含量及有關物質

分析方法驗證的可接受標準文章來源：藥審中心審評二部黃曉龍含量及有關物質

分析方法驗證的可接受標準文

本文介紹了在對含量及有關物質測定所用的分析方法進行方法學驗證時，各項指標的可接受標準，以利于判斷該分析方法的可行性。內容包括：準確度、線性、精密度、專屬性、檢測限、定量限、耐用性和系統適應性。本文介紹了在對含量及有關物質測定所用的分析方法1.準確度含量：該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。

可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在98.0%-102.0%之間，9個回收率數據的相對標準差（RSD）應不大于2.0%。

1.準確度含量：有關物質：

驗證時一般要求根據有關物質的定量限與質量標準中該雜質的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質的限度為0.2%，則可分別配制該雜質濃度為0.1％、0.2％和0.3％的雜質溶液），分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，并計算9個回收率數據的RSD。

準確度有關物質：準確度

可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在80%-120%之間，如雜質的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標準差應不大于10%。準確度準確度2.線性含量：

線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：在80％至120％的濃度范圍內配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。

2.線性含量：

可接受的標準為：回歸線的相關系數（R）不得小于0.998，Y軸截距應在100％響應值的2％以內，響應因子的相對標準差應不大于2.0%。

線性可接受的標準為：回歸線的相關系數（R）不得小于0.998，有關物質：在定量限至一定的濃度范圍內配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。可接受的標準為：相關系數（R）不得小于0.990，Y軸截距應在100％響應值的25％以內，響應因子的相對標準差應不大于10%。線性有關物質：線性3.精密度

含量：

1）重復性

配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應不大于2.0%。

2）中間精密度

配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數據的相對標準差應不大于2.0%。

3.精密度含量：有關物質：

1）重復性

配制6份雜質濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應不大于15%。

2）中間精密度

配制6份雜質濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數據的相對標準差應不大于20%。

精密度有關物質：精密度4.專屬性含量：

可接受的標準為：空白對照應無干擾，主成分與各有關物質應能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應大于980。有關物質：可接受的標準為：空白對照應無干擾，該雜質峰與其它峰應能完全分離，分離度不得小于2.0。4.專屬性含量：5.檢測限含量：主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于3

。有關物質：雜質峰與噪音峰信號的強度比應不得小于3。5.檢測限含量：6.定量限含量：

主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標準差應不大于2.0%。有關物質：雜質峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質峰保留時間的相對標準差應不大于2.0%，峰面積的相對標準差應不大于5.0%。

6.定量限含量：7.耐用性含量：

分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對值變化±20％時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次?？山邮艿臉藴蕿椋褐鞣宓耐衔惨蜃硬坏么笥?.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離；各條件下的含量數據（n=6）的相對標準差應不大于2.0%。

7.耐用性含量：有關物質：

分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20％以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標準為：各雜質峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質峰與其他成分峰必須達到基線分離；各條件下的雜質含量數據（n=6）的相對標準差應不大于2.0%，雜質含量的絕對值在±0.1％以內。

耐用性有關物質：耐用性8.系統適用性含量：

配制6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標準差應不大于2.0%，主峰保留時間的相對標準差應不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離，主峰的理論塔板數應符合質量標準的規定。

8.系統適用性含量：有關物質：

配制6份相同濃度的雜質溶液進行分析，該雜質峰峰面積的相對標準差應不大于2.0%，保留時間的相對標準差應不大于1.0%。另外，雜質峰的拖尾因子不得大于2.0，理論塔板數應符合質量標準的規定。

系統適用性有關物質：系統適用性9.溶液穩定性有關物質：按照分析方法分別配置對照品溶液與供試品溶液，平行測定兩次主成分與雜質的含量，然后將上述溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室（4℃）中，在1、2、3、5和7天時分別平行測定兩次主成分與雜質的含量。

可接受的標準為：主成分的含量變化的絕對值應不大于2.0%，雜質含量的絕對值在±0.1％以內，并不得出現新的大于報告限度的雜質。

9.溶液穩定性有關物質：化學藥品溶出度方法研究文章來源：審評二部唐素芳化學藥品普通口服固體制劑溶出度方法驗證易忽視的幾個問題文章來源：審評四部審評八室

鄭國鋼化學藥品溶出度方法研究文章來源：審評二部唐素芳化學藥品普溶出度研究試驗主要包括以下內容：（1）溶出介質的選擇（2）溶出介質體積的選擇（3）溶出方法（轉籃法與槳法）的選擇（4）轉速的選擇（5）溶出度測定方法的驗證（6）溶出度均一性試驗（批內）（7）重現性試驗（批間）溶出度研究試驗主要包括以下內容：（1）溶出介質的選擇

