XXX醫院檢驗科常用技能操作規程TOC\o"1-2"\h\uHYPERLINK\l_Toc27914臨床血液學檢驗 PAGEREF_Toc27914\h3HYPERLINK\l_Toc2525全血細胞分析 PAGEREF_Toc2525\h3HYPERLINK\l_Toc8191血栓與止血檢驗 PAGEREF_Toc8191\h4HYPERLINK\l_Toc15350血液流變學檢驗 PAGEREF_Toc15350\h5HYPERLINK\l_Toc8295全血血細胞沉降率測定 PAGEREF_Toc8295\h6HYPERLINK\l_Toc4035血液寄生蟲檢驗 PAGEREF_Toc4035\h7HYPERLINK\l_Toc23187臨床體液學檢查 PAGEREF_Toc23187\h8HYPERLINK\l_Toc8875尿液分析 PAGEREF_Toc8875\h8HYPERLINK\l_Toc14140尿本-周氏蛋白定性試驗 PAGEREF_Toc14140\h9HYPERLINK\l_Toc16295妊娠試驗 PAGEREF_Toc16295\h10HYPERLINK\l_Toc28158胃液檢查 PAGEREF_Toc28158\h11HYPERLINK\l_Toc32356腦脊液檢查 PAGEREF_Toc32356\h11HYPERLINK\l_Toc28820漿膜腔積液檢查 PAGEREF_Toc28820\h13HYPERLINK\l_Toc18030前列腺液檢查 PAGEREF_Toc18030\h13HYPERLINK\l_Toc30381陰道分泌物檢查 PAGEREF_Toc30381\h14HYPERLINK\l_Toc11516精液檢查 PAGEREF_Toc11516\h15HYPERLINK\l_Toc1787糞便檢查 PAGEREF_Toc1787\h17HYPERLINK\l_Toc21323寄生蟲檢查 PAGEREF_Toc21323\h17HYPERLINK\l_Toc26257肛門周圍寄生蟲檢查 PAGEREF_Toc26257\h19HYPERLINK\l_Toc17871糞便隱血檢查 PAGEREF_Toc17871\h20HYPERLINK\l_Toc6096輪狀病毒、腺病毒抗原檢測 PAGEREF_Toc6096\h20HYPERLINK\l_Toc25039臨床化學檢驗 PAGEREF_Toc25039\h22HYPERLINK\l_Toc22077肝功能檢驗 PAGEREF_Toc22077\h22HYPERLINK\l_Toc11240腎功能檢測 PAGEREF_Toc11240\h32HYPERLINK\l_Toc12549血脂檢驗 PAGEREF_Toc12549\h40HYPERLINK\l_Toc7847微量元素測定 PAGEREF_Toc7847\h47HYPERLINK\l_Toc1411心肌酶譜檢驗 PAGEREF_Toc1411\h49HYPERLINK\l_Toc3481胰腺酶譜檢驗 PAGEREF_Toc3481\h53HYPERLINK\l_Toc10891常量元素檢驗 PAGEREF_Toc10891\h55HYPERLINK\l_Toc11128糖尿病檢驗 PAGEREF_Toc11128\h56HYPERLINK\l_Toc3557風濕免疫檢驗 PAGEREF_Toc3557\h59HYPERLINK\l_Toc31019免疫球蛋白和補體測定 PAGEREF_Toc31019\h61HYPERLINK\l_Toc22812內分泌激素檢驗 PAGEREF_Toc22812\h65HYPERLINK\l_Toc14938甲狀腺激素檢測 PAGEREF_Toc14938\h65HYPERLINK\l_Toc4585生殖激素測定 PAGEREF_Toc4585\h66HYPERLINK\l_Toc24426腎上腺激素測定 PAGEREF_Toc24426\h67HYPERLINK\l_Toc31986胰激素測定 PAGEREF_Toc31986\h69HYPERLINK\l_Toc11643臨床免疫學檢驗 PAGEREF_Toc11643\h71HYPERLINK\l_Toc28181傳染病的免疫學檢驗 PAGEREF_Toc28181\h71HYPERLINK\l_Toc25159腫瘤標志物檢測 PAGEREF_Toc25159\h78HYPERLINK\l_Toc24263臨床核酸檢測 PAGEREF_Toc24263\h86HYPERLINK\l_Toc19040HBV-DNA檢測 PAGEREF_Toc19040\h86HYPERLINK\l_Toc23343HCV-RNA檢測 PAGEREF_Toc23343\h88HYPERLINK\l_Toc32093HPV-DNA檢測 PAGEREF_Toc32093\h89HYPERLINK\l_Toc17373TB-DNA檢測 PAGEREF_Toc17373\h90HYPERLINK\l_Toc27824微生物鑒定程序 PAGEREF_Toc27824\h93HYPERLINK\l_Toc13043葡萄球菌屬 PAGEREF_Toc13043\h93HYPERLINK\l_Toc15592腸球菌屬 PAGEREF_Toc15592\h93HYPERLINK\l_Toc27643奈瑟菌屬、卡他莫拉菌 PAGEREF_Toc27643\h94HYPERLINK\l_Toc3675棒狀菌屬 PAGEREF_Toc3675\h94HYPERLINK\l_Toc5411李斯菌屬和丹毒絲菌屬 PAGEREF_Toc5411\h95HYPERLINK\l_Toc254分枝桿菌 PAGEREF_Toc254\h95HYPERLINK\l_Toc7941諾卡菌屬 PAGEREF_Toc7941\h97HYPERLINK\l_Toc14746腸桿菌科 PAGEREF_Toc14746\h97HYPERLINK\l_Toc32656耶爾森菌屬 PAGEREF_Toc32656\h97HYPERLINK\l_Toc365霍亂弧菌 PAGEREF_Toc365\h98HYPERLINK\l_Toc3304假單胞菌屬和不動桿菌屬 PAGEREF_Toc3304\h98HYPERLINK\l_Toc13137嗜血桿菌屬 PAGEREF_Toc13137\h98HYPERLINK\l_Toc21878念珠菌屬常規鑒定 PAGEREF_Toc21878\h99HYPERLINK\l_Toc7963血清降鈣素原測定操作規程 PAGEREF_Toc7963\h99HYPERLINK\l_Toc8541支原體和脲原體 PAGEREF_Toc8541\h99HYPERLINK\l_Toc28341沙眼衣原體 PAGEREF_Toc28341\h100HYPERLINK\l_Toc30020抗菌藥物敏感試驗 PAGEREF_Toc30020\h100臨床血液學檢驗檢測血液中的血細胞(紅細胞，白細胞，血小板)的數量，白細胞分類及相關參數(HCG,HCT,MCV,MCH,MCHC,RDW,MPV,PDW等)的變化，對臨床相關疾病的診斷與鑒別診斷，觀察疾病變化及療效具有重要參考價值。2.