流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用1、白血病免疫分型

FAB主要依據(jù)形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行分型。MIC方案在FAB方案基礎(chǔ)上結(jié)合了免疫學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)。（M：形態(tài)學(xué)I：免疫學(xué)C：細(xì)胞遺傳學(xué)）2KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity1、白血病免疫分型

FAB主要依據(jù)形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行分型。最新流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用課件最新流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用課件最新流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用課件最新流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用課件最新流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用課件最新流式細(xì)胞分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用課件急性白血病的免疫學(xué)系列分型類型

系列積分

B系T系粒單系巨核系紅系3.雙表型/雙克隆型T/B>2>2000T/M0>2>200B/M>20>2004.未分化型

AUL≦2≦2≦2≦2≦29KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity急性白血病的免疫學(xué)系列分型9KeylabofMedici

B細(xì)胞系A(chǔ)LL的免疫分型

亞型CD19CD20HLA-DRCD10CyIgSmIgFAB分型早前B-ALL+—+———L1,L2前B-ALL+—/++++—L1普通B-ALL++/—++——L1,L2成熟B-ALL++++/——/++L310KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity亞型CD19CD20HLA-DRCD10CyIgSmIg

T細(xì)胞系A(chǔ)LL的免疫分型

亞型CD7CD2TdTFAB分型早前T-ALL+—+L1,L2T-ALL+++L1,L211KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversityT細(xì)胞系A(chǔ)LL的免疫分型11KeylabofMe

免疫分型的價(jià)值確定ALL的細(xì)胞類型（B細(xì)胞或T細(xì)胞）和ALL的分化階段。鑒定AML的特征。對(duì)形態(tài)學(xué)上未分化的急性白血病有助于鑒定細(xì)胞類型。診斷一些少見(jiàn)類型的白血病。如：M6、M7、M0等。12KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity免疫分型的價(jià)值確定ALL的細(xì)胞類型（B細(xì)胞或T細(xì)胞）和

診斷雙表型/混合細(xì)胞型急性白血病。鑒別診斷ALL伴有髓系抗原表達(dá)（My+）或AML伴有淋系抗原表達(dá)（Ly+）。鑒別急性白血病與其他造血系統(tǒng)和非造血系統(tǒng)惡性腫瘤。根據(jù)一些特殊的免疫表型特征診斷與某核型異常相關(guān)的亞型。如：M3/t(15;17);M2/t(8;21);M4Eo/inv(16)等。13KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity診斷雙表型/混合細(xì)胞型急性白血病。13Keylabo慢性白血病免疫分型

慢性粒細(xì)胞性白血病主要用于急變期的分型（同急性白血病免疫分型）。慢性淋巴細(xì)胞性白血病除了鑒別是T還是B淋巴細(xì)胞型外，還用于與反應(yīng)性淋巴細(xì)胞增多癥的鑒別，以及與部分淋巴瘤的鑒別診斷。一些少見(jiàn)的白血病如：毛細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞性白血病等的診斷與鑒別診斷。

14KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity慢性白血病免疫分型

慢性粒細(xì)胞性白血病主要用于急變期的分型（2、再生障礙性貧血的研究

AA是一組由不同發(fā)病機(jī)制介導(dǎo)的骨髓造血功能障礙綜合征，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全明了，但越來(lái)越多的臨床和實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，免疫介導(dǎo)的造血抑制AA最常見(jiàn)的病理機(jī)制之一。而且，具有免疫表型異常（如：CD4/CD8倒置，CD8+、活化T細(xì)胞或TCRγδ異常增高等）的患者，臨床表現(xiàn)相對(duì)嚴(yán)重，但免疫抑制治療相對(duì)有較好的療效。

15KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity2、再生障礙性貧血的研究

AA是一組常用的淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物淋巴細(xì)胞亞群T細(xì)胞：CD3+、TCRγ/δCD4+(Th/Ti)CD8+(Ts/Tc)B細(xì)胞：

