子代病毒顆粒是由新合成的病毒基因組與蛋白質經裝配成熟，而不是通過雙分裂方式產生的。不同病毒的隱蔽期長短不同，例如，DNA動物病毒的隱蔽期為5～20小時，RNA動物病毒為2～10小時。一、病毒的復制周期1、一步生長曲線（onestepgrowthcurve）一步生長曲線是研究病毒復制的一個經典試驗，最初是為研究噬菌體的復制而建立，以后推廣到動物病毒和植物病毒的復制研究中。以適量的病毒接種于標準培養的高濃度的敏感細胞，待病毒吸附后，離心除去未吸附的病毒，或以抗病毒抗血清處理病毒—細胞培養物以建立同步感染，然后繼續培養并定時取樣測定培養物中的病毒效價，并以感染時間為橫坐標，病毒的感染效價為縱坐標，繪制出病毒特征性的繁殖曲線，即一步生長曲線。不同病毒的潛伏期長短不同，噬菌體以分鐘計，動物病毒和植物病毒以小時或天計。潛伏期：噬菌體的裂解量一般為幾十到上百個，植物病毒和動物病毒可達數百乃至上萬個。裂解量：一、病毒的復制周期3、病毒的復制周期復制周期（replicativecircle）或稱復制循環：自病毒吸附于細胞開始，到子代病毒從感染細胞釋放到細胞外的病毒復制過程。①吸附；

