三聚氰胺試紙條快速測定原理一儀器和設備二結果判定四操作方法三注意事項五一、原理

三聚氰胺膠體金速測卡的檢測原理是競爭性免疫層析。將著色標記物與待測抗原的特異性抗體(Ab1)相偶聯,沉積在結合區。而檢測區處固相化的是待測抗原或待測抗原的類似物。若樣品中含有待測抗原,則樣品中的抗原和帶有標記物的Ab1形成Ag-Ab1復合物。隨后在通過固相化有待測抗原或其類似物的檢測區時,由于競爭抑制,不再發生反應,檢測線處不顯色;樣品繼續前移,Ag-Ab1復合物被固相化在質控線處的抗Ab1抗體(Ab2)所結合,形成Ab1-Ag-Ab2復合物,使質控線顯色。高效液相色譜法二、儀器和設備三聚氰胺膠體金速測卡等高效液相色譜法三、操作方法高效液相色譜法1．將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復至室溫。2．將試紙卡水平放置，用滴管向試紙卡孔緩慢逐滴加入3滴不含氣泡的待測液3．5分鐘判斷結果，10分鐘后的結果僅作參考。四、結果判斷高效液相色譜法陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。陽性：C線顯色，T線不顯色，判為陽性。無效：C線不顯色，無論T線是否顯色，該試紙均判為無效。圖1結果顯示圖五、注意事項高效液相色譜法1．如果購買時發現過期，破損，污染，無效的產品，請在購買處進行更換。2．所有試紙啟封后1小時內使用。高效液相色譜法

乳制品中三聚氰胺的測定原理一試劑和材料二分析步驟四儀器和設備三高效液相色譜測定五一、原理

試樣用三氯乙酸溶液-乙腈提取，經陽離子交換固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜測定，外標法測定。高效液相色譜法二、試劑和材料除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的一級水。甲醇：色譜純乙腈：色譜純氨水：含量為25％～28％三氯乙酸檸檬酸辛烷磺酸鈉：色譜純甲醇水溶液：準確量取50mL甲醇和50mL水，混勻后備用。三氯乙酸溶液（1％）：準確稱取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。高效液相色譜法二、試劑和材料高效液相色譜法氨化甲醇溶液（5％）：準確量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻后備用。離子對試劑緩沖液：準確稱取2.10g檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉，加入約980mL水溶解，調節PH至3.0后，定容至1L備用。三聚氰胺標品：CAS08-78-01，純度大于99.0％三聚氰胺標準儲備液：準確稱取100mg（精確到0.1mg）三聚氰胺標準品與100ml容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度配制成濃度為1mg/mL的標準儲備液，于4℃避光保存。陽離子交換固相萃取柱：基質為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，填料質量為60mg，體積為3mL，或相當者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。定性濾紙海砂：化學純，粒度0.65mm～0.85mm，二氧化硅（SiO2）含量為99％微孔濾紙：0.2微米，有機相氨氣：純度大于等于99.999％三、儀器和設備高效液相色譜（HPLC）儀：配有紫外線檢測器或二極管陣列檢測器分析天平：感量為0.0001g和0.01g離心機：轉速不低于4000r/min超聲波水域固相萃取裝置氨氣吹干儀渦旋混合器具塞塑料離心管：50mL研體高效液相色譜法四、分析步驟高效液相色譜法提取液態奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等

稱取2g（精確至0.01g）試樣于50mL具塞塑料離心管，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超聲提取10min,在震蕩提取10min后，以不低于4000r/min。上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL濾液，加入5mL水混勻后做待凈化液。四、分析步驟高效液相色譜法提取奶酪、奶油和巧克力等

稱取2g（精確至0.01g）試樣于研缽中，加入適量海砂（試樣質量的4倍～6倍）研磨成干粉狀，轉移至50mL具塞塑料離心管中，用15mL三氯乙酸溶液分數次清洗研缽，清洗液轉入離心管中，在往離心管中加入5mL乙腈，余下操作同液態奶提取“超聲提取10min加入5mL水混勻后做待凈化液”。

注：若樣品中脂肪含量較高，可以利用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱凈化。四、分析步驟高效液相色譜法凈化

將提取液轉移至固相萃取柱中。一次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液于50℃下用氨氣吹干，殘留物（相當于0.4g樣品）用1mL流動相定容，渦旋混合1min，過微孔濾膜后，供HPLC測定。五、高效液相色譜測定高效液相色譜法HPLC參考條件色譜柱：C8柱，250×4.6[內徑（i.d.）]，5μm或相當者。

C18柱，250×4.6[內徑（i.d.）]，5μm或相當者。流動相：C8柱，離子對試劑緩沖液-乙腈（85+15，體積比），混合。

C18柱，離子對試劑緩沖液-乙腈（90+10，體積比），混合。流速：1.0mL/min柱溫：40℃波長：240nm進樣量:20μL五、高效液相色譜測定高效液相色譜法標準曲線的繪制用流動相將三聚氰胺標準儲備液逐級稀釋得到的濃度為0.8、2、20、40、80μg/ml的標準工作液，濃度由低到高進樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標準曲線回歸方程。基質匹配加標三聚氰胺的樣品HPLC色譜圖參見圖A.1五、高效液相色譜測定高效液相色譜法定量測定待測樣液中三聚氰胺的響應值應在標準曲線線性范圍內，超過線性范圍則應稀釋后再進樣分析。結果計算試樣中三聚氰胺的含量由色譜數據處理軟件或按式（1）計算獲得：

X

試樣中三聚氰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）A

樣液中三聚氰胺的峰面積C

標準溶液中三聚氰胺的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）V

樣液最準定容體積，單位為毫升（mL）A5

標準溶液中三聚氰胺的峰面積m

試樣的質量，單位為克（g）f

稀釋倍數。高效液相色譜法

空白實驗除不稱取樣品