革蘭陽性菌的鑒定操作1整理課件

陽球G+c：葡萄球菌屬、微球菌屬、鏈球菌屬、腸革蘭陽性菌球菌屬等陽桿G+b：棒狀桿菌屬、李斯特氏菌屬、丹毒絲菌屬、分支桿菌屬、奴卡菌屬等2整理課件3整理課件需氧革蘭陽性球菌：觸酶葡萄球菌屬微球菌屬鏈球菌屬腸球菌屬G+球菌革蘭涂片陽性陰性七葉苷陽性、6.5％Nacl陽性腸球菌屬鏈球菌屬4整理課件

挑取單個菌落進行涂片固定、初染、酶染、脫色、復染注意：挑取時接種環輕碰菌落邊緣即可。

1：涂片

2：染色

5整理課件根據菌體特征作出初步鑒定假設鏡檢結果為革蘭氏陽性桿菌，那么在建議與解釋欄填寫“因NCCLS上無相應的藥敏標準，請根據臨床病癥經驗用藥，并考慮是否為污染菌。〞3：鏡檢革蘭陽性球菌6整理課件

原理：2H2O2

O2+2H2O注意：血瓊脂上菌落不宜作此試驗。4：觸酶試驗觸酶試驗〔Catalase〕：1、觸酶陽性，可初步判斷為葡萄球菌屬和微球菌屬;2、觸酶陰性，可初步判斷為鏈球菌屬和腸球菌屬7整理課件5：Staphaurex膠乳凝集試驗Staphaurex膠乳凝集試驗是一種鑒定金葡菌的快速、簡便的商品化直接凝集試驗。根本原理是在紙板或玻片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環挑取待鑒定的新鮮培養物參加混勻出現凝集塊現象為陽性。本法不僅可以檢測金葡菌的凝固酶而還可通過IgG抗體的FC段與金葡菌的A蛋白有特殊的親和力而檢測之。中等大小、黃或灰白，β溶血或不溶血的菌落，那么做Staphaurex膠乳凝集試驗：陽性、24hβ溶血，那么判斷為金黃色葡萄球菌；不溶血，那么API或上機。陰性報告凝固陰性葡萄球菌或APISTARPH、上機8整理課件5.API板條試驗5.葡萄糖發酵試驗5.β溶血菌落小、黃色菌落；鏡下呈四聯、八疊排列細菌，那么做葡萄糖發酵試驗：陽性那么轉為上一個步驟試驗；陰性報微球菌屬9整理課件6.桿菌肽試驗6.CAMP試驗6.Optochin試驗6.七葉苷NaCl試驗七葉苷試驗〔陰性或陽性〕6.5％Nacl試驗陰性：1.α溶血，做Optochin試驗：敏感且G+矛頭狀雙球菌、臍窩狀菌落，那么判斷為肺炎鏈球菌〔Optochin試驗抑菌圈的直徑≥14mm為陽性〕2.β溶血：2.1.桿菌肽試驗敏感，那么判斷為A群鏈球菌2.2.乳膠凝集或CAMP陽性，那么判斷為B群鏈球菌2.3.其它上機3.γ溶血那么上機10整理課件6.阿拉伯糖、山梨醇七葉苷試驗陽性6.5％Nacl試驗陽性，那么判斷為腸球菌屬：1.阿拉伯糖陰性、山梨醇陽性那么判斷為糞腸球菌2.阿拉伯糖陽性、山梨醇陰性那么判斷為屎腸球菌11整理課件葡萄球菌屬12整理課件葡萄球菌屬概述葡萄球菌屬〔Staphylococcus〕是一類觸酶試驗陽性的革蘭氏陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中間型葡萄球菌屬、施氏葡萄球菌、路鄧葡萄球菌等32個種。因常堆聚成葡萄串狀，故名。葡萄球菌在自然界中分布廣泛，存在于空氣、水、塵埃及人體皮膚外表、鼻、咽等。多數為非致病菌。少數可導致疾病。13整理課件形態與染色球形或稍呈橢圓形，直徑0.4-1.2um，排列成葡萄球狀。葡萄球菌無鞭毛、不能運動，無芽孢，除少數菌株外一般不形成莢膜。革蘭染色為陽性，其衰老、死亡或被白細胞吞噬后某些菌株可被染成革蘭陰性。14整理課件金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落特征：光滑、完整微隆起、半透明，β-溶血，奶黃色、橙黃色、檸檬色、白色〔脂溶性色素〕菌落特征：菌落相對較小，2.5～6.0mm，取決于不同菌株，通常不產生色素，某些菌株產生黏液性常黏附在瓊脂外表菌落特征：菌落5～8mm大小，完整，有光澤，不透明、光滑，比前面提到菌種菌落較凸起，約一半菌株產色素，奶油、黃-橙色。培養特性15整理課件頭葡萄球菌孔氏葡萄木糖葡萄16整理課件金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌小、黃色菌落；鏡下呈四聯、八疊排列細菌