②侵入；

③脫殼；

④病毒大分子的合成，包括病毒基因組的表達與復制；⑤裝配與釋放；第三節病毒的復制二、病毒感染的起始1、吸附：毒粒敏感細胞隨機碰撞而接觸（靜電引力或氫鍵）可逆吸附，無特異性（非細胞顆粒也可吸附）病毒表面蛋白與細胞受體的結合特異性，不可逆吸附，啟動病毒感染的第一階段二、病毒感染的起始1、吸附：病毒吸附蛋白與細胞受體間的結合力來源于空間結構的互補性，相互間的電荷、氫鍵、疏水性相互作用及范得華力。不同種系的細胞具有不同病毒的細胞受體，病毒受體的細胞種系特異性決定了病毒的宿主范圍。二、病毒感染的起始2、侵入：侵入又稱病毒內化，它是一個病毒吸附后幾乎立即發生，依賴于能量的感染步驟。不同的病毒-宿主系統的病毒侵入機制不同二、病毒感染的起始2、侵入：有尾噬菌體：注射方式將噬菌體核酸注入細胞通過尾部刺突固著于細胞；尾部的酶水解細胞壁的肽聚糖，是細胞壁產生小孔；尾鞘收縮，核酸通過中空的尾管壓入胞內，蛋白質外殼留在胞外；吸附尾釘固著尾鞘收縮尾管穿入DNA注入如果大量噬菌體在短時間內吸附于同一細胞上，使細胞壁產生許多小孔，也可引起細胞立即裂解，但并未進行噬菌體的增殖，這種現象稱為自外裂解（lysisfromwithout）。二、病毒感染的起始2、侵入：植物病毒：通過因人為地或自然的機械損傷所形成的微傷口進入細胞；或者靠攜帶有病毒的媒介，主要靠是有吮吸式口器的昆蟲取食將病毒帶入細胞。植物病毒一旦進入細胞后，增殖產生的子代病毒或病毒核酸可通過病毒編碼的運動蛋白（movementprotein）與胞間連絲的相互作用從受染細胞進入鄰近細胞。二、病毒感染的起始3、脫殼：脫殼是病毒侵入后，病毒的包膜和/或殼體除去而釋放出病毒核酸的過程。脫殼是病毒基因組進行功能表達所必需的感染事件。T-偶數噬菌體脫殼與侵入是一起發生的動物病毒存在不同的結構類型和不同的侵入方式，其脫殼過程也較復雜。第三節病毒的復制三、病毒大分子的合成病毒基因組進入胞內宿主細胞的代謝發生改變病毒利用宿主的生物合成機構和場所，使病毒核酸表達和復制，產生大量的病毒蛋白質和核酸。四、病毒的裝配與釋放第三節病毒的復制新合成的毒粒結構組分組裝成完整的病毒顆粒，稱做病毒的裝配，亦稱成熟（maturation）或形態發生（morphogenesis）。成熟的子代病毒顆粒然后依一定途徑釋放到細胞外病毒的釋放標志病毒復制周期結束吸附侵入早期：病毒特異性酶的合成病毒核酸復制病毒結構蛋白質合成裝配釋放病毒大分子合成噬菌體與宿主關系1、烈性噬菌體：凡能引起宿主細胞迅速裂解的噬菌體。2、溫和性噬菌體：噬菌體侵染宿主后，并不增殖，裂解，而與宿主DNA結合，隨宿主DNA復制而復制，此時細胞中找不到形態上可見的噬菌體，這種噬菌體稱為溫和性噬菌體。含有溫和性噬菌體的細菌稱為溶源性細菌lysogenicbacteria第四節病毒的非增殖性感染溫和噬菌體的溶源性反應：烈性噬菌體（virulentphage）：感染宿主細胞后能在細胞內正常復制并最終殺死細胞，形成裂解循環（lyticcycle）。溫和噬菌體或稱溶源性噬菌體（lysogenicphage）：感染宿主細胞后不能完成復制循環，噬菌體基因組長期存在于宿主細胞內，沒有成熟噬菌體產生。這一現象稱做溶源性（lysogeny）現象在大多數情況下，溫和噬菌體的基因組都整合于宿主染色體中（如λ噬菌體），亦有少數是以質粒形成存在（如P1噬菌體）。溫和性噬菌體存在狀態1）游離具感染性的virion；2）前噬菌體（prophage）：附著或整合在宿主染色體上，一道復制；3）營養期噬菌體：指導合成。溫和噬菌體的溶源性反應：整合于細菌染色體或以質粒形成存在的溫和噬菌體基因組稱做原噬菌體（prophage）在原噬菌體階段，噬菌體的復制被抑制，宿主細胞正常地生長繁殖，而噬菌體基因組與宿主細菌染色體同步復制，并隨細胞分裂而傳遞給子代細胞。細胞中含有以原噬菌體狀態存在的溫和噬菌體基因組的細菌稱做溶源性細菌（lysogenicbacteria）溶源性細菌經自發裂解或誘發裂解，進入裂解循環5節：病毒對理化因素抵抗力1、物理因素主要是溫度、光、干燥?？傻蜏乇４?，但不耐熱，60度，30分鐘。X射線、γ射線、紫外線可滅活。無包膜病毒在相對濕度（RH）較高時存活較好，而有包膜病毒在低RH時存活最好。2、化學因素：體內滅活物質是抗體和干擾素體外一般消毒劑可滅活，對氯耐受力比腸道菌強，對酸性不敏感，對高pH敏感?？捎弥軇?、十二烷基硫酸鈉、氯仿、去氧膽酸鈉等）鑒別有無包膜。3、病毒在環境中存活：在海水和淡水中，溫度是影響病毒存活的主要因素，與病毒類型也有關；土壤中受溫度和濕度影響最大，干燥易使病毒滅活；空氣中病毒附著在塵埃上，存活時間受多種因素影響。污水處理中一級處理是物理過程，去除病毒效果很差，最多30%。二級處理是生物處理，病毒去除率90-99%。三級處理可進一步去除病毒。亞病毒1、類病毒viroid：沒有衣殼包裹的RNA分子。2、擬病毒virusoids(類類病毒）：一類包括在植物病毒粒子中的類病毒，RNA。3、朊病毒prion,virino：一類能侵染動物并在宿主細胞內復制的小分子無免疫性的疏水性蛋白。Microbiology類病毒(viroid)目前所知道的最小、只含RNA一種成分、專性細胞內寄生的分子生物。只在植物體中發現。馬鈴薯紡錘形塊莖病是1922年在美國發現的，它可使馬鈴薯減產20～70％——馬鈴薯紡錘形塊莖病類病毒：它是一條長50nm的棒狀dsRNA分子Microbiology擬病毒（virusoids）又稱類類病毒（viroid-like），可認為是一類包裹在植物病毒粒子中的有缺陷的類病毒一般僅由裸露的RNA或DNA組成“寄生”于真病毒內——輔助病毒（helpervirus）其復制必須依賴輔助病毒Microbiology朊病毒（prion，virino）朊病毒有哪些特點

首先，