ICS97.220.10Y55DB43湖南省地方標準DB43/TXXXX-2023醬腌菜咸胚中亞硝酸鹽的測定頂空-氣相色譜法Determinationofnitriteinpickleembryo,Headspace-Gaschromatography(征求意見稿)湖南省市場監督管理局發布20湖南省市場監督管理局發布2023-XX-XX實施2023-XX-XX發布目次TOC\o"1-1"\h前言 II1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器設備 27分析步驟 38分析結果的表述 49精密度 410其他 4附錄A（資料性） 5前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由湖南省工業和信息化廳提出。本文件由湖南省食品標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：湖南省產商品質量檢驗研究院、岳陽市檢驗檢測中心、懷化市檢驗檢測中心。本標準主要起草人：曾小明、吳海智、袁列江、上官佳、蘇家佑、程孟雅、何浩、朱禮、朱明揚、張鵬斐。醬腌菜咸胚中亞硝酸鹽的測定頂空-氣相色譜法范圍本文件規定了醬腌菜咸胚中亞硝酸鹽的測定方法。本文件適用于頂空-氣相色譜法測定醬腌菜咸胚中亞硝酸鹽。規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.33食品安全國家標準食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理在酸性條件下，環已基氨基磺酸鈉和亞硝酸鈉在酸性條件下反應生成環己醇，環己醇在酸性條件下又繼續與亞硝酸鈉發生酯化反應生成環己烯，環己烯在常溫下成氣態，采用頂空氣相進樣系統進行定量檢測。根據環己烯色譜響應值與亞硝酸鹽濃度成正比，計算出醬腌菜咸胚中亞硝酸鹽含量。試劑與材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的一級水。5.1試劑5.1.1亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6·3H2O]。5.1.2乙酸鋅[Zn(CH3COO)2·2H2O]。5.1.3冰乙酸(CH3COOH)。5.1.4硼酸鈉(Na2B4O7·10H2O)。5.1.5環己基氨基磺酸鈉（C6H11NHSO3Na）。5.1.6濃硫酸（H?SO?）。5.2試劑配制5.2.1亞鐵氰化鉀溶液(106g/L)：稱取106.0g亞鐵氰化鉀，用水溶解，并稀釋至1000mL。5.2.2乙酸鋅溶液(220g/L)：稱取220.0g乙酸鋅,先加30mL冰乙酸溶解，用水稀釋至1000mL。5.2.3飽和硼砂溶液(50g/L)：稱取5.0g硼酸鈉,溶于100mL熱水中，冷卻后備用。5.2.4環己基氨基磺酸鈉溶液(10mg/mL)：稱取5.0g環己基氨基磺酸鈉，用水溶解，并稀釋至500mL。5.2.5硫酸溶液（100g/L）：量取27mL濃硫酸小心緩緩加入400mL水中，后加水至500mL。5.3標準品亞硝酸鈉(NaNO2，CAS號:7632-00-0)：基準試劑，或采用具有標準物質證書的亞硝酸鹽標準溶液。5.4標準溶液配制5.4.1亞硝酸鈉標準儲備溶液（200ug/ml）：以亞硝酸鈉計):準確稱取0.1000g于110℃~120℃干燥恒重的亞硝酸鈉，加水溶解，移入500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。5.4.2亞硝酸鈉標準使用液A(1.0ug/mL)：臨用前，吸取2.50mL亞硝酸鈉標準儲備溶液，置于500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。5.4.3亞硝酸鈉標準使用液B(0.05ug/mL)：臨用前，吸取5.00mL亞硝酸鈉標準溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。儀器和設備6.1氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器(FID)。6.2自動頂空進樣器。6.3頂空進樣瓶：20ml。6.4分析天平：感量0.1mg。6.5渦旋儀。6.6容量瓶：10mL、50mL和100mL6.7恒溫水浴鍋。6.8恒溫干燥箱。6.9移液器或移液管：1mL和5mL。7分析步驟7.1樣品制備取適量的樣品研磨成均勻的勻漿狀。為避免水分損失，研磨過程中應避免產生過多的熱量。7.2提取稱取3g(精確至0.001g)勻漿試樣，置于250mL具塞錐形瓶中，加5mL50g/L飽和硼砂溶液，加入70℃左右的水約60mL，混勻，于沸水浴中加熱15min，取出置冷水浴中冷卻，并放置至室溫。定量轉移上述提取液至100mL容量瓶中，加入2mL106g/L亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入2mL220g/L乙酸鋅溶液，搖勻，以沉淀蛋白質。加水至刻度，搖勻，放置30min，除去上層脂肪，上清液用濾紙過濾，棄去初濾液30mL，濾液備用。7.3測定條件7.3.1頂空進樣器條件頂空進樣器測定參考條件如下：恒溫爐溫度50.0℃，樣品流路溫度90.0℃，傳輸線溫度150.0℃。GC循環時間14min，樣品瓶恒溫時間30min。7.3.2氣相色譜參考條件a）色譜柱：石英毛細管柱(10%二甲基聚硅氧烷)：(30m×0.32mm×0.50um)或等效柱。b）柱溫升溫程序：初溫80℃保持1min，40℃/min升溫至100℃保持2min，40℃/min升溫至200℃保持4min，共10min。c）進樣口：色譜柱流量2.0mL/min，分流比20∶1。d）檢測器溫度：300℃。e）載氣：高純氮氣，尾吹氣流量30mL/min。f）氫氣：40mL/min；空氣：200mL/min。7.4標準工作曲線繪制向10個頂空瓶中分別加入0.00mL、0.30mL、0.40mL、1.00mL、2.00mL標準使用液B和0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL標準使用液A（相當于0、0.015、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0、2.0、3.0亞硝酸鈉）補齊水至5mL，加入1.0mL10mg/mL環己基氨基磺酸鈉溶液，混勻，放置2min，加入1.0mL100g/L硫酸溶液，迅速壓緊瓶蓋，渦旋儀充分混勻（混勻過程中溶液不能接觸到密封墊，如果有接觸，需重新配置），上機。以亞硝酸鈉與環己基氨基磺酸鈉的衍生產物環己烯，作為目標物質，繪制標準曲線。亞硝酸鈉標準品的氣相色譜圖參見附錄A中的圖A.1.7.5測定吸取5.00mL上述濾液于20mL頂空進樣瓶中，以下按7.4自“向10個頂空瓶中分別加入0.00mL、0.30mL、0.40mL、1.00mL、2.00mL……”起操作。7.6空白試驗除不稱取試樣外，均按照上述步驟進行。8分析結果的表述試樣中亞硝酸鹽的含量按式（1）計算：X=Cx100mx5………式中：X———試樣中亞硝酸鈉含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；C———測定用樣液中亞硝酸鈉含量，單位為微克(ug)；m———試樣質量,單位為克(g)；5———測定用樣液體積,單位為毫升(mL)；100———試樣處