血管活性腸肽對(duì)新生大鼠始基卵泡體外發(fā)育影響的實(shí)驗(yàn)研究的任務(wù)書任務(wù)書題目：血管活性腸肽對(duì)新生大鼠始基卵泡體外發(fā)育影響的實(shí)驗(yàn)研究一、研究背景和目的卵巢是女性的生殖器官，其中主要功能是產(chǎn)生和釋放卵子，同時(shí)還參與了激素的產(chǎn)生和分泌。卵巢中包含許多卵泡，而每個(gè)卵泡中又包含著一個(gè)初級(jí)卵母細(xì)胞。這些初級(jí)卵母細(xì)胞會(huì)在卵泡的支持下發(fā)育成熟，成為可以正常地受精和胚胎發(fā)育的成熟卵子。血管活性腸肽（VIP）是一種廣泛存在于哺乳動(dòng)物中的神經(jīng)肽，其具有多種生物學(xué)功能，包括影響生殖系統(tǒng)的發(fā)育和功能。已經(jīng)有研究表明，在卵泡發(fā)育過程中，VIP的作用和水平與初級(jí)卵母細(xì)胞的發(fā)育和成熟密切相關(guān)。然而，目前對(duì)VIP對(duì)卵泡初級(jí)卵母細(xì)胞的影響機(jī)制仍不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在探究VIP對(duì)新生大鼠始基卵泡體外發(fā)育的影響，以期為極早期卵泡的形成和發(fā)育提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。二、研究內(nèi)容和方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：使用第三代Sprague-Dawley大鼠3-4周齡的雌性仔鼠，共計(jì)50只。2.主要方法（1）卵巢卵泡的收集及體外培養(yǎng)收集新生大鼠的卵巢組織，用PBS洗滌后去除周圍的脂肪、結(jié)締組織及血管。然后在無菌條件下，用銷釘剪和顯微鉗剝離小的子卵泡（直徑約為150-200um），并在32%血清提取液（PBS培養(yǎng)基+32%成年患有女性不孕癥綜合癥的人血清）中培養(yǎng)12-14天。（2）VIP的添加及濃度效應(yīng)的研究用不同濃度（10-7mol/L，10-6mol/L，10-5mol/L）的VIP溶液添加到培養(yǎng)液中，觀察卵泡的生存狀態(tài)和品質(zhì)。（3）細(xì)胞取樣及組織學(xué)檢測(cè)根據(jù)濃度效應(yīng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，采用合適的VIP濃度進(jìn)行卵泡培養(yǎng)一定時(shí)間后，取樣并進(jìn)行HE染色、實(shí)時(shí)PCR和免疫熒光檢測(cè)，研究VIP對(duì)卵泡初級(jí)卵母細(xì)胞的影響。3.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析利用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。采用方差分析和t檢驗(yàn)分析各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的差異，P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。三、實(shí)驗(yàn)安排第1-2周：購買實(shí)驗(yàn)用品，檢查并確定儀器設(shè)備的正常工作狀態(tài)；收集50只新生大鼠的卵巢組織，并將其準(zhǔn)備成為體外培養(yǎng)卵泡的樣品。第3-4周：按照上述方法進(jìn)行卵泡的體外培養(yǎng)，測(cè)試不同濃度的VIP對(duì)卵泡初級(jí)卵母細(xì)胞的影響。第5-6周：采集樣本（卵泡），制備并檢測(cè)組織樣品，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第7-8周：統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)，并編寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。四、參考文獻(xiàn)1.HillierSG,TetsukaM,FraserHM,etal.VIPandfemalereproductivephysiology.RevReprod,2000,5:13-19.2.VigoE,TribuloP,Perez-MartinezS,etal.VasoactiveIntestinalPeptide(VIP)ExpressioninEquineOvary:EvidenceforVIPasaRegulatorofOvarianFunctioninMare.JEquineVetSci,2015,35:147-153.3.RumboldtM,StefanovicL.VIPexpressioninthehumanovaryandovarianadenocarcinom