為什么會有“微笑”和“倒微笑”這樣的效果呢？（1） 〃微笑〃是因為你灌膠的時候冷卻不均勻，中間部分冷卻不好，導致凝膠中的分子有不同的遷移率所致。這種情況在較厚的凝膠以及垂直電泳時常常發生?！暗刮⑿Α耙卜Q“皺眉“現象常常是由于垂直電泳時電泳槽的裝置不合適引起的，特別是當凝膠和玻璃板組成的三明治底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會產生這種現象。（2） 書上說出現“微笑”是因為整個膠冷凝的不均勻，中間部分和兩端受熱不一樣而致成了“倒微笑”可能是因為兩端的膠凝的不好，加APS和TEMED后應該混合均勻。（3） 樣品中鹽濃度過高？點樣量太多或每孔點樣量不均勻？電泳電壓不穩定或過高？Western-blot制膠時好多泡泡怎么辦？（1） 首先，玻璃板一定要洗干凈，用洗潔凈洗，沖干凈后再用雙蒸水沖一，晾十。配膠的時候沿管壁緩緩加入各個成分，混勻的時候用于輕輕搖勻，如果用槍吹打時要緩慢且不要打到頭。（2） 配膠時混勻要輕，盡量不產生氣泡，上膠時要快，槍也不打到底。加完分離膠后用雙蒸水封，待其凝固。即使在上膠時液面上有氣泡，加水后也會浮上來。分離膠凝好后，倒掉里面的水，用吸水紙吸干，再加濃縮膠，迅速插梳子。（3） 倒膠的時候，用1ml的槍沿一側緩緩加入，不要打到頭，以免帶入氣泡！（4） 將膠在小燒杯里配好后，將電泳槽略微傾斜，將燒杯的嘴靠在玻璃邊緣，直接倒進去，速度快，而且不容易產生氣泡，不妨試試。（5） 用雙蒸水封時建議用200ul的槍加水，這樣壓力小，以免把膠沖起來?。?） 國產的只能是緩慢加樣，別把氣泡加進去。如果加進去了，小心把整個板在桌上敲敲可以讓氣泡浮上來。（7） 分離膠中的氣泡與插梳子有關，垂直插容易產生氣泡，且不容意排除。將梳子傾斜5-10度插入，即使產生氣泡也可以也可以通過輕輕晃動梳子使氣泡從一側逸出。（8） pinghw還有一個制膠起泡泡的原因，就是配膠的液體全部在四度存放，室溫制膠時由于溫差及凝膠聚合反應放熱的關系，液體中微小的氣泡在凝固的凝膠中也會放大成可見的較大的泡泡，這種情況在夏天室溫較高時更容易出現。避免的方法是將制膠成分中除催化劑外的部分配置后放室溫下靜置一會兒，減小溫差后再加入催化劑制膠。atgc戰友的個人經驗，一些瑣碎的細節，但卻是實驗中可能經常遇到的令人頭痛的問題？（1） 安裝好的制膠裝置，最好先用配置電泳緩沖液的水加滿檢驗一下是否漏水，檢驗確認不漏水的裝置再用于制備凝膠。確認不漏水后，倒出水，然后使其盡量流出，其實殘留的一點水并不影響結果，而且還會使電泳好的凝膠容易剝落下來。漏水的裝置制作的凝膠盡管可以使用，但它會造成電泳時候電流的分流，不但影響電流的效率，而且還會使部分加樣孔的條帶歪曲。（2） 制膠時最好最后加入入?，這樣可以避免偶然情況下不能馬上灌膠而導致膠的聚合，確認所有的東西準備齊全了，再最后加入AP，混合均勻后馬上灌膠。一定要使配膠的幾種溶液混合均勻，這是制得性質均一的凝膠的前提。（3）進口的AP可以很快使膠凝聚。所以，AP的用量最好比書上推薦的用量少點，這樣可以使膠的溶液慢慢聚合，這更有利于形成均勻一致的凝膠。也不會使操作變得手忙腳亂。（4） 有時候，梳子拉出以后，明明看不到加樣孔中有凝膠，但是就是加不進去樣品，這主要是由于梳子與較大的那塊玻璃之間的縫隙中存留的制膠溶液凝聚后形成的很薄的一層凝膠造成的。