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A5491×106cells/mL1mL100mm↓24h(例如加藥,照射↓↓PBS↓1000rpm5min(短時低速離心↓↓30min,或-20℃長久保存。↓1000r/min,↓PBS↓1000r/min,5min↓PBS,200ulPBS2ulRNA(ml)(37℃下30min)↓50ug/mlPI↓將離心管內的細胞過濾(300umPBSEP含有很強的粘附性,容易使細胞聚團),EP↓↓開機(先開儀器后開軟件↓激光光源及光束成形系統;③光學系統;④信號檢測、存貯、顯示、分析系統;⑤細胞分選系統。↓↓↓↓熒光信號變成電信號輸出到計算機,軟件分析(DNA↓成果分析——Modfit ——FlowjoFCM-DNA量分析1DNA含量分布組方圖分G0/1、S、G2M。G0/1G2MDNA正態分布,S期能夠認為是一種加寬的正態分布↓↓關機(先關軟件后關儀器,關機前需清洗DNA:2n-DNADNADNA2n(G1)。1CellNumber:即計數的有效細胞數;2DNAContent:DNA3、G1、G2、S期細胞數占總數的%;DipatG2DNAG2AnnexiV-EGFP/P雙染法檢測細胞凋結合;PIPI凋亡早期:膜完整,PSPI-/AnnexinⅤ+幾乎不存在膜構造——-1×106cells/mL1mL↓24h(例如加入藥品↓↓375min(胰酶消化時間不易過長,以防引發假陽↓PBS(6-8↓倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(單個分離懸浮↓15ml↓rpm5min,PBS↓PBS2(rpm,5min↓400ul1×BindingBuffer1×106↓在細胞懸液中加入5ulAnnexinV-EGFP,輕輕混勻后于2-8℃避光條件下孵育15min↓加入10ulPI后輕輕混勻,于2-8℃避光條件下孵育5↓在1hEx.=488nm510nmEGFP(FL1channel)和>575nmPI在流式細胞術雙參數散點圖上左下象限顯示活細胞(AnnexinV-/PI-);右上象限是非活細胞,
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