研究背景心肌細(xì)胞收縮/舒張功能與心肌細(xì)胞內(nèi)鈣循環(huán)密切相關(guān)心衰時(shí)心肌細(xì)胞鈣離子循環(huán)異常是心肌舒縮功能障礙的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)穩(wěn)心顆粒抗心律失常時(shí)能改善心衰患者和動(dòng)物的心功能穩(wěn)心顆粒與西藥聯(lián)合應(yīng)用治療CHF具有協(xié)同增強(qiáng)心功能的作用研究背景心肌細(xì)胞收縮/舒張功能與心肌細(xì)胞內(nèi)鈣循環(huán)密切相關(guān)Bers(2002)Nature415:198-205鈣循環(huán)Bers(2002)Nature415:198-20通過(guò)左心容量和壓力超負(fù)荷方法制作家兔心衰模型及穩(wěn)心顆粒對(duì)心衰家兔心功能的作用探討穩(wěn)心顆粒對(duì)心衰時(shí)鈣調(diào)控蛋白的影響研究目的通過(guò)左心容量和壓力超負(fù)荷方法制作家兔心衰模型及穩(wěn)心顆粒對(duì)心衰實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

新西蘭大耳白兔，3月齡，雌雄不拘，體重2.0～3.0kg分組假手術(shù)組（shame）8只假手術(shù)穩(wěn)心顆粒組(HF-drug)

8只心衰組(HF)

10只心衰穩(wěn)心顆粒組(HF-drug)

10只

材料和方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物材料和方法主要器材

多道生理記錄儀（中國(guó)四川錦江通用實(shí)業(yè)有限公司）超聲心動(dòng)圖儀（Vivid7，美國(guó)GE公司）基因擴(kuò)增儀（Bioneer，EDC-810)

DNA電泳儀（Bio-RAD，Sub-CellModel96）酶標(biāo)儀（PerKinElmer，Wallac1420）凝膠成像儀（Bio-RAD，UniversalHoodⅡ）

材料和方法主要器材材料和方法材料和方法主要藥品和試劑穩(wěn)心顆粒（山東步長(zhǎng)制藥有限公司）肝素鈉注射液（天津生物化學(xué)制藥有限公司）

鈣調(diào)控蛋白引物（InvitrogenBiot）鈣調(diào)控蛋白一抗（abcam公司）組織總蛋白提取試劑盒（谷歌生物公司）材料和方法主要藥品和試劑穩(wěn)心顆粒心衰動(dòng)物模型制作

新西蘭大耳兔主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全腹主動(dòng)脈縮窄EF<45%LVESD>1.20cm脈壓增大50%心衰動(dòng)物模型制作新西蘭大耳兔主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全腹主動(dòng)脈縮窄E超聲資料左室舒張末內(nèi)徑LVEDD左室收縮末內(nèi)徑LVESD左室舒張末容積LVEDV左室收縮末容積LVESV左室射血分?jǐn)?shù)LVEF左室短軸縮短分?jǐn)?shù)LVFS檢測(cè)指標(biāo)超聲資料檢測(cè)指標(biāo)RT-PCR和Westernblot肌漿網(wǎng)鈣泵SERCA2a雷諾定受體RyR2受磷蛋白PLB鈉鈣交換體NCX基因和蛋白表達(dá)情況檢測(cè)指標(biāo)RT-PCR和Westernblot檢測(cè)指標(biāo)計(jì)量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示采用單因素方差分析所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0分析P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示統(tǒng)計(jì)學(xué)處理穩(wěn)心顆粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0.13

1.31±0.10

1.84±0.08※1.55±0.07﹟LVESD(mm)0.78±0.070.81±0.081.54±0.12※

1.05±0.07﹟LVEDV(ml)4.18±1.074.08±0.80

10.34±1.19※

6.68±0.79﹟

LVESV(ml)1.06±0.271.16±0.31

5.90±0.75※

3.04±0.51﹟

LVEF(%)74.47±2.5074.05±4.19

44.39±2.04※

55.15±2.28﹟

LVFS(%)39.72±2.23

39.49±3.63

20.39±1.01※

26.35±1.28﹟

與假手術(shù)組相比，※P<0.05；與心衰組相比，﹟P<0.05假手術(shù)組（n=8）假手術(shù)穩(wěn)心顆粒組（n=8）心衰組（n=7）心衰穩(wěn)心顆粒組（n=7）

結(jié)果穩(wěn)心顆粒改善心衰家兔的心功能LVEDD(mm)1.30±0穩(wěn)心顆粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS*P<0.05,與假手術(shù)組比較，＃P<0.05,與心衰組比較

結(jié)果穩(wěn)心顆粒能提高心衰家兔的LVEF和LVFS心衰組RyR2mRNA表達(dá)降低,穩(wěn)心顆粒對(duì)RyR2表達(dá)無(wú)影響RyR2β-actin

1.

shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug149bp184bp

12341234*P<0.05

結(jié)果心衰組RyR2mRNA表達(dá)降低,穩(wěn)心顆粒對(duì)RyR2表達(dá)無(wú)影心衰組SERCA2a表達(dá)降低，心衰穩(wěn)心顆粒組

SERCA2a表達(dá)水平上調(diào)

143bp184bpSERCA2aβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug*P<0.05,與假手術(shù)組比較，＃P<0.05,與心衰組比較123

4

1234

結(jié)果心衰組SERCA2a表達(dá)降低，心衰穩(wěn)心顆粒組

SE各組間PLB表達(dá)無(wú)顯差異146bp184bpPLBβ-actin1.shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug

12341234P>0.05

結(jié)果各組間PLB表達(dá)無(wú)顯差異146bp184bpPLBβ-act心衰組NCXmRNA和蛋白水平表達(dá)降低

穩(wěn)心顆粒對(duì)NCX表達(dá)無(wú)影響133bp184bpNCXβ-actin*P<0.05vs假手術(shù)組1.

shame2.shame-drug3.HF4.HF-drug123

41234結(jié)果心衰組NCXmRNA和蛋白水平表達(dá)降低

穩(wěn)心顆粒對(duì)NC本研究采用主動(dòng)脈瓣返流聯(lián)合腹主動(dòng)脈縮窄致左室壓力和容量超負(fù)荷的方法成功制作家兔心衰模型

穩(wěn)心顆粒可增加容量和壓力超負(fù)荷心衰兔的LVEF和LVFS，改善左室收縮功能結(jié)論本研究采用主動(dòng)脈瓣返流聯(lián)合腹主動(dòng)脈縮窄致左室壓力和容量超負(fù)荷結(jié)論穩(wěn)心顆粒改善心衰心功能的機(jī)制SERCA2a表達(dá)↑SR攝鈣能力↑SR鈣容量↑鈣瞬變↑穩(wěn)心顆粒收縮功能↑舒張期Ca2+濃度↓舒張功能↑胞漿Ca2+清除率↑結(jié)論穩(wěn)心顆粒改善心衰心功能的機(jī)制SERCA2aPLB表達(dá)水平不變SERCA表達(dá)水平↑PLB/SERCA2a水平比值↓PLB對(duì)SERCA2a的抑制作用↓SERCA2a功能↑穩(wěn)心顆粒改善心衰心功能的機(jī)制結(jié)論P(yáng)LB表達(dá)水平不變SERCA表達(dá)水平↑PLB/SER 心衰組NCXmRNA和蛋白表達(dá)減少，可能與心衰分期有關(guān)，相關(guān)的機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。結(jié)論 心衰組NCXmRNA和蛋白表達(dá)減少，可能與心衰分期有關(guān)