由于很薄，當梳子拉出后，它就會和玻璃分離，剛好將加樣孔的口封住了，如果用20ul的加樣器加樣的話，這層凝膠很容易將樣品堵在外面，只要將這層凝膠除去，就可以順利加樣了。如果用專門的微量進樣器，不會存在這樣的問題。（5） 薄膜原因可能是由于梳子和slide的厚度不是十分一致，而這可能是無法避免的。除此之外，也有由于拔出梳子時候造成的堵塞現象，個人認為，這樣的堵塞現象可以通過插入梳子時先用水（配置電泳緩沖液的水）濕潤梳子的方法避免，這樣還有利于形成整齊的加樣孔。不管怎么做，一定要等膠完全聚合好了再拉出梳子。如果孔的形狀變化了，扭曲了，肯定會導致條帶不一致，結果不好。（6） wangjun2002274主任的：加樣的時候也是用專門的微量進樣器，是寧波出的，50ul容量，每次都是用20ul的上樣量。以前等膠干后拔出梳子，馬上用水沖洗進樣孔，就是用的那種塑料瓶擠壓沖洗，薄膜就沒有了，注意不要用力過猛，如果膠還沒有完全凝，很可能導致進樣孔不整齊，那么跑出來的條帶就有窄有寬了。.配膠注意一定要將玻璃板洗凈，最后用ddH2O沖洗，將與膠接觸的一面向下傾斜置于干凈的紙巾晾干。分離膠及濃縮膠均可事先配好（除AP及TEMED外），過濾后作為儲存液避光存放于4°C，可至少存放1個月，臨用前取出室溫平衡（否則凝膠過程產生的熱量會使低溫時溶解于儲存液中的氣體析出而導致氣泡，有條件者可真空抽吸3分鐘），加入10%AP（0.7~0.8:100,分離膠濃度越高AP濃度越低，15%的分離膠可用到0.5:100）及TEMED（分離膠用0.4:1000,15%的可用到0.3:1000，濃縮膠用0.8：1000）即可封膠：灌入2/3的分離膠后應立即封膠，膠濃度<10%時可用0.1%的SDS封，濃度>10%時用水飽和的異丁醇或異戊醇，也可以用0.1%的SDS。封膠后切記，勿動。待膠凝后將封膠液倒掉，如用醇封膠需用大量清水及ddH2O沖洗干凈，然后加少量0.1%的SDS，目的是通過降低張力清除殘留水滴。灌好濃縮膠后1h拔除梳子，注意在拔除梳子時宜邊加水邊拔，以免有氣泡進入梳孔使梳孔變形。撥出梳子后用ddH2O沖洗膠孔兩遍以去除殘膠，隨后用0.1%的SDS封膠。若上樣孔有變形，可用適當粗細的針頭撥正；若變形嚴重，可在去除殘膠后用較薄的梳子再次**梳孔后加水拔出。30min后即可上樣，長時間有利于膠結構的形成，因為肉眼觀的膠凝時其內部分子的排列尚未完成。丙烯酰胺和甲叉我是從北京華美買的德國biomol原裝貨，配出來的膠可以提在手里玩，彈性非常好，價格比sigma的便宜許多，1公斤好像是480多人民幣，夠實驗室用好長時間，現在我們實驗室做雙向電泳都用biomol的膠，很好用。Marker我現在用fermantas的SM1811,2微升就很清晰了，蘭州的代理是上海生工。要強調的是垂直電泳緩沖液千萬不能回收用，具體愿因你只需上網查查SDS的原理就知道了。轉移電泳緩沖液可以回收再用兩次。電泳中常出現的一些現象：^條帶呈笑臉狀，原因：凝膠不均勻冷卻，中間冷卻不好.^條帶呈皺眉狀，可能是由于裝置不合適，特別可能是凝膠和玻璃擋板底部有氣泡，或者兩邊聚合不完全.拖尾：樣品溶解不好.紋理（縱向條紋）：樣品中含有不溶性顆粒.條帶偏斜：電極不平衡或者加樣位置偏斜.條帶兩邊擴散：加樣量過多.聚丙烯酰胺凝膠電泳結果不正?，F象和對策：指示劑前沿呈現兩邊向上或向下的現象.