溶出介質通常采用水、0.1mol/L鹽酸溶液、緩沖液（pH值3～8為主）。對在上述溶出介質中均不能完全溶解的難溶性藥物，可加入適量的表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（0.5%以下）等，應有文獻依據，并盡量選用低濃度，必要時應做生物利用度考察。

（1）溶出介質的選擇溶出介質通常采用水、（2）溶出介質體積的選擇

溶出介質的體積需使藥物符合漏槽條件，大杯法（第一、二法）常用體積為500、900和1000ml，小杯法（第三法）常用體積為100～250ml。部分品種為滿足在溶出量測定時藥物濃度的需要，可采用低于上述限度范圍的溶劑。

（2）溶出介質體積的選擇溶出介質的體積需

漏槽條件即做溶出的最佳條件，是指藥物所處釋放介質的濃度遠小于其飽和濃度，生理學解釋為藥物在體內被迅速吸收，制劑的體外包括釋放度等測定需要模仿體內生理條件的，滿足藥物溶解-吸收的過程，漏槽條件起到了修正作用，一般釋放介質的體積為藥物飽和溶液所需介質體積的3～5倍。溶出介質體積的選擇漏槽條件即做溶出的最佳條件，是指藥物所處（3）轉籃法與槳法的選擇

一般情況下，片劑多選擇槳法，轉籃法多用于膠囊劑或漂浮的制劑，研究資料應進行兩種方法的對比試驗，以確定最佳方法。

（3）轉籃法與槳法的選擇一般情況下，片劑（4）轉速的選擇

目前，各國藥典中收載的溶出度測定方法中的轉速，大部分在50～100轉/分。轉籃法以100轉/分為主；槳法以50轉/分為主。一般認為槳法50轉/分相當于轉籃法100轉/分。轉速的設置與具體品種有關，通常，藥物制劑的溶出速度隨著轉速的增加而增大。轉速過快，可能會導致對不同制劑溶出行為的區分能力差，所以不推薦選擇過高轉速。轉速的選擇應以能區分不同處方和生產工藝的產品為宜，如確實需要選擇高轉速，應進行充分的驗證。

（4）轉速的選擇目前，各國藥典中收載的溶（5）溶出度測定方法的驗證

方法學驗證內容與含量測定基本相同。應該注意的是，在方法學驗證中，試驗所用的溶媒應為溶出介質，即應考查輔料、膠囊殼在溶出介質中的干擾，藥物在溶出介質中的線性、回收率及穩定性等。

（5）溶出度測定方法的驗證方法學驗證內容應該注意的問題：1.對于溶出度，范圍規定為限度的±20％（回收率高、中、低常設為50％、限度濃度、100％）。

2.測定干擾2%以下可忽略不計，2～5%可考慮在限度上適當提高，超過5%以上測定方法不可取，如是空膠囊產生的應進行囊殼的消除試驗。如空膠囊干擾大于標示量的25%，實驗無效，如干擾不大于標示量的2%,可忽略不計。

溶出度測定方法的驗證應該注意的問題：溶出度測定方法的驗證3.濾膜吸附的驗證

一般認為吸附量在2%以下時可忽略不計，超過2%時應考慮選用其他濾過方法或更換適宜的溶出介質。

溶出度測定方法的驗證溶出度測定方法的驗證（6）取樣點和限度的確定

通過溶出度均一性試驗（考察同一批樣品的溶出曲線）和重現性試驗（考察至少3批樣品的溶出曲線），確定合理的溶出度測定取樣點和限度。為避免多次取樣造成的誤差，測定溶出曲線時取樣點不宜過多，通常為5～6個點，小規格的制劑因采用100～250ml溶出介質，所以溶出曲線一般可選3～4個時間點。限度應綜合考慮溶出曲線拐點和一般性要求。

（6）取樣點和限度的確定通過溶出度均一總結及個人觀點：1.在進行分析方法的驗證時，首先還是要參考中國藥典和指導原則，文章中提到的試驗方法和可接受標準也是專家的一些經驗總結，我們在進行研究時應根據具體的項目分析參考。2.在耐用性試驗時，文中要求每個條件下各測試兩次，且每次要平行測定6份樣品？總結及個人觀點：1.在進行分析方法的驗證時，首3.在進行溶出度測定方法的選擇時，僅考慮不同條件下單點的溶出度是不合適的，應結合溶出曲線的測定結果來確定。個人建議：（1）槳法和籃法均考查50、75和100rpm。（2）將溶出曲線測定放在溶出度測定方法驗證之前進行。總結及個人觀點3.在進行溶出度測定方法的選擇時，僅考慮不現場考核中的幾個問題：1.資料中溶液配比80：20應改為比號80:20

。2.線性試驗中含量或有關物質濃度的溶液應設計在