實驗原理電阻抗法檢測原理是根據血細胞為相對不良導體，當血細胞懸浮于電解質溶液中，將小孔管插入細胞懸液，使其管內充滿稀釋液，而管內安一個內電極，外側細胞懸液中有一個外電極。當電流接通后，位于小孔兩側電極產生穩定電流。當一個細胞通過小孔時，由于細胞導電性質比電解質溶液要低，感應區內電阻增加，瞬間引起變化出現一個脈沖信號。脈沖大小，振幅高低隨細胞體積大小發生變化。細胞體積越大，脈沖越大，振幅越高，即庫爾特原理。3.儀器信息儀器名稱：XT-1800i和XE-2100D五分類血細胞分析儀WBCRBCHCGHCTMCVMCHMCHCRDWMP參見臨床檢驗XT-1800i和XE-2100D五分類血細胞分析儀操作規程，SOP文件。5.2血清中等程度的黃疸、溶血和脂血對本測定不產生明顯干擾，膽紅素達到350umol/L、血紅蛋白濃度超過1000mg/L可引起結果偏高。5.3血清脂濁過高，可加入2ml乙醚劇烈搖動，并離心去除乙醚層，1.目的凝固法確定量的血漿(50微升)樣本經一定時間加溫后，加入相應試劑，采用波長660nm的光照射樣本，凝血過程中血漿的混濁度可以通3.儀器信息儀器名稱：SysmexCA-1500全自動血液凝固分析儀4.操作步驟參見臨床檢驗CA-1500全自動血液凝固分析儀操作規程，SOP文件。5.1抗凝劑：草酸鹽、EDTA、肝素不適用于血凝檢查。5.2標本采集處理不當，如血與抗凝劑未充分混勻，出現凝塊，混勻時過分用力，使標本溶血，造成結果變異。血液流變學檢驗檢測全血、血漿黏度、紅細胞聚集及變形性、血沉、壓積等血液動2.實驗原理采用國際先進的錐/板式測量方式，該產品通過一個低慣性的轉矩馬達對被測試流體施加一個受控應力，驅動軸由一個低阻力磁浮軸承保持在中心位置，它將施加的應力傳遞到被測流體上，其測試頭為錐板式。3.儀器信息儀器名稱：ZL-6000P自動血流變儀4.操作步驟全血粘度，血漿黏度，紅細胞壓積，血沉參見臨床檢驗ZL-6000P自動血流變儀操作規程，SOP文件。5.注意事項：5.1抗凝劑的選?。阂赃x用肝素作為抗凝劑為宜。草酸鹽或枸櫞酸鈉5.2抗凝劑用量不可過大，盡量減少對血液的稀釋作用；抗凝劑用量5.3采血過程不宜太快，應避免剪切力對紅細胞可能造成的損傷。為此，采血針頭的內徑以較大為好(最好選用7號以上的針頭)。采血時抽力不宜過大，以免血液流經針頭時受到異常的剪切力。全血血細胞沉降率測定為了準確的檢出血沉，為臨床提供診療依據。2.實驗原理離體抗凝血液置于特制刻度測定管(魏氏法血沉管)內，垂直立于3.儀器信息儀器名稱：魏氏法血沉管4.操作步驟4.1項目基本參數：參見臨床檢驗SOP文件。5.注意事項：5.1紅細胞在單位時間內下沉的速度與血漿蛋白的量和質，血漿中脂類的量和質，紅細胞的大小與數量，是否呈緡錢相聚以及血沉管的內徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高低等因素都有關系。5.3血沉管內徑要標準(2.5mm),放置要垂直。5.4室溫過高時血沉加快，可以按溫度系數校正。為了能夠更加準確地檢出血液中寄生蟲，并且對其進行形態鑒定，為臨床提供更為準確的診斷依據。2.實驗原理應用瑞氏-吉姆薩染色法對制備好的血片進行染色后在顯微鏡下查3.操作步驟3.2血膜完全干燥后即可進行瑞氏-吉姆薩染色。3.3在油鏡下進行檢查。4.1不能使用肝素抗凝標本。4.2染色時注意血片的質量。尿液分析【項目名稱】尿常規+尿沉渣分析【正常參考值】尿糖：陰性白細胞：陰性，鏡檢：0-2/HP尿紅細胞：陰性，鏡檢：0-3/HP【儀器】MT-N600尿液分析儀H-800全自動尿液分析儀【試劑】MT-R10尿液分析試紙條H-800尿液分析試紙條【操作】1.在離心管中倒入充分混勻的尿液至10m1刻度處，RCF400g(1200-1300r/min),離心5min。使之濃縮50倍。3.沉渣液混勻后，取1滴(15-20μL)充液到標準尿沉渣計數板內(按說明書操作)?！窘Y果判斷】2.尿結晶、細菌、真菌、寄生蟲等以(+)-(3+)形式報告。尿本-周氏蛋白定性試驗【項目名稱】尿本-周氏蛋白定性試驗【原理】本-周氏蛋白又稱凝溶蛋白，是一種免疫球蛋白，是一種免疫球蛋白輕鏈或其聚合體。此種蛋白在一定的pH條件下加熱至40-60℃時有沉【試劑】(2)2mol/L乙酸鹽緩沖溶液(pH4.9士O.1〉聚乙酸鈉(CH?COONa·3H20)17.5g,加冰乙酸4.1ml,再加蒸餾水至100ml,調pH至4.9。【操作】(1)先將尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性試驗，如呈陰性反應認為(2)取透明尿液4m1于試管中，再加入乙酸鹽緩沖溶液1m1,混勻后，放置56℃水浴中15min。如有混濁或出現沉淀，再將試管放入沸水中，煮沸3min,觀察試管中混濁或沉淀的變化，如混濁變清、混濁減弱或沉淀減少，均提示本-周氏蛋白陽性。若煮沸后，混濁增加或沉淀增多，如濾液開始透明，溫度下降后渾濁，再煮沸時又透明，提示本-周氏蛋妊娠試驗【項目名稱】妊娠試驗【原理】兩個抗人-HCG單克隆抗體，一個抗體吸附于硝酸纖維素薄膜(NG膜)上，另一個抗體結合于金溶膠顆粒表面(即金標抗體)。尿液中HCG先與NG膜上的抗體結合，然后再與金標單抗溶液反應，于是形成抗體-HCG-金標抗體的夾心式復合物，顯現出紅色的金斑點。【操作】【結果】陽性反應：在質控點(線)和測定點(線)均呈紅色。陰性反應：僅在質控點(線)呈紅色。胃液檢查【項目名稱】胃液檢查【方法】顯微鏡檢查法【參考值】外觀：無色透明液體。紅細胞：正常胃液中無紅細胞。白細胞：正常胃液可見少量白細胞，100-1000個/μ1。腦脊液檢查【項目名稱】腦脊液檢查【方法】顯微鏡計數法【器材及試劑】2.紅細胞稀釋液(與血液紅細胞計數稀釋液相同)?！静僮鳌?.對澄清的腦脊液可混勻后用滴管直接滴入計數池，計數10個大方格內紅、白細胞數，其總和即為每微升的細胞數。再換算成每升腦脊液中的細胞數。如細胞較多，可計數一大格內的細胞×10,即得每微升腦脊液中細胞總數。如用"升"表示，則再乘以106。2.混濁或帶血的腦脊液可混勻后，用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20μl,加入含紅細胞稀釋液0.38ml的小試管內，混勻后滴入計數池內，用低倍鏡計數4個大方格中的細胞總數，乘以50,即為每微升腦脊液的(二)白細胞計數1.非血性標本小試管內放入冰乙酸1-2滴，轉動試管，使內壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3-4滴，數分鐘后，混勻充入2.血性標本將混勻的腦脊液用1%乙酸溶液稀釋進行計數。為剔除腦脊液白細胞校正數=腦脊液白細胞測定值-出血增加的白細胞數【參考區間】×10?/L;兒童(0-15)×10?/L;新生兒：(0-30)×10?/L。以淋巴細胞及大單核細胞為主，兩者之比約為7:3,偶見內皮細胞。腦脊液中球蛋白與苯酚結合，可形成不溶性蛋白鹽而下沉，產生白色渾濁或沉淀，即潘氏(Pandy)試驗?！驹噭?%酚溶液：取純酚25ml,加蒸餾水至500ml,用力振搖，置37℃溫箱內1-2天，待完全溶解后，置棕色瓶內室溫保存。【操作】取試劑2-3ml,置于小試管內，用毛細滴管滴入腦脊液1-2滴，襯【結果判斷】極弱陽性(±):微呈白霧狀，在黑色背景下，才能看到。