刺五加對抑郁癥大鼠行為學的影響

抑郁是最常見的精神障礙，主要表現為抑郁、精神障礙和運動緩慢、自發和自我控制和自殺。慢性休克可以誘導抑郁。臨床資料顯示刺五加在抑郁癥治療中有一定作用,但其對各種抑郁癥狀的作用效果尚不清楚。本實驗通過觀察刺五加對大鼠強迫游泳運動時間及慢性溫和性不可預知應激(chronicunpredictablemildstress,CUMS)結合孤養的抑郁模型大鼠糖水偏愛度、體重增長和行為學的影響,進一步探討刺五加的作用效果,并與鹽酸氯丙咪嗪和兩藥聯用的抗抑郁作用效果進行比較,為臨床針對不同癥狀選擇用藥提供一定的理論依據。1材料和方法1.1材料表面1.1.1動物健康SD雄性大鼠(清潔級)90只,體重200～230g,購于浙江省實驗動物中心。1.1.2懸濁液的溶解刺五加浸膏(黑龍江新醫圣制藥有限責任公司,國藥準字Z23020376),用水溶解為濃度125mg/ml的懸濁液;鹽酸氯丙咪嗪(上海信誼九福藥業有限公司,批號070601),粉碎后用水溶解為濃度7.5mg/ml的懸濁液。1.2方法1.2.1刺五加浸膏多次給藥對大鼠的安全性評價參照文獻方法,將36只大鼠隨機分為正常對照組(NC)、空白對照組(BC)和刺五加浸膏灌服組I、II、III、IV組(GI、II、III、IV組),每組6只,NC組不給藥,BC組灌服生理鹽水,GI、II、III、IV灌服刺五加浸膏的劑量依次為100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg,連續9d,于灌服的第1、3、5、7、9天將大鼠放入高60cm,直徑35cm,水深30cm的量筒,觀察其5min內水面累計不動時間。1.2.2應激刺激試驗(1)大鼠適應性飼養一周后進行Open-Field測試,剔除水平運動次數加垂直運動次數不足40次或超過120次的大鼠,將48只大鼠隨機分為正常對照組(NC)、空白對照組(BC)、實驗對照組(EC)、刺五加浸膏組(AS)、鹽酸氯丙咪嗪組(CH)及刺五加浸膏+鹽酸氯丙咪嗪組(A+C),每組8只。(2)采用CUMS結合孤養方法造模,參照文獻并略加改進。NC組大鼠在安靜、室溫20～22℃、自然光照、自由進食和進水的條件下每籠4只飼養,不予任何刺激。其余各組每籠1只飼養,接受以下各種不同的應激刺激:強迫游泳(12℃,5min)、夾尾(1min)、禁水(24h)、禁食(24h)、鼠籠傾斜45°(24h)、溫箱(45℃,5min)、搖晃(3Hz/s,15min),7d為一組,順序隨機,每天1種,連續21d。(3)除NC和BC組不灌服任何物質外,從造模的第8天開始,于每次應激刺激前30min,EC組灌服生理鹽水(1ml/只),AS組灌服刺五加浸膏(600mg/kg),CH組灌服鹽酸氯丙咪嗪(20mg/kg),A+C組灌服刺五加浸膏+鹽酸氯丙咪嗪(600mg/kg+20mg/kg),連續28d。(4)訓練大鼠適應含糖飲水,禁食禁水24h后采用雙瓶實驗進行蔗糖水測試。分別于造模前、應激刺激結束后及給藥完成后,測試2h大鼠液體消耗,計算糖水偏愛度(糖水偏愛度=糖水消耗/總液體消耗×100%)。(5)采用不透明,周壁、底面為黑色材料制成的敞箱裝置(底面邊長100cm用白線劃分為面積相等的25塊,高40cm)。每隔7d,于上午8∶30～12∶00之間,將大鼠置于中心方格內,觀察其5min內中央格停留時間、后肢直立次數(兩前爪騰空或攀附板壁)、穿越格數(四爪均進入方格)、清潔運動次數,結束后測定體重。1.3t檢驗所有數據以均數±標準差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,配對t檢驗,由SPSS11.5系統完成,Origin7.0統計軟件對數據作圖。2結果2.1兩組小鼠血清內時間的比較除GI組外,其他各組大鼠灌服刺五加5d后5min內水面停留不動時間與NC組相比都有不同程度的減少。與NC組相比,GIV組于第5天開始即顯著減少(P<0.05),GII、III兩組從第7天開始顯著減少(P<0.05),BC組沒有顯著差異(圖1)。