CD19+NK細(xì)胞：CD3-CD16+CD56+16KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity常用的淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物淋巴細(xì)胞亞群16Keylabof淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分：T細(xì)胞：Ts：CD8+CD28-Tc：CD8+CD28+Th：CD4+CD29+Ti：CD4+CD45RA+B細(xì)胞：B1：CD5+CD19-B2：CD5+

CD19+17KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分：17KeylabofMedicine活化淋巴細(xì)胞亞群：活化總T細(xì)胞：CD3+/HLA—DR+靜止總T細(xì)胞：CD3+/HLA—DR-活化CD4+細(xì)胞：CD4+/HLA—DR+活化CD8+細(xì)胞：CD8+/HLA—DR+活化誘導(dǎo)分子：CD69白細(xì)胞介素2低親和力受體：CD25CD25+/CD3+：活化T細(xì)胞CD25-/CD3+：靜止T細(xì)胞18KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity活化淋巴細(xì)胞亞群：18KeylabofMedicine

根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同

CD4+:Th1:CD4+IFNr+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFNr+IL4+CD8+:Tc1:CD8+IFNr+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFNr+IL4+19KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity

根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同

CD4+:19KeTh1細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長(zhǎng)和活化、巨噬細(xì)胞的活化、介導(dǎo)遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)。其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反應(yīng)和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理?yè)p傷。Th2細(xì)胞：介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)B細(xì)胞的生長(zhǎng)、活化和分化，是IgG1和IgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致特異性過(guò)敏反應(yīng)，參與高IgE綜合癥和嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。Th1/Th2細(xì)胞平衡偏移多見(jiàn)于：感染癥、自身免疫病、過(guò)敏癥、排斥反應(yīng)、免疫缺陷、腫瘤惡化等。檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞平衡主要是分析疾病發(fā)生發(fā)展的狀況，為臨床調(diào)整Th1/Th2細(xì)胞平衡偏提供正確的治療依據(jù)。20KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversityTh1細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長(zhǎng)和活化、巨噬細(xì)3、血栓與止血血小板糖蛋白血小板質(zhì)膜糖蛋白GPⅠa：CDw49bGPⅢa：CD61GPⅠb：CD42bGPⅣ：CD36GPⅠc：CDw49fGPⅨ：CD42aGPⅡa：CD29GPⅡb：CD41GPⅡa'：CD31血小板顆粒膜糖蛋白α顆粒：CD62P(GMP140、PADGEM)λ顆粒：溶酶體完整膜糖蛋白CD63溶酶體相關(guān)膜糖蛋白-1LAMP-1溶酶體相關(guān)膜糖蛋白-2LAMP-221KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity3、血栓與止血血小板糖蛋白21KeylabofMedic

活化血小板檢測(cè)CD62P，CD63GPⅡb/Ⅲa復(fù)合物(CD41/61)GPⅣ(CD36)PAC-1Thrombospondin血小板內(nèi)鈣離子22KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity活化血小板檢測(cè)22KeylabofMedicine遺傳性血小板功能缺陷性疾病診斷巨血小板綜合癥(BSS)GPIb-Ⅸ(CD42a/CD42b)缺陷或缺乏血小板無(wú)力癥(CT)GPⅡb/Ⅲa(CD41/61)缺陷或缺乏貯存池疾病-SPD下降23KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity遺傳性血小板功能缺陷性疾病診斷23KeylabofMed4、CD34的絕對(duì)計(jì)數(shù)