陽性(+):灰白色云霧狀。(2+):白色渾濁。(3+):白色濃絮狀沉淀。(4+):白色凝塊?！緟⒖紖^間】腦脊液內細胞分類計數中，淋巴細胞成人40%～80%,新生兒5%~35%;單核細胞成人15%～45%,新生兒50%～90%;中性粒細胞成人0~6%,新生兒0～8%。【項目名稱】漿膜腔積液檢查【方法】漿膜黏蛋白定性試驗【原理】及Rivalta反應?！静僮鳌咳?00ml量筒，加蒸餾水100ml,滴入冰乙酸0.1ml,充分混勻(PH3-5)靜置數分鐘，將穿刺液靠近量筒液面逐滴輕輕滴下，在黑色背景下，觀察【結果判斷】陰性：清晰不顯霧狀?？梢?±):漸呈白霧狀。陽性(+):加后呈白霧狀。(2+):白薄云狀。(3+):白濃云狀。前列腺液檢查【項目名稱】前列腺液檢查【方法】顯微鏡直接涂片法正常人卵磷脂小體為多量或滿視野；白細胞<10個/HP、紅細胞<5個/HP。陰道分泌物檢查本試劑包括過氧化氫H2O2(陰道乳酸桿菌的標志物)、唾液酸酶SA(加德納菌、游動彎曲桿菌等BV致病菌的標志物)和白細胞酯酶LE(炎癥細胞的標志物)、PH值四項指標。(1)過氧化氫(H2O2)檢測4-氨基安替比林存在下，使2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸氧化呈紅色。當標本中的過氧化氫濃度≥2umol/L時，反應結果呈紅色，呈色深度與(2)唾液酸酶(SA)檢測(3)白細胞酯酶(LE)檢測白細胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，(4)PH值檢測PH試紙為黃色、黃綠色或綠色，PH>4.5時試紙為藍綠色或藍色。2.將已取分泌物的拭子，先在PH檢測孔擦拭2-3次，觀察PH試紙3.將拭子放入裂解管，加入8-10滴(約350-400ul)提取液，反復4.用滴管吸取提取的標本液，分別加2滴至檢測卡的H2O2、SA、LE5.在H2O2檢測孔中滴加1滴顯色液。6.將檢測卡置專用加熱器或42～45℃恒溫箱或恒溫水浴鍋中，15【結果判讀】1.PH:正常為黃色、黃綠色或綠色，異常為藍綠色或藍色。2.過氧化氫(H2O2):正常為紅色，異常為不顯色(本底為白色)。3.唾液酸酶(SA):淡藍色。藍色判為陽性，不變色者(本底為白色)4.白細胞酯酶(LE):藍綠色、藍色判為陽性，不變色者(本底為白色)【項目名稱】精液檢查【操作】取10μl標本涂片，連續觀察至少5個視野，對200個精子進行分級，首先計數a級和b級精子，隨后在同一視野內計數c級和d級【結果判斷】根據下述標準把精子活力分為a、b、c、d四級。a級：快速前向運動，37℃時速度≥25μm/s,或20℃速度≥20μm(25μm,大約相當于精子5個頭部的長度，或半個尾部的長度)。c級：非前向運動(<5μm/s)。正常精液采集后60min內，a級+b級精子>50%以上。糞便檢查寄生蟲檢查【試劑】1.生理鹽水稱取氯化鈉8.5g,溶于1000ml蒸餾水中。2.碘液有多種配方，較實用的介紹下列兩種。(1)Lugol碘液：碘化鉀10g,碘5g,蒸餾水100ml。先用約25-50ml水溶解碘化鉀，再加入碘，待溶解后，加水稀釋至100ml,此時，再加入碘少許即難溶解，有助于溶液長期穩定，棕色瓶貯存，置于暗處可穩定6個月以上。工作液與貯存液按1:5水稀釋，貯存于棕色滴4436==瓶，供日常應用，每1-2周更新1次。(2)D'Autoni碘液：碘化鉀1.0g,碘1.5g,蒸餾水100ml。配制操作同Lugol碘液?！静僮鳌?.置1滴等滲鹽水于玻片左半側的中央，置1滴碘液于玻片右半側的3.用木棍或火柴挑起糞便約2mg,火柴頭大小，加入等滲鹽水滴中，4.用蓋玻片蓋住液滴。操作時應首先持好蓋玻片，使之與玻片成一5.用低倍鏡檢查，如需要鑒定，在高倍鏡下，以立下或橫向移動方【方法二】厚涂片透明法-加藤法(WHO推薦法)【器材】1.不銹鋼、塑料或紙平板不同國家生產的平板的規格不同。厚1mm,孔徑9mm的平板可通過50mg糞便；厚1.5mm,孔徑6mm的平板可通過41.7mg糞便；厚0.5mm,孔徑為6.5mm的平板可通過20mg糞便。2.親水性玻璃紙條厚40-50μm,大小25mm×30mm或25mm×【試劑】1.甘油-孔雀綠溶液3%孔雀綠水溶液1ml,甘油100ml和蒸餾水100ml,徹底混勻。2.甘油亞甲藍溶液3%亞甲藍水溶液1ml,甘油100ml和蒸餾水100ml,徹底混勻。【操作】1.置少量糞便標本在報紙或小紙片上，用濾網在糞便標本上加壓，3.在載玻片中央部位放置帶孔平板，用刮片使孔內填滿糞便標本，并用刮片邊緣橫刮面以去除孔邊過多的糞便(刮片和濾網用后可棄去，如經仔細清洗，也可再使用)。4.小心取下平板，使糞便標本成矮小圓柱狀留在玻片上。5.以在甘油-孔雀綠或甘油-亞甲藍溶液中侵過的玻璃紙條覆蓋糞便。糞便標本較干時，玻璃紙條必須很濕；如為軟便，則玻璃紙條水分可略少(如玻璃紙條表面有過多的甘油，可用衛生紙擦去)。在干燥的氣候條件下，過多的甘油只能延緩而不能防止糞便標本的干燥。6.翻轉玻片，在另一張玻片或在表面平滑、堅硬的物體上，朝向玻璃紙條擠壓糞便標本，以使標本在玻片與玻璃紙條間均勻散開。澄清后，應能透過涂片讀出書本上的字跡。將玻片置于實驗臺上，玻璃紙條面朝上。此時，甘油使糞便標本清晰，水8.除檢查鉤蟲卵外，標本玻片應置室溫一至數小時，使標本清晰。為加速清晰及檢查過程，也可將標本玻片置于40℃溫箱，或直射陽光下9.本法制片中的蛔蟲及鞭蟲卵可在相當長時間內保存，鉤蟲卵在制片后30～60min就不能看到，血吸蟲卵可保存數月。10.應以上下或橫向移動方式檢查涂片，并報告所發現的每種蟲卵的計數。然后乘以適宜的數值得出每克糞便中蟲卵的數目。如使用50mg平板，乘以20;使用41.7mg平板，乘以24;使用20mg平板，乘以50。肛門周圍寄生蟲檢查【項目名稱】肛門周圍寄生蟲檢查法【方法】【操作】(1)將棉拭子浸入盛有生理鹽水2-3ml的試管內。(2)于患者起床前，從試管內取出棉拭子，擠去多余的鹽水，擦拭患者肛門及其周圍(肛門皺褶處需用手指將其展開)。(3)然后再將棉拭子放入原試管內，帶回。(5)將此試管靜置15min或離心沉淀，吸取沉淀鏡檢，或加飽和鹽糞便隱血檢查【方法】【原理】糞便隱血的免疫檢測法是一個高靈敏度的免疫測定法，已有膠乳凝集試驗、ELA法、膠體金法、免疫層析法、免疫-化學并用法等，此外【操作】輪狀病毒、腺病毒抗原檢測【檢驗原理】該檢驗采用高度特異性的抗原抗體反應及免疫層析技術來定性檢測臨床樣本中是否含有輪狀病毒或/和腺病毒抗原。試劑盒含有被預先固定于膜上固定區(R)的輪狀病毒抗原特異性的抗體、測試區(A)的腺病毒抗原特異性的抗體和質控區(C)的相應抗體。測試時，將稀釋過的樣本滴入檢測卡的加樣孔(S)內，標本與預包被的膠體金顆粒結合的輪狀病毒或/和腺病毒抗原特異性的抗體反應。然后，會與固定在膜上輪狀病毒或腺病毒抗原特異性的抗體結合，在測試區(R)或(A)內出現一條紅色條帶。如是輪狀病毒和腺病毒抗原同時陽性，在測試區(R)和(A)內會各出現一條紅色條帶。如是陰性，則測試區(R)和(A)內將沒有紅色條帶。無論輪狀病或/和腺病毒抗原是否存在于臨床樣本中，一條紅色條帶都會出現在質控區(C)內。質控區(C)內所【檢驗方法】1.