動(dòng)物細(xì)胞工程單克隆抗體制備技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)：其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)回顧：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動(dòng)物細(xì)胞工程(1).動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(3).動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)(4).單克隆抗體制備(2).細(xì)胞核、胚胎移植技術(shù)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)部分細(xì)胞“癌變”，無(wú)限傳代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動(dòng)物體50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)去掉組織間蛋白質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中幾個(gè)重要的概念（1）細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上（單層）。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。（2）接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制：原代培養(yǎng)(primaryculture)定義：指將要培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞取出后，先用胰蛋白酶等使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，然后配制成一定濃度的細(xì)胞懸液，再將該懸液放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。過(guò)程：從動(dòng)物機(jī)體中取出組織

剪碎加胰蛋白酶細(xì)胞游離制成細(xì)胞懸液將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)

培養(yǎng)（1--2天換一次培養(yǎng)液）

細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)

長(zhǎng)成單層細(xì)胞定義：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)停止，這時(shí)如果要使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，就要及時(shí)用胰蛋白酶等，使細(xì)胞從瓶壁上解離下來(lái)，然后加入新的培養(yǎng)液，將細(xì)胞分離稀釋?zhuān)脑囵B(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)(subculture)

細(xì)胞株：

從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生變化。

細(xì)胞系：傳到40-50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制的傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：

細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有毒物質(zhì)沒(méi)有防御能力能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等（4）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)（3）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮（5）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)（2）作為基因工程的受體細(xì)胞獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清促生長(zhǎng)因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目6、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較卵細(xì)胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵細(xì)胞妊娠多莉羊的培育過(guò)程細(xì)胞核移植材料1:1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人—鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？人-鼠(想像圖)滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理法、化學(xué)法滅活的病毒物理法化學(xué)法（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較2、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法3、動(dòng)物細(xì)胞融合的用途制備單克隆抗體物理法化學(xué)法生物法思考：（1）請(qǐng)概括單克隆抗體的概念（2）根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家柯勒設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案，思考實(shí)驗(yàn)過(guò)程與原理？（3）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？單克隆抗體制備過(guò)程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò)兩次篩選？單克隆抗體提出問(wèn)題：長(zhǎng)期以來(lái)，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。1.概括單克隆抗體的概念單：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞克隆:無(wú)性繁殖抗體:化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)單克隆抗體的制備實(shí)驗(yàn)?zāi)康?制備單克隆抗體實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)材料：小白鼠實(shí)驗(yàn)器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。實(shí)驗(yàn)過(guò)程：？2.根據(jù)阿根廷科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家柯勒設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案，回答下列問(wèn)題：B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能無(wú)限增殖。單克隆抗體的制備抗原小鼠B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞融合，篩選細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)單克隆抗體3、單