No中等大小、黃或灰白，β溶血或不溶血的菌落

API或上機

報微球菌屬

葡萄糖發酵報告凝固陰性葡萄球菌或API或上機+Staphaurex膠乳凝集葡萄球菌微球菌屬

－24hβ溶血+

－

－+

G+球菌觸酶+

上機主要病原菌：金黃色葡萄球菌其他：膿腫和嚴重傷口感染中分離的路鄧葡萄球菌；多次血培養中分離的凝固酶陰性葡萄球菌葡萄球菌17整理課件鏈球菌屬18整理課件鏈球菌屬概述鏈球菌屬〔Streptococcus〕是一群觸酶實驗陰性、呈鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，廣泛存在于自然界和人及動物糞便和健康人鼻咽部，可引起各種化膿性炎癥、猩紅熱、丹毒、新生兒敗血癥、腦膜炎、產褥熱以及鏈球菌變態反響性疾病等該菌屬種類繁多，目前臨床上仍沿用Lancefield血清學方法分為A、B、C、D、E、F、G群，或根據其在血平板上的溶血現象進行分類〔β溶血或完全溶血、α溶血或草綠色溶血、γ溶血或不溶血〕19整理課件

根據溶血現象分類

⑴α型溶血性鏈球菌

菌落周圍有不透明溶血環。多為條件性致病菌。⑵β型溶血性鏈球菌

菌落周圍形成完全透明的無色的溶血環。致病力強。⑶γ型鏈球菌

不產生溶血素，菌落周圍無溶血環，也稱為不溶血性鏈球菌。無致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾引起感染。20整理課件形態與染色球形或卵圓形，直徑0.6-1.0um，呈鏈狀排列，短者2-8個細菌組成，長者有20-30個細菌組成。局部幼齡培養物可見到透明質酸形成的莢膜。無芽孢，無鞭毛，革蘭染色陽性。21整理課件肺炎鏈球菌菌落特征：生長在血瓊脂平板或哥倫比亞血平板上的菌落圓形，外表光滑、灰白色、邊緣整齊、半透明，開始扁平以后中心塌陷，呈臍窩狀，具體呈矛頭狀成雙排列。該菌Optochin敏感，膽汁溶菌試驗陽性。22整理課件臍窩狀菌落粘液狀菌落23整理課件原理：Optochin〔乙基氫化去甲奎寧的商品名〕可干擾肺炎鏈球菌葉酸的生物合成，抑制該菌的生長故肺炎鏈球菌對其敏感，而其他鏈球菌對其耐藥。Optochin試驗抑菌圈的直徑≥14mm為陽性Optochin敏感試驗24整理課件臨床標本培養后混雜在口腔正常菌群中的化膿鏈球菌化膿性鏈球菌25整理課件桿菌肽〔Bacitracin〕試驗操作：K-B法貼桿菌肽紙片〔直徑6mm，0.04U/片〕，常規培養18-24h結果判讀：抑菌圈>10mm敏感。無乳鏈球菌金葡菌原理：細菌具有“CAMP〞因子，能促進葡萄球菌β溶血素的活性，使兩種細菌在劃線處呈現箭頭形透明溶血區。操作：血平板上待測菌與金葡菌垂直劃線，劃線之間留出0.5-1cm,不能相接。CAMP試驗26整理課件馬鏈球菌β溶血無乳鏈球菌27整理課件血清分群診斷：A、B、C、D、F、G28整理課件耐藥G+球菌觸酶A群鏈球菌桿菌肽乳膠凝集或CAMPBAP溶血

γ

β

α上機Optochin試驗肺炎鏈球菌上機敏感敏感陽性B群鏈球菌其他上機七葉苷：－或＋6.5％Nacl：－

－G+矛頭狀雙球菌、臍窩狀菌落鏈球菌屬29整理課件腸球菌屬30整理課件腸球菌屬概述腸球菌屬是一組主要存在于人類或動物腸道、具有共同生化特征的革蘭陽性球菌，歸屬倆球菌科。主要包括：糞腸球菌、屎腸球菌、鳥腸球菌、鉛黃腸球菌等。通常為Lancefield血清D群。1989年，依據Facklam和Collins的分類，腸球菌屬內包括十二種及一個變異種。它們是：糞腸球菌〔E.faecalis〕屎腸球菌〔E.faecium)鳥腸球菌(E.avium)酪黃腸球菌(E.casseliflavus)堅忍腸球菌(E.durans)雞腸球菌E.galinarum)芒地腸球菌(E.mundii)惡臭腸球菌(E.maladoratum)希拉腸球菌(E.hirae)孤立腸球菌〔E.solitarius〕棉子糖腸球菌(E.raffinosus)假鳥腸球菌(E.pseudoavium)糞腸球變異株(E.faecalisvar)。31整理課件形態與染色腸球菌屬的細菌為革蘭氏陽性球菌，多數菌種成雙或呈短鏈狀排列；一般無芽孢，無莢膜，少數菌種有鞭毛，陳舊培養物或在厭氧狀態下有時呈革蘭氏陰性。32整理課件生化反響膽汁七葉苷試驗〔+〕6.