旋開大便采集器的蓋子，如果是固態糞便，用取樣棒挑取大約50毫克(綠豆大小)樣本放入裝有樣本稀釋液的采集器中，如果是液態糞便，用塑料吸管吸取樣本后滴加兩滴(大約50微升)到裝有樣本稀釋液的采4.將采集器倒置垂直懸在加樣孔上方，朝檢測卡的加樣孔(S)緩慢5.在10分鐘內判讀結果。臨床化學檢驗肝功能檢驗蛋白質(Protein)分子中的肽鍵(-CONH一),在堿性(Alkali)溶3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：548nm副波長：700nm試驗溫度：37℃試劑量：R=200ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1血漿的樣本中含纖維蛋白原，可出現使報告結果平均增加3g/L紅素達到350umol/L、血紅蛋白濃度超過1000mg/L時可引起結果偏高。5.3血清脂濁過高，可加入2ml乙醚劇烈搖動，并離心去除乙醚層，5.4所用器具不能有銨離子，因為NH+在堿性條件下形成[Cu(NH;)4在PH4.15緩沖溶液中，白蛋白與溴甲酚綠(BCG)形成藍綠色的復合物，其色澤深淺與樣品中白蛋白濃度有關，檢測600nm波長處吸光度3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：604nm副波長：700nm試驗溫度：37℃樣本量：S=2ul試劑量：R=200ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1如使用血漿樣本，可以使用肝素(29IU/ml)作抗凝劑。草酸鉀、氟化鈉、EDTA、枸櫞酸鈉抗凝劑對試驗結果有影響。5.2樣本中血紅蛋白2g/L、脂肪200mg/d1、維生素C(血清)12mg/L、維生素C(尿液)200mg/L、白蛋白76g/L被檢驗出會干擾測試方法?？偰懠t素在PH3.0附近，在釩酸鹽和表面活性劑存在下，可以被氧3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀測定方法：終點法反應方向：下降主波長：450nm副波長：548nm試驗溫度：37℃樣本量：S=5.0ul試劑量：R1=140ulR2=35ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2應采用合格(符合方法學要求)的膽紅素標準液定標。在PH=3.0附近，將釩酸作用于標本，標本中的直接膽紅素被氧化成3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：450nm副波長：548nm試驗溫度：37℃樣本量：S=5.0ul試劑量：R1=140ulR2=3ul參見本生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2應采用合格(符合方法學要求)的膽紅素標準液定標。1.實驗方法：動力學速率法(IFCC推薦)在該反應中，丙氨酸氨基轉移酶催化可逆的轉氨基反應，將L-丙氨酸與α-酮戊二酸轉成丙酮酸和L-谷氨酸。在反應體系中加入LDH和NADH時，丙酮酸會還原成乳酸，并且使NADH氧化成NAD+。NADH的氧化速率與標本中酶活性呈正比，可在340nm檢測吸光度下降速率。根據線性反應期吸光度下降速率(-△A/min)計算出ALT的活性濃度。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀副波長：404nm試劑量：R1=120ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1如果試劑變混濁或試劑空白吸光度值(340nm,10mm比色杯)5.2NADH在340nm的理論摩爾吸光系數6.22×103,計算因子最好5.4用底物啟動的雙試劑可有效消除內源性丙酮酸和GLDH的干擾。六、天門冬氨酸氨基轉移酶檢測1.實驗方法：動力學速率法(IFCC推薦)天門冬氨酸氨基轉移酶催化可逆的轉氨反應-將L-門冬氨酸與α-酮戊二酸轉成草酰乙酸和L-谷氨酸。在蘋果酸脫氫酶(MDH)出現時，草酰乙酸會還原成L-蘋果酸，并且合并使得還原的β-NADH氧化成β-NAD+。機器會自動檢測340nm吸光度的改變，吸光度的改變直接與3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：404nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1如果試劑變混濁或試劑空白吸光度值(340nm,10mm比色杯)小于1.0,試劑視為失效。5.2NADH在340nm的理論摩爾吸光系數6.22×103,計算因子最好5.4用底物啟動的雙試劑可有效消除內源性丙酮酸和GLDH的干擾。七、堿性磷酸酶(ALP)檢測1.實驗方法：動力學速率法(IFCC推薦)對-硝基苯磷酸鹽在405nm處無色，而對-硝基酚有很強的吸光度，在405nm測定吸光度上升速率與堿性磷酸酶活力呈正比，可計算出堿性3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：404nm副波長：660nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1溶血樣本不能使用。草酸鹽、EDTA和枸櫞酸鹽能抑制ALP活性，不能用作ALP的抗凝劑使用。5.2如果△A/min>0.3,需用生理鹽水稀釋10倍后測定，結果乘以八、γ-谷氨酰轉肽酶(GGT)檢測1.實驗方法：動力學速率法(IFCC推薦)本法以L-γ-谷氨酸-3-羧基-4-硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w。在GGT的催化下，谷氨酰基轉移到雙甘肽分子上，同時釋放出黃色的5-氨基-2-硝基苯甲酸，引起405～410nm處吸光度的增加。檢測410nm吸光度的變化，吸光度的改變值與γ-谷氨酰轉肽酶3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：404nm副波長：660nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1如果△A/min>0.3,需用生理鹽水稀釋后測定，結果乘以稀釋起GGT升高，大量飲酒的病人，也可引起GGT升高。九、膽堿酯酶(ChE)檢測1.實驗方法：DGKC法本試劑用于定量測定人血清中膽堿酯酶的活性。丁酰硫代膽堿被膽堿酯酶水解為丁酸和硫代膽堿，硫代膽堿使六氰基高鐵酸鹽(Ⅲ)還原為六氰基高鐵酸鹽(Ⅱ),在405nm處連續監測吸光度的變化，其下降的速率與樣品中的CHE的活力成正比。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀4.操作步驟主波長：404nm副波長：660nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1若R1,R2混合為單試劑，在15-25℃可穩定兩小時。5.2本產品應在2-8℃避光保存。