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文檔簡介

HeLa細胞的傳代培養

教學目標1.理解細胞傳代培養的概念和原理2.能按照操作規程進行細胞傳代培養的操作

細胞傳代培養的概念概念：指細胞從一個培養瓶以1:2或其他比率轉移，接種到另外的培養瓶中的培養，也叫做繼代培養。HeLa細胞是一種貼壁生長的細胞，在進行傳代時通常是采用胰蛋白酶消化，把細胞分散成單細胞再傳代。

培養細胞一代生長過程實驗前準備

1、材料：HeLa細胞2、試劑：0.25％胰蛋白酶、1640培養基〔含10％小牛血清〕、PBS實驗前準備超凈工作臺CO2培養箱倒置顯微鏡3.儀器設備〔1〕細胞培養用的器材和試劑滅菌；〔2〕超凈工作臺準備〔75%酒精擦拭臺面，紫外燈照射30min〕；〔3〕試劑預熱〔37℃水浴鍋〕；〔4〕操作人員準備〔75%酒精擦拭雙手等〕。4.實驗前準備工作實驗前準備細胞生存環境：無菌、無毒細胞傳代操作1、倒去培養瓶中的舊培養液，參加2-3mL預熱的PBS液，輕輕振蕩漂洗細胞，以除去懸浮在細胞外表的碎片。吸除培養液細胞傳代操作

2、胰蛋白酶消化：參加適量0.25％胰蛋白酶消化液，37℃消化，注意消化液的量以蓋住細胞最好。

加消化液細胞傳代操作

3、蓋緊瓶蓋，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將消化液棄去，參加適量預熱后的培養液終止消化。〔一般消化時間約為2-3分鐘〕。

消化前細胞消化后細胞〔適度狀態〕吸除消化液細胞傳代操作

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液。吹打成細胞懸液分裝細胞傳代操作

5、以1：2或1：3進行分裝，補充新鮮培養基，并在培養瓶上做好標記，注明代號、日期，輕輕搖勻，置于37℃CO2培養箱培養〔如果瓶蓋不帶通氣孔，那么需將瓶蓋旋開半圈〕。24h后即可對細胞的生長情況進行觀察記錄。當細胞長成單層后即可用于接種或凍存。實驗操作本卷須知1.用電平安2.操作儀器平安3.及時標準記錄HeLa細胞傳代培養實驗原理細胞在培養瓶長成致密單層后，已根本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代〔再培養〕。

傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同

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