常用的菌種保藏方法主講教師：李蒙123斜面低溫保藏法液體石蠟保藏法沙土保藏法目錄CONTENTS4冷凍干燥保藏法5液氮冷凍保藏法Part01斜面低溫保藏法特點：傳代+低溫保存適用范圍：適合大多數(shù)微生物短期保存，如細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等（實驗室和工廠菌種室常用）保藏期：1-6個月（短期）放線菌、霉菌和有芽孢的細菌一般可保存6個月左右，無芽孢的細菌可保存1個月左右，酵母菌可保存3個月左右。1斜面低溫保藏法操作：將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上；放置于合適溫度下培養(yǎng)一定時間，等待菌充分生長，此階段不可太久，否則菌種易衰退；培養(yǎng)到菌體或孢子生長豐滿后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏；每間隔一段時間應重新移植、培養(yǎng)一次，如此不斷更新。在一般情況下，各種微生物移植一次的時間依微生物的種類而有不同：無芽孢細菌1～2個月，芽孢菌、放線菌、擔子菌3～6個月，酵母菌4～6個月，絲狀真菌4～8個月1斜面低溫保藏法優(yōu)缺點：優(yōu)點：操作簡便，使用方便，不需特殊設備，能隨時接種和及時觀察菌種是否死亡或被污染等情況缺點：培養(yǎng)基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀、導致變異或退化；污染雜菌機會增加；保藏時間短；人力、物力的花費較大等。1斜面低溫保藏法Part02液體石蠟保藏法特點：石蠟油隔絕空氣適用范圍：各種微生物短期保藏（不適用于某些能夠分解烴類的細菌）保藏期：1-2年液體石蠟具有隔絕空氣、防止水分揮發(fā)的作用，因此保藏期比斜面保藏法的效果好。較適合好氧微生物的保藏，如酵母菌、霉菌可保藏2年以上。2液體石蠟保藏法2液體石蠟保藏法操作：將液體石蠟分裝于三角燒瓶內，塞上棉塞，用牛皮紙包扎121.3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準，使菌種與空氣隔絕將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）2液體石蠟保藏法優(yōu)缺點：優(yōu)點：制作簡單，不需特殊設備，且不需要經(jīng)常移種傳代缺點：保存時必須直立放置，所占位置較大，同時也不便攜帶；從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺Part03沙土保藏法特點：沙土載體+干燥適用范圍：能產生孢子或芽孢的微生物如霉菌、放線菌（因此多用于抗生素工業(yè)生產中）保藏期：1-2年左右但應用于營養(yǎng)細胞效果不佳3沙土保藏法3沙土保藏法操作：將沙與土酸洗后用自來水洗滌至中性烘干碾碎過篩，一般沙用80目過篩，土用30－100目過篩按沙與土的比例為1-2：1混合均勻，分裝于小試管中，裝料高度約為1厘米左右121°C間歇滅菌三次，滅菌試驗合格后烘干備用。將斜面孢子制成孢子懸浮液接入沙土管中或將斜面孢子刮下直接與沙土混合干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱內保存。3沙土保藏法優(yōu)缺點：優(yōu)點：材料簡單、操作簡便，不需特殊設備，能隨時接種和及時觀察菌種是否死亡或被污染等情況缺點：適用范圍有限，只適宜于形成孢子和芽孢的菌種，不適用只有菌絲的真菌和無芽孢的細菌保存Part04冷凍干燥保藏法特點：低溫+無氧+干燥適用范圍：除了絲狀微生物的菌絲體不適宜于本法外，其它大多數(shù)微生物均可采用此法進行菌種保藏保藏期：5-15年4冷凍干燥保藏法4冷凍干燥保藏法操作：微生物細胞與保護劑混合制成懸液，注入安瓿管中用低溫酒精或干冰，使其迅速凍結在冷凍干燥機中進行低溫減壓干燥，待水升華后制成固體菌塊（或菌粉）在真空條件下進行熔封，置于低溫冰箱中保藏；保護劑一般采用脫脂牛奶或血清。保護劑的作用可能是在冷凍干燥的脫水過程中代替結合水而穩(wěn)定細胞成分（細胞膜）的構型，防此細胞膜因為凍結而破壞。保護劑還可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。4冷凍干燥保藏法優(yōu)缺點：優(yōu)點：保存時間長、適用范圍較廣缺點：需要專業(yè)設備、成本較高Part05液氮冷凍保藏法特點：超低溫適用范圍：適用于幾乎所有微生物保藏期：超過10年5液氮冷凍保藏法5液氮冷凍保藏法操作：將菌種與保護劑一起制備成濃度大于108個/mL的菌懸液或孢子懸液分裝于凍存管中，置于冰水浴中降溫到0℃左右使用程序降溫儀以1~2℃/min的速度降溫至-35℃左右迅速把凍存管置于液