十、總膽汁酸(TBA)檢測血清中的膽汁酸(3α-羥類固醇)被3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特異性地氧化，生成3-酮膽汁酸及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(Thio-NADH)。而生成的3-酮膽汁酸在3α-羥甾醇脫氫酶(HSD)及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(NADH)作用下，生成膽汁酸及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)。如此，血清中微量的膽汁酸在多次酶循環過程中被放大，同時可使生成的Thio-NADH擴增。在405nm測定Thio-NADH吸光度變化值。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：404nm副波長：660nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1清晨空腹(隔夜忌食高脂)抽血為好，已知血清中的膽汁酸含量十一、α-L-巖藻糖苷酶(AFU)檢測血清中的AFU作用于底物2-氯-4-硝基苯-α-L巖藻糖苷，生成2-氯-4-硝基酚(CNP),在405nm波長測定CNP每分鐘吸光度變化率，3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：404nm副波長：700nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1本法線性上限為200U/L。如樣品測定值超過上限時，應將樣品5.3樣本中血紅蛋白≥200mg/L、甘油三脂≥1500mg/dl、維生素C≥4.4mg/L、膽紅素≥100mg/L被檢驗出會干擾測試方法。NH?+α-酮戊二酸+NADHGLDH谷氨酸+NAD+在340nm波長測定每分鐘NADH吸光度的變化率(△A/分鐘),3.儀器：東芝120-FR生化分析儀參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。腺苷在ADA的催化下生成次黃苷和NH3,后次黃苷和PiS產生次黃嘌呤，次黃嘌呤在水和O2參與下生成HO2,H2O2氧化4-AAP和EHSPT生成琨亞氨燃料，其在548nm有波峰。3.儀器：東芝TBA-12ORF全自動生化分析儀主波長：548nm副波長：700nm試劑量：R1=180ulR2=90ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2若試劑548nm處空白吸光度小于0.0500A時，請勿使用。腎功能檢測一、血清尿素(UREA)檢測脲酶-谷氨酸脫氫酶(Urease-GLDH)連續監測法。尿素被脲酶水解產氨，在NADH存在下，氨和α-酮戊二酸反應生成谷氨酸，NADH同時被氧化成NAD+,NADH的減少和樣品中尿素濃度成正比。在340nm處，測定NADH吸光度的下降速度，即可計算出樣本中尿素的含量。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀樣本量：S=2.0ul試劑量：R1=150ulR2=50ul參見生化檢驗東芝-120全自動生化分析儀操作規程、SOP文件枸櫞酸鈉(6.6mg/dL)抗凝劑對試驗結果有影響。二、血清肌酐(CREA)檢測內源性肌酸+H2O肌酸酶>肌氨酸+尿酸第二反應，樣品中的肌酐在肌酐酶的作用下生成肌酸。然后，在肌EMSE:N-乙基-N-(3-甲苯)-N-琥珀酰乙二胺3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：548nm副波長：700nm參見生化檢驗東芝-120全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。三、血清尿酸(UA)檢測1.試驗方法：尿酸酶-過氧化物(抗壞血酸)酶偶聯比色法第一反應如下，在抗壞血酸氧化酶(AOD)的作用下除去檢體中的2-抗壞血酸+O,AOD>2-脫氧抗壞血酸+2H,O化氫。過氧化氫又會與4-AAP和EMSE在過氧化酶的催化下，生成醌系有色物質。生成的醌亞胺色素與樣本中尿酸濃度成正比，在540nm波長尿酸+O2+2H?O尿酸酶→脲囊素+CO2+2H2O2EMSE:為顯色劑，N-乙基-N-(3-甲苯)-N琥珀酰乙二胺4-AAP:4-氨基安替比林3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀試驗溫度：37℃反應方向：上升參見生化檢驗東芝-120全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1草酸鉀、氟化鈉、EDTA、枸櫞酸鈉抗凝劑對試驗結果有影響。5.2樣本中血紅蛋白2g/L、脂肪200mg/dl、維生素C(血清)12mg/L、維生素C(尿液)200mg/L、白蛋白76g/L被檢驗出會干擾尿酸的測試。四、二氧化碳(CO2)檢測血漿(清)中的碳酸氫根在磷酸烯醇丙酮酸羥化酶(PEPC)的催化下和磷酸烯醇丙酮酸(PEP)反應，生成草酰乙酸和磷酸烯醇丙酮酸和蘋果酸脫氫酶(MDH)反應，生成蘋果酸，同時將NADH氧化成NAD+;在340nm波長處吸光度的降低與樣品中HCO;含量成正比。磷酸烯醇丙酮酸+HCO﹒PEPC>草酰乙酸+H,PO±草酰乙酸+NADH+H+MDH蘋果酸+NAD+3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：548nm參見生化檢驗東芝-120全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1假如血漿是樣本的最佳選擇，可使用肝素抗凝劑，枸櫞酸鈉、EDTA抗凝劑不適用。乙酰乙酸500mmol/L≤+8.8mmol/Ln-乙酰半胱氨酸20mmol/L≤-6.8mmol/L乙酰水楊酸60mg/dL≤-2.6mmol/L半胱氨酸20mmol/L≤-3.1mmol/L;5mmol/L≤-2.6mmol/L谷胱甘肽20mmol/L≤-5.9mmol/L組氨酸L-α-氨基-β-咪唑丙酸10ng/dL≤-13.9mmol/Lα-酮戊二酸10mg/dL≤-12.6mmol/L五、胱氨酸蛋白酶抑制劑C(Cys-C)檢測樣本中的CYS-C與試劑中的抗人CYS-C抗體膠乳顆粒試劑發生凝抗體存在時與樣品中CYS-C呈正比。通過測定特定波長的吸光度值，參照校準曲線即可計算出血清中CYS-C的含量。3.儀器：東芝120-FR生化分析儀試驗溫度：37℃反應方向：上升反應類型：兩點法主波長：546nm樣本量：S=8ul試劑量：R1=240ulR2=60ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1線性與樣本試劑比有密切關系，減少樣本含量會令線性上升，但六、尿微量白蛋白(MALB)檢測一定量的人尿液中的白蛋白與試劑中相應抗體(羊抗人白蛋白抗體)在液相中相遇，結合成抗原-抗體復合物，形成一定的濁度。該濁度的3.儀器：東芝120-FR生化分析儀主波長：340nm試劑量：R1=280ulR2=70ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。