向上的"微笑"現象說明凝膠的不均勻冷卻，中間部分冷卻不好，所以導致凝膠中分子有不同的遷移率所致.這種情況在用較厚的凝膠以及垂直電泳中時常發生.向下的"皺眉"現象常常是由于垂直電泳時電泳槽的裝置不合適引起的,特別是當凝膠和玻璃板組成的"三明治"底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會產生這種現象."拖尾"現象是電泳中最常見的現象.這常常是由于樣品溶解不佳引起的，克服的辦法是在加樣前離心，選用合適的樣品緩沖液和凝膠緩沖液，加增溶輔助試劑.另一方法是降低凝膠濃度."紋理"現象常常是由于樣品中不溶顆粒引起的，克服辦法是增加溶解度和離心除去不溶性顆粒.蛋白帶偏斜常常是由于濾紙條或電極放置不平行所引起的，或由于加樣位置偏斜而引起.蛋白帶過寬，與鄰近蛋白泳道的蛋白帶相連，這是由于加樣量太多或加樣孔泄漏引起的.蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的.雖然梯度凝膠可以提高分辨率，但與其他方法相比，常規聚丙烯酰胺凝膠電泳是分辨率較低的方法.為了提高分辨率，不要加過多的樣品，小體積樣品可給出窄帶.加樣后應立即電泳，以防止擴散.選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離.通?？拷把氐牡鞍讕Х直媛什患?，所以應根據分子量與凝膠孔徑的關系,灌制足夠長度的凝膠，以使樣品不會走出前沿.樣品的蛋白水解作用也引起擴散而使分辨率降低.水解作用通常發生在樣品準備的時候，系統中的內源性蛋白酶會水解樣品蛋白，如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發生.電泳中常出現的一些現象：^條帶呈笑臉狀，原因：凝膠不均勻冷卻，中間冷卻不好.^條帶呈皺眉狀，可能是由于裝置不合適，特別可能是凝膠和玻璃擋板底部有氣泡，或者兩邊聚合不完全.拖尾：樣品溶解不好.紋理（縱向條紋）：樣品中含有不溶性顆粒.條帶偏斜：電極不平衡或者加樣位置偏斜.條帶兩邊擴散：加樣量過多.聚丙烯酰胺凝膠電泳結果不正?，F象和對策：指示劑前沿呈現兩邊向上或向下的現象.向上的"微笑”現象說明凝膠的不均勻冷卻，中間部分冷卻不好,所以導致凝膠中分子有不同的遷移率所致.這種情況在用較厚的凝膠以及垂直電泳中時常發生.向下的”皺眉”現象常常是由于垂直電泳時電泳槽的裝置不合適引起的,特別是當凝膠和玻璃板組成的"三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會產生這種現象."拖尾"現象是電泳中最常見的現象.這常常是由于樣品溶解不佳引起的，克服的辦法是在加樣前離心，選用合適的樣品緩沖液和凝膠緩沖液，加增溶輔助試劑.另一方法是降低凝膠濃度."紋理"現象常常是由于樣品中不溶顆粒引起的，克服辦法是增加溶解度和離心除去不溶性顆粒.蛋白帶偏斜常常是由于濾紙條或電極放置不平行所引起的，或由于加樣位置偏斜而引起.蛋白帶過寬，與鄰近蛋白泳道的蛋白帶相連，這是由于加樣量太多或加樣孔泄漏引起的.蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的.雖然梯度凝膠可以提高分辨率，但與其他方法相比，常規聚丙烯酰胺凝膠電泳是