隨著近年來(lái)外周血造血干細(xì)胞移植病例的日益增多，外周血造血干細(xì)胞的流式定量越來(lái)越成為一個(gè)突出的話題。如何準(zhǔn)確地定量干細(xì)胞數(shù)量，什么是有效的質(zhì)量控制成了各大實(shí)驗(yàn)室的話題。1989年，歐洲人創(chuàng)建了米蘭方案，利用SS與CD34作雙參數(shù)直方圖，計(jì)算CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)；同年，北歐人改進(jìn)了米蘭方案，加入了對(duì)照，稱之米蘭/北歐方案。24KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity4、CD34的絕對(duì)計(jì)數(shù)隨著近年來(lái)外周血造血干細(xì)胞移1995年，血液病治療及移植國(guó)際聯(lián)合會(huì)(theInternationalSocietyofHematotherapyandGraftEngineering，ISHAGE)成立了干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)(Enumeration)小組，致力于尋求一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏的流式細(xì)胞儀檢測(cè)方法去定量外周血中的造血干細(xì)胞數(shù)量。這一方法必須是對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室中不同的流式細(xì)胞儀都有效，而且在不同的移植中心具有可比性。這一方案即在96年問(wèn)世的ISHAGE方案，至今為止，其他各種方案改進(jìn)均以此方案為基礎(chǔ)。25KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity1995年，血液病治療及移植國(guó)際聯(lián)合會(huì)(the5、多藥耐藥（MDR）的研究白血病治療的失敗再很大程度上是由于白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生了耐藥。因此對(duì)白血病耐藥機(jī)制的研究具有重要的意義。但是耐藥的形成過(guò)程卻很多。主要有幾個(gè)方面：藥物吸收減少、細(xì)胞解毒作用增強(qiáng)、靶分子改變、DNA損傷修復(fù)能力增強(qiáng)、細(xì)胞內(nèi)藥物溢出增多、細(xì)胞凋亡的抑制等。26KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity5、多藥耐藥（MDR）的研究白血病治療常見(jiàn)的流式檢測(cè)項(xiàng)目：參與藥物在細(xì)胞內(nèi)外轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白：P-170、MRP、LRP、BCRP、MVP參與細(xì)胞解毒的酶：ALK、GST、GSH、MS抑制細(xì)胞凋亡的蛋白：bcl-2/bax、P53藥物泵的功能檢測(cè)：羅丹明123（R123）或柔紅霉素27KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity常見(jiàn)的流式檢測(cè)項(xiàng)目：27KeylabofMedicine6、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)是由于造血干細(xì)胞發(fā)生體細(xì)胞突變而引起的獲得性溶血性貧血,典型病例有發(fā)作夜間血紅蛋白尿,可伴全血細(xì)胞減少.其溶血是由于紅細(xì)胞膜的獲得性缺陷,對(duì)激活補(bǔ)體異常敏感所致的一種慢性血管內(nèi)溶血。28KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity6、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)

隨著流式細(xì)胞儀的逐漸推廣，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD55、CD59以能從病理上提供直接的證據(jù)而得到廣泛的應(yīng)用。正常人的紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、血小板上CD55、CD59表達(dá)完全陽(yáng)性，而PNH患者細(xì)胞則分為三型（依據(jù)CD55、CD59缺乏或減少的程度）

29KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity隨著流式細(xì)胞儀的逐漸推廣，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD55、CD59以

流式細(xì)胞術(shù)在PNH診斷中須注意的事項(xiàng)：1、盡量同時(shí)檢測(cè)紅細(xì)胞和粒細(xì)胞的CD55與CD59的表達(dá)情況。因?yàn)镻NH克隆來(lái)源的紅細(xì)胞在溶血后和輸血后，紅細(xì)胞中PNH克隆細(xì)胞會(huì)減少或檢測(cè)不到，而對(duì)粒細(xì)胞則影響很小。同時(shí)檢測(cè)紅細(xì)胞和粒細(xì)胞CD55和CD59可以區(qū)分小細(xì)胞低色素性貧血和PNH，小細(xì)胞低色素性貧血只有紅細(xì)胞上的CD55和CD59減少，粒細(xì)胞上CD55和CD59正常。2、在檢測(cè)紅細(xì)胞的CD55與CD59時(shí)，可以用全血標(biāo)記，但必須稀釋。而在檢測(cè)粒細(xì)胞的CD55與CD59的表達(dá)時(shí)，必須先溶血再標(biāo)記。因?yàn)榧t細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于粒細(xì)胞，紅細(xì)胞的存在會(huì)與粒細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)對(duì)CD55與CD59的結(jié)合。

30KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity流式細(xì)胞術(shù)在PNH診斷中須注意的事項(xiàng)：30Keyla7、多發(fā)性骨髓瘤（MM）多發(fā)性骨髓瘤是漿細(xì)胞異常增生性疾病。正常漿細(xì)胞為C