本試劑以獨特技術將抗體錨定在膠乳表面，樣本中的β2-MG與試β2-MG的含量成正比。3.儀器：東芝120-FR生化分析儀參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.3試劑吸光度值>0.9A,提示試劑可能已經變質，應去棄。5.4校正血清可分裝于帶蓋小離心管中保存于4℃。校正血清不可反八、微量總蛋白測定(24h尿蛋白)檢測使用鄰苯三酚紅的比色測定法。蛋白質和鄰苯三酚紅/鉬酸形成紅3.儀器：東芝120-FR生化分析儀主波長：578nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。測定糖尿病患者的尿蛋白，可能會出現假陰性的結果。螯合劑可能血脂檢驗一、膽固醇(TC)檢測1.試驗方法：膽固醇氧化酶(CHOD-PAP)法生成過氧化氫，生成的過氧化氫參與TRINDER反應，生成紅色醌亞胺色素。該色素在500nm波長處有特異吸收，且該色素的生成量與樣本中膽固醇酯+H?O膽固醇+脂肪酸膽固醇+O2膽固醇氧化酶H?O?+膽甾-4-3-酮H?O2+4-AAP+p-HBS過氧化物酶醌亞胺色素+H20注：4-AAP:4-氨基安替吡啉3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀。主波長：500nm副波長：700nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2試劑空白吸光度<0.08;試劑混濁或有絮狀物視為失效。二、血清甘油三酯(TG)檢測1.實驗方法：磷酸甘油氧化酶(GPO-PAP)法血清中甘油三酯經脂蛋白脂酶(LPL)水解為甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，然后在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用下氧化成磷酸二羥丙酮并生成H2O2,生成的過氧化氫參與TRINDER反應(H?O2),與底物4-氨基安替比林和ESPAS在過氧化物酶(POD)作用下，生成紅色亞醌化合物。紅色醌亞胺色素在甘油三酯+H?O甘油+脂肪酸甘油+ATP甘油-3-磷酸+ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+O2二羥丙酮磷酸+H?O22H?O2+4-氨基安替比林+4-氯酚醌亞胺+HCl+4H2O3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：500nm副波長：700nm試劑量：R=200ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。1.實驗方法：化學選擇抑制法(直接法)。本方法以液體雙試劑形式反應，R1中含聚陰離子和表面活性劑，樣本加入后，聚陰離子選擇性地與VLDL和LDL結合，使R2中膽固醇氧化酶(COD)、膽固醇酯酶(CEH)不能對VLDLC、LDLC起作用，從而選擇性地作用于HDLC,通過CEH-COD-POD作用，生成紅色醌亞胺色素。該色素在500nm波長處有特異吸收，且該色素的生成520nm吸光度的改變，吸光度的改變直接與高密度脂蛋白膽固醇的濃度CEH(化學修飾)COD(化學修飾)膽固醇+O2CHOD>膽甾烯酮+H?O2H2O?+HSDA+4-AAP+H+POD苯醌色素+4H?O3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：604nm副波長：700nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2血紅蛋白<500mg/L,膽紅素<40mg/L不影響測定結果。R1中含有聚陰離子與LDL形成復合物而遮掩屏蔽LDL-C,血清中HDL,VLDL及CM在表面活性劑作用下與酶試劑產生不完整的Trinder反應，H2O2在缺乏偶聯劑時不顯色。當加入R2時，對LDL有特異作用的表面活性劑能水解LDL,釋放出膽固醇，參與完整Trinder反應，在546nm處測定吸光度。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：604nm副波長：700nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2血紅蛋白<500mg/L,膽紅素<40mg/L不影響測定結果。五、載脂蛋白A1(apoA,)檢測形成不溶性免疫復合物，使反應液產生混濁，在340nm波長下測定反應液濁度，其高低可反映血清中apo-A1含量。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀試驗溫度：37℃反應方向：上升主波長：340nm副波長：700nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。六、載脂蛋白B(apoB)檢測血清中的apo-B分別和試劑中的特異性羊抗人apo-B抗體結合后，形成不溶性免疫復合物，使反應液產生混濁，在340nm波長下測定反應液濁度，其高低可反映血清中apo-B含量。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。七、脂蛋白(a)[Lp(a)]檢測血清中Lp(a)分別和試劑中的特異性羊抗人Lp(a)抗體結合后，形成不溶性免疫復合物，使反應液產生混濁，其濁度高低可反映血清中Lp(a)含量。3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀主波長：604nm副波長：804nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2校正血清可分裝于帶蓋小離心管中保存于4℃。校正血清不可反2.實驗原理：測定同型半胱氨酸的常用方法是高效液相色譜(HPLC),對還原型氨酸的測定方法還有偏振免疫分析(FPIA)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。在3-(g-羧乙基)膦氯化氫(TCEP)作用下，氧化型Hcy轉化為游離型Hcy,與共價底物s-腺苷甲硫氨酸(SAM)催化反應形成甲硫氨酸和s-腺苷同型半胱氨酸(SAH),SAH被SAHasa水解成腺苷和Hcy,形成的Hcy可以循環加入反應，從而放大了檢測信號，腺苷立即水解為次黃嘌呤和氨，氨在谷氨酸脫氫酶(GLDH)的作用下，使NADH轉化為輔酶(NAD),通過檢測NADH的變化速率可以求得標本中的Hcy濃度。注：Inosine,次黃(嘌呤核)苷3.儀器：東芝TBA-120FR全自動生化分析儀試驗溫度：37℃反應方向：下降主波長：340nm副波長：700nm參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2校正血清可分裝于帶蓋小離心管中保存于4℃。校正血清不可反微量元素測定一、微量元素(鈣、鎂、鐵、鋅、銅)基本原理是從空心陰極燈或光源中發出一束特定波長的入射光，在3.