2.2兩組as組和b組的血壓比較各組大鼠在造模前兩天糖水偏愛度均沒有顯著差異(P>0.05);與NC組相比,BC組和EC組在第21天和第35天明顯降低(P<0.01);AS組、CH組和A+C組在第21天偏低(P<0.05),在第35天恢復(P>0.05,表1)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3刺五加對抑郁大鼠的手術影響2.3.1高水平差異檢驗與NC組相比,各組在第8天即延長并存在顯著差異(P<0.05),BC組第22天達最大后維持高水平,AS組第15天達最大后逐漸縮短但仍存在顯著差異(P<0.05),CH組和A+C組第15天達最大后逐漸縮短,A+C組在第28和36天沒有顯著差異(P>0.05),CH組在第36天沒有顯著差異(P>0.05,圖2A)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3.2as組和a+c組第32天達最小后維持水平與NC組相比,各組在第8天即減少并存在顯著差異(P<0.05),BC組第22天達最小后維持低水平,AS組第15天達最小后逐漸增加至第36天恢復(P>0.05),CH組和A+C組在第8天后逐漸增加至第36天恢復(P>0.05,圖2B)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3.3as組和a+c組的平均變化及差異與NC組相比,各組在第8天即減少并存在顯著差異(P<0.05),BC組第22天達最小后維持低水平,AS組第22天達最小后逐漸增加至第36天仍存在顯著差異(P<0.05),CH組和A+C組在第8天后即開始增加,至第36天,A+C組恢復(P>0.05),CH組仍未完全恢復(P<0.05,圖2C)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3.4組as組和a+c組的后完全恢復與NC組相比,各組在第8天開始即減少并存在顯著差異(P<0.05),BC組第15天達最小后維持低水平,AS組第15天達最小后逐漸增加至第28天和第36天恢復(P>0.05),CH組和A+C組第15天達最小后逐漸增加,至第36天,A+C組恢復(P>0.05),CH組仍未完全恢復(P<0.05,圖2D)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.4各組第二周和第二周衰減周對比各組大鼠在第一周沒有顯著差異(P>0.05);與NC組相比,BC組第二周開始明顯減慢并始終存在顯著差異(P<0.05),AS組、CH組和A+C組第二周減慢并存在顯著差異(P<0.05),其他各周無顯著差異(P>0.05,圖2E)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。3對抑郁癥患者行為特征的影響強迫游泳試驗屬行為絕望模型,常用于抗抑郁劑的快速篩選。本實驗中我們首先應用了該模型,對刺五加作為抗抑郁藥物進行初步篩選。實驗結果顯示,經過連續9d的強迫游泳,NC組和BC組大鼠5min內水面停留不動時間明顯延長,灌服200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg刺五加浸膏組動物則明顯縮短,以600mg/kg起效最快。由Willner等首先提出的CUMS模型是抗抑郁藥物的篩選和抑郁癥病理生理研究較為理想的模型之一。本實驗中我們采用CUMS+孤養方式建立了抑郁模型,采用雙瓶實驗測量液體消耗,曠場實驗測試行為學改變。結果表明,抑郁模型大鼠(BC組和EC組),造模期間總液體消耗無明顯變化,1%蔗糖水偏愛度第21天顯著下降至第35天持續處于低水平;造模第8天后肢直立次數、穿越格數、清潔運動次數均顯著減少,中央格停留時間顯著增加,至第36天(造模結束后2周末)仍保持這種行為學改變;抗抑郁劑鹽酸氯丙咪嗪治療4周后(第36天)1%蔗糖水偏愛度回升到正常水平,治療兩周后(第21天)行為學各項指標均有所恢復,治療4周(第36天)多數恢復正常水平。結果顯示,該模型不僅反映了動物對幸福事件反應能力的下降、活動能力下降和興趣喪失與抑郁癥臨床表現中的精神運動性阻抑癥狀相似,而且這種抑郁狀態可保持較長時間并可為抗抑郁劑改善。同時也表明該模型符合相關國際標準,可用于研究抑郁癥的發病機制和抗抑郁劑藥理作用等相關研究。刺五加浸膏是刺五加粉乙醇濃縮提取物。臨床研究證實刺五加與傳統的抗抑郁藥丙咪嗪、氟西汀等一樣,有助于改善抑郁癥患者的心境和情緒,且副反應少,更為安全有效。本研究結果顯示,AS組較CH組模型大鼠糖水偏愛度和穿越格數的恢復無明顯差異,中央格停留時間和垂直運動次數的恢復略差,清潔運動次數恢復略好;A+C組大鼠的中央格停留時間、穿越格數和清潔運動次數的恢復優于單獨使用鹽酸氯丙咪嗪,中央格停留時間和穿越格數的改善優于單獨使用刺五加,其他無差異。目前,國外大多數學者采用液體消耗實驗中糖水偏愛度顯著降低作為測量快感缺乏的客觀指標,Open-field測試中的穿越方格數目減少反映動物活動度的降低,后肢直立次數減少和中央格停留時間延長反映動物對新鮮環境的好奇程度降低,清潔動作次數減少反映動物對周圍環境的要求及對自身的關注下降。我們認為:單獨和聯合使用藥物在改善抑郁癥的核心