成年雞神經病靶酯酶的同一性和特征描述1Contents小結實驗結果所選用的材料與方法文章的主要內容總結文章出處及作者簡介2文章出處及作者簡介文章出處：GENE2021.01作者及其簡介：常平安，伍一軍等伍一軍，男，安徽桐城人。佐治亞醫學院分子醫學與遺傳學系基因調控專業博士后，現任中國科學院動物學研究所研究員，中科院研究生院教授，博士研究生導師。主持分子毒理學實驗室，專業方向為分子毒理學，主要研究領域為神經毒理學、環境毒理學以及藥物引起的神經疾病。主要研究興趣在于環境有害化學物質的神經毒性機制；神經病靶標酯酶引發遲發性神經毒性的分子機理；3文章的主要內容總結這篇文章主要講NTE的基因排序。NTE的基因中的活性部位。NTE的基因中不同部位被GFP標記后主要在哺乳動物中的分布。GFP標記的cNTER可以被macroautophagy和蛋白酶體這兩種東西破壞，而導致其含量下降。4NTE的概念及其根本特點神經病變靶標酯酶(neuropathytargetesterase,NTE)是在研究有機磷化合物引起的遲發性神經病變(organophosphate2induceddelayedneuropathy,OPIDN)的發生機制過程中發現的。通常認為NTE的抑制和“老化〞是OPIDN發生的前提[。NTE是一個由1327個氨基酸組成的跨膜蛋白。將不同的NTE肽段在大腸桿菌中重組表達,發現具有有機磷敏感性和戊酸苯酯水解活性的重組多肽至少含有727-1216氨基酸序列,這一重組多肽被稱為NTE酯酶活力域(NTEesterasedomain,NEST)。以往的研究結果提示,NTE除了具有酯酶活力外,NEST在神經細胞分化和神經系統發育中起著重要作用。NTE不僅存在于腦、脊髓和周圍神經，在外周淋巴細胞內含量也很高。5所選用的材料與方法成年雞及各個實驗用的一些根本試劑。1.分子克隆雞NTE基因的調控序列。2.雞NTE序列的擴展和延伸。3.質粒的構建4.細胞培養和轉染5.給細胞施加MG132,AC,3-MA,雷帕霉素等處理因素。6.Westernblotting分析。7.NTE活性檢8.共聚焦顯微鏡測定簡介6實驗結果7雞的完整的NTE序列是4501bp組成〔basepairkilo-basepairDNA堿基對數目生物學上描述DNA常用的kb、nt、bpkb=千堿基對kilobasent＝核苷酸nucleotidebp＝堿基對basepair〕雞的NTE有兩個不同的區域，其中一個是推定的調節區〔cNTER〕,另外一個是催化區，也叫NTE酶的活性區域序列分析說明，雞的NTE的排列與人和鼠的NTE排列有高度的相似性，其中與人有80%的相似性，與鼠有79%的相似性。8實驗結果二，cNEST是有NTE活性的，而不是cNTER是用細胞轉染的方法來證明的。就是用GFP來標記cNEST和cNTER的羧基端，48h的轉染后，用Westernblot法來測定下她們的分子量，結果說明他們的分子量分別為65和83kDaNTE活性測定是在HEK293Tcells中看GFP的表達。9DistributionofGFPtaggedcNTERandcNESTproteinin

mammaliancells因為cNTERandcNEST都用GFP來標記，所以cNTERandcNEST的分布可以用熒光顯微鏡直接分析出來10熒光顯微鏡結果11NTER和NEST分子量的測定12不同處理因素對cNTER的影響131415Discussion

相對于哺乳動物的PNPLAs，雞的PNPLAs尚未引起足夠的重視。盡管成年母雞常被用作OPIDN的動物模型。但是關于NTE的排序和分子特征知道的很少。在目前的研究中，雞的NTE被完整的別離出來，并且在氨基酸水平與人和小鼠有高度的相似性。另外，蛋白質結構和區域與人也有高度的相似性。16AnERlikelocalizationofpcNTER-GFPwasobservedandcNTEwasreasonablyconsideredtobeanER-anchoredprotein.

cNTEmaybedegradedbymacroautophagy.

17.ChickenNTEwasanER-anchoredproteinAnERlikelocalizationofpcNTER-GFPwasobservedandcNTEwasreasonablyconsideredtobeanER-anchoredprotein.Therefore,cNTEmaybedegradedbymacroautophagy.18thatcNTEwasdegradedbytheproteasomeandthesimilarD-boxsequencesmayactasrecognitionsignalfordegradation.However,furtherstudiesarerequiredtodeterminewhethertheseresiduesaffectthedegradationofcNTE.19總結Insummary,chickenNTEgenewasfirstlyidentified.BycharacterizationoftheregulatoryandesteraseactivitydomainofchickenNTE,chickenNTEwasconfirmedtobeanER-anchoredproteinandbedegradedbymacroautophagyandtheproteasomepathway.Theseresultsmayprovideso