魚腥草的氣相色譜指紋圖譜研究

2005年版《中國藥典》收錄了鮮草屬于三白草科的東西。我國南方各省均有種植,其中四川、湖北、江蘇、浙江、貴州為其主要產區。魚腥草味辛,性微寒,歸肺經。主要功效為清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋。揮發油是其主要活性成分,已知的有癸酰乙醛(魚腥草素,decanoylacetaldehyde)、甲基正壬酮(2-undecanone)、癸醛(decanal)、龍腦乙酯(borneolacetate)等。在魚腥草的質量評價方面,已有一些藥學工作者進行了研究,如周日寶等以甲基正壬酮的含量作為質量控制的指標;李秀珍、陳碩等建立了魚腥草注射液氣相色譜指紋圖譜,但均未確定指紋峰的歸屬。本研究以魚腥草主產區的樣品為研究對象,在明確魚腥草揮發油成分的基礎上,建立了魚腥草揮發油氣相色譜指紋圖譜,為魚腥草的質量評價提供依據。1白草科植物菜h.cordat-ms用儀美國Finnigan公司TRACEGC2000,FID檢測器,GS2010色譜數據工作站。美國Finnigan公司TRACEGC-MS聯用儀。魚腥草飲片分別購于四川成都、貴州貴陽、北京、湖北武漢、浙江杭州和金華、河南鄭州和西峽等地,經本所何希榮主管技師鑒定為三白草科植物蕺菜H.cordata的全草(表1)。醋酸乙酯為分析純試劑。2方法和結果2.1油組分的確定2.1.1揮發油的提取取魚腥草飲片60g,置圓底燒瓶中,加入蒸餾水360mL,按《中國藥典》2005年版一部附錄揮發油測定法(Ⅰ法)提取揮發油6h,分取油層,以醋酸乙酯定容至0.1mL作為供試品溶液。2.1.2帶氣流場及離子源溫度DB-5石英毛細管色譜柱(0.25mm×30m,0.25μm);程序升溫:初始溫度50℃,以3℃·min-1升至220℃,保持15min;進樣口和檢測器溫度240℃;載氣為氦氣;載氣流速1.0mL·min-1;分流比20:1。EI電離源,70eV;離子源溫度200℃;質量范圍m/z:35～420。2.1.3油組分的確定對所得的魚腥草揮發油的GC-MS圖譜,根據NIST標準質譜圖庫進行檢索,并參考有關文獻,對各分離組分進行峰的確認。2.2hp指紋圖的構建2.2.1分液過濾器d分離器彈性石英毛細管色譜柱se-54(0.32mm×25m);FID檢測器;程序升溫:初始溫度50℃,以3℃·min-1升至220℃,保持10min;進樣口和檢測器溫度240℃;載氣為氮氣;流速為1.0mL·min-1;分流比20:1;進樣量0.2μL(圖1)。2.2.2gc-ms圖譜法文獻報道,甲基正壬酮是魚腥草揮發油中的有效成分,從GC-MS圖譜看,甲基正壬酮的相對含量較大,且與相鄰峰分離較好,故定為參照峰,以其為基準計算其他各峰的相對保留時間。2.2.3年生魚腥草樣品穩定性試驗①精密度試驗:取魚腥草樣品,按2.1.1項下方法制備供試品溶液,按2.2.1項下測定條件測定,連續進樣5次,所得各共有峰相對保留時間的RSD均小于2.3%,共有峰相對峰面積的RSD多數小于15%。②穩定性試驗:取魚腥草樣品,按2.1.1項下方法制備供試品溶液,按2.2.1項下測定條件于2,4,6,24,72h分別測定。結果表明,各共有峰相對保留時間的RSD均小于2.4%,共有峰相對峰面積的RSD多數小于15%,說明樣品在72h穩定。③重復性試驗:取魚腥草樣品五份,按2.1.1項下方法制備供試品溶液,按2.2.1項下測定條件測定,得到各共有峰相對保留時間的RSD均小于2.3%。2.2.4指紋圖譜測定將收集的12批樣品,分別按2.1.1項下方法制備供試品溶液,按2.2.1項下測定條件測定,記錄指紋圖譜。GC圖譜有15個共有峰,以甲基正壬酮為參照物,計算各共有色譜峰的相對保留時間和相對峰面積(表2,3)。2.2.5--甲基-5-酰甲基-4-酯,5,5,5-四氫-5-羥基苯基5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-四氫-5-羥基-5-甲基-5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-四氫-3-四氫-3-四氫-3-羥基-5---5---5---5---5---5---5---5---5---5---5-----5------------5------------------5------5-------5---5---5-----5------5------5-----------5------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------以共有色譜峰各相對保留時間的均值建立了魚腥草揮發油氣相色譜指紋圖譜:(1)αt-蒎烯(0.465±0.001),(2)莰烯(0.483±0.001),(3)龍腦(0.790±0.002),(4)(R)-(-)-p-孟-1-烯-4-醇(0.806±0.001),(5)癸醛(0.850±0.002),(6)龍腦乙酯(0.962±0.004),(7)甲基正壬酮(1),(8)癸酸(1.148±0.011),(9)蓖麻油酸(1.277±0.004),(10)癸酰乙醛(1.313±0.004),(11)(-)-匙葉桉油烯醇(1.417±0.008),(12)石竹烯氧化物(1.445±0.003),(13)六氫法呢基丙酮(1.789±0.004),(14)棕櫚酸(1.936±0.005),(15)植醇(2.108±0.006)。3樣品及質譜分析作者對購自北京同仁堂和貴州的魚腥草揮發油進行了GC-MS檢測,對色譜峰進行了確定,所測魚腥草中主要成分與文獻報道基本一致,有龍腦、龍腦乙酯、甲基正壬酮、癸酰乙醛、癸酸和石竹烯氧化物等。此次收集的12個樣品來自魚腥草的主要產區,從相對保留時間看,各產地魚腥草氣相色譜指紋圖譜相似,有15個共有峰可用于魚腥草的鑒別。不同產地的魚腥草在甲基正壬酮和癸酸的含量上有較大的差異,如四川產甲基正壬酮的含量高;而貴州、浙江、河南西峽等癸酸比甲基正壬酮的含量高。作者還對貴陽產的新鮮魚腥草及其干燥后1個月的樣品,按本方法進行測定,根據NI