儀器：博暉5100微量元素分析儀參見博暉5100微量元素分析儀操作規程、SOP文件。二、微量元素(鉛、鎘)待測元素的化合物在高溫下進行原子化，被解離為基態原子。當銳3.儀器：博暉2100微量元素分析儀將血液加入專用稀釋液中，混勻后一次進樣，采用復合空心陰極燈自吸收背景扣除以波長283.3nm(鉛)、228.8nm(鎘),可同時測定血參見博暉2100微量元素分析儀操作規程、SOP文件。心肌酶譜檢驗一、血清肌酸激酶(CK)檢測1.實驗方法：酶偶聯速率法(DGKC)德國臨床化學學會(DGKC)和國際臨床化學學會(IFCC)推薦的連續監測法。肌酸激酶(CK)催化肌酸磷酸(CrP)與二磷酸腺苷(ADP)反應，產生三磷酸腺苷(ATP)與肌酸(Cr);偶聯己糖激酶(HK)及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)的催化反應。HK催化葡萄糖(GLU)與ATP反應，形成葡萄糖-6-磷酸(G6P),G6PD催化G6P氧化，形成6-葡萄糖內酯(6-PG)及NADPH。NADPH生成的速率代表CK活力。NADH在340nm處有特異吸收，通過測定NADH生成速率計算出CK活3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：405nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2如果樣本中CK活力>1200U/L時，需用無CK的混合血清稀釋后重新測定，結果乘以稀釋倍數?；旌涎逶?6℃孵育2小時后即不含CK。1.實驗方法：免疫抑制-NAC激活-酶偶聯速率法(DGKC)在樣本中加入含CK-M抗體的CK測定試劑，樣本中所有的CK-M亞單位的活性在5min反應延遲期內均被抑制，然后再用340nm波長連續監測NADPH生成速率，則代表CK-B亞單位活性。CK-MB由CK-M和CK-B亞單位組成?？笴K-M抗體完全抑制了CK-MM(肌酸激酶的主要活性部分)和CK-MB中的CK-M亞單位的活性。再檢測CK的活力為余下CK-B的活力，相當于一半CK-MB活力。所以將結果乘以2,為CK-MB的活力。3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：405nm試驗溫度：37℃樣本量：S=6ul試劑量：R1=120ulR2=30ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2如果樣本中CK活力>1000U/L時，需用無CK的混合血清稀釋后三、乳酸脫氫酶(LDH)檢測1.試驗方法：速率法(L→P,DGKC)德國臨床化學學會(DGKC)推薦的是連續監測法。LDH催化乳酸氧化為丙酮酸，同時將NAD+還原為NADH,引起340nm吸光度的增高。NADH的生成速率與標本中乳酸脫氫酶的活力成正比。3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：405nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。L-乳酸+NAD+LDH-1→丙酮酸+NADH+H+在上述反應中，NADH的生成速率與樣本中乳酸脫氫酶同工酶1(LDH,)活性成正比。通過在340nm波長處監測吸光度的上升速率，即能抑制LDH2、LDH3、LDH和LDH;的活性，測定結果為LDH。3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀副波長：405nm參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。五α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)檢測1.試驗方法：速率法(DGKC)α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)測定的原理是酶速率法。在這個反應過程中，α-HBDH催化2-氧化丁酸還原成2-羥基丁酸，同時NADH氧化成NAD+,引起340nm吸光度的降低，吸光度的改變直接與2-氧化丁酸+NADH+H+α-HBDH→2-羥基丁酸+NAD+3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：405nm試驗溫度：37℃參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1如果試劑變混濁或試劑空白吸光度值(340nm)大于1.0,表示試胰腺酶譜檢驗一、血清α-淀粉酶(AMY)檢測1.實驗方法：速率法(EPS-G7)AMS測定采用酶動態比色測定法。所用底物為亞乙基-a,D-麥芽七糖苷-對硝基苯酚(E-pNP—G)。樣品中a—淀粉酶分解底物E-pNP-G,生成對硝基苯酚(pNP),在410nm處比色，吸光度的上升速率與樣品中a-淀粉酶的活力成正比。亞乙基-G?pNP3-淀粉酶>亞乙基-Gx+Gy-pNP葡萄糖+pNP-葡萄糖3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：404nm副波長：700nm試驗溫度：37℃樣本量：S=3.5ul試劑量：R1=125ulR2=45ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.3如果△A/min>0.3,需用生理鹽水稀釋后測定，結果乘以稀釋二、血清脂肪酶(LPS)檢測本試劑采用1,2-鄰-二月桂宗甘油-3-戊二酸-(6’-甲基試鹵靈)1,2-鄰-二月桂宗甘油-3-戊二酸-(6’-甲基試鹵靈)-酯在570nm波長下，根據產物紅色的甲基試鹵靈生成速率測定脂肪酶3.儀器：東芝120-FR生化分析儀主波長：570nm副波長：700nm試驗溫度：37℃樣本量：S=3.0ul試劑量：R1=200ulR2=100ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2底物釋放的對硝基苯酚是有毒的，不要吞咽或吸入其蒸汽，避免5.3如果△A/min>0.3,需用生理鹽水稀釋后測定，結果乘以稀釋常量元素檢驗一、血清鉀(K,Na,Cl)檢測1.實驗方法：離子選擇電極法(間接法)電位測量電路的一側為測量電極(即離子選擇電極),另一側為參比電極，當被選擇離子與ISE電極膜接觸反應時，電位計電路中的電動勢3.儀器：東芝TBA-12ORF全自動生化分析儀參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。櫞酸鈉、EDTA抗凝劑不適用。5.3樣品采集后應盡快測定，否則樣品PH值會發生變化。5.6為了保證電極的穩定性，電解質分析儀需24小時開機。血清中鈣離子在中性溶液中與偶氮胂Ⅲ結合產生紫藍色復合物，該復合物在660nm波長有最大吸收，其吸收強度與血清鈣離子的含量成正3.儀器：東芝TBA-12ORF全自動生化分析儀主波長：660nm樣本量：S=3ul試劑量：R=200ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。糖尿病檢驗一、葡萄糖(GLU)檢測1.實驗方法：葡萄糖氧化酶(GOD-PAP)法樣本中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下生成過氧化氫，生成的過氧化氫參與TRINDER反應，生成紅色醌亞胺色素。該色素在β-D-葡萄糖+H?O+O2>D-葡萄糖酸+H,O;H2O?+4-AAP+對-羥基苯磺酸醌亞胺色素+H,O試驗溫度：37℃主波長：500nm反應方向：上升副波長：700nm試劑量：R=200ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2應采用氟化鈉的樣本管收集，以防止細菌污染和糖酵解，血清或4℃可穩定24小時、30℃可穩定4小時，結果的準確性依賴于儀器的校正5.3樣本中含有黃疸、脂質時，應去除干擾吸光度后，再計算葡萄糖含量。去除干擾吸光度的方法是：樣本10μL加生理鹽水1.5mL,讀取其吸光度(340nm)值，然后將樣本吸光度減去干擾吸光度(手工方法或半自動方法)。二、糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測用高效微粒離子交換劑做固定相，以具有一定PH值的緩沖溶液做流參見BIO-RADD-10TMT糖化分析儀操作規程、SOP文件。5.1注意更換新試劑后一定要定標。5.2注意儀器保養。三、糖化血清蛋白(GSP)檢測1.實驗方法：果糖胺法/NBT法2.實驗原理血清中的糖化血清蛋白是一種大分子酮胺類化合物。在堿性條件下用比色法在540nm(530-550nm),以糖化血清蛋白做校準物測出反應中甲月替的生成量從而得出血清中糖化血清蛋白(果糖胺)的濃度。3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀4.操作步驟：4.1項目基本參數：主波長：540nm副波長：700nm試驗溫度：37℃測定方法：終點法反應方向：上升樣本量：S=25ul試劑量：R=250ul4.2儀器操作步驟：參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。5.1試劑與樣本用量可按比例增減，計算公式不變。5.2校正血清可分裝于帶蓋小離心管中保存于4℃。校正血清不可反5.3如儀器內無指定波長，選擇波長接近的數值輸入。風濕免疫檢驗一、抗“O”溶血鏈球菌(ASO)檢測樣本中的抗鏈球菌溶血素O(ASO)與超敏化的抗ASO抗體膠乳顆粒試劑反應，形成免疫復合物，在波長500nm-600nm處檢測其濁度變化，其變化程度與樣本中的抗鏈球菌溶血素O(ASO)含量成正比。3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀。試驗溫度：37℃反應方向：上升主波長：570nm副波長：700nm試劑量：R1=200ulR2=40ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。5.2校正血清可分裝于帶蓋小離心管中保存于4℃。校正血清不可反二、類風濕因子(RF)檢測樣本中的RF與膠乳顆粒超敏化的變性人IgG抗體反應，出現凝集反應，在波長570nm(500～600nm)處檢測其吸光度的變化，其變化程度與樣本中的RF含量成正比。3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：570nm副波長：700nm樣本量：S=2.0ul試劑量：R1=200ulR2=40ul參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。三、C反應蛋白(CRP)檢測樣本中的CRP與抗CRP抗體膠乳顆粒試劑反應，形成免疫復合物，在波長340nm處檢測其濁度變化，其變化程度與樣本中的CRP含量成正CRP抗原+CRP抗體-→抗原抗體復合物3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm參見生化檢驗東芝120-FR生化分析儀操作規程、SOP文件。免疫球蛋白和補體測定一、免疫球蛋白IgG檢測該檢驗基于IgG抗體與IgG抗原間的反應，形成免疫復合物，在波長340nm處檢驗其濁度變化，其變化程度與樣本中的IgG含量成正比。IgG抗原+IgG抗體→IgG抗原抗體復合物3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm試劑量：R1=250ulR2=50ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。二、免疫球蛋白IgA檢測該檢驗基于IgA抗體與IgA抗原間的反應，形成免疫復合物，在波長340nm處檢驗其濁度變化，其變化程度與樣本中的IgA含量成正比。IgA抗原+IgA抗體→IgA抗原抗體復合物3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm試劑量：R1=250ulR2=50ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。三、免疫球蛋白IgM檢測該檢驗基于IgM抗體與IgM抗原間的反應，形成免疫復合物，在波長340nm處檢驗其濁度變化，其變化程度與樣本中的IgM含量成正比。IgM抗原+IgM抗體→IgM抗原抗體復合物3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm試劑量：R1=250ulR2=50ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。四、補體C3檢測疫復合物。在340nm波長處檢測其濁度的變化，其變化程度與樣本中的補體C3含量成正比。C3抗原+C3抗體→抗原抗體復合物3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。五、補體C4檢測疫復合物。在340nm波長處檢測其濁度的變化，其變化程度與樣本中的補體C4含量成正比。C4抗原+C4抗體→抗原抗體復合物3.儀器：東芝TBA-120RF全自動生化分析儀主波長：340nm副波長：700nm試劑量：R1=250ulR2=50ul參見東芝TBA-120FR全自動生化分析儀操作規程、SOP文件。內分泌激素檢驗甲狀腺激素檢測【操作步驟】1開機前檢查a查看電源是否正常安全通電。b推主機下部的前門，打開后檢查洗凈水與分注液的用量是否滿足當日用量廢試樣杯與廢吸嘴是否丟棄。2開機a更換75%酒精，放置基質液b打開電腦主機及AIA-1800電源，點擊主頁面進入root。c試樣吸嘴的設置及酶標志試劑，檢體稀釋液的設置，按主機操作版Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩，將標志面朝前。酶標志試劑Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩，將標志面朝前。d試劑杯的設置，按主機操作版面的CupSorter鍵，LED指示燈變為綠色，拉開分類器抽屜將試劑托盤設置在分類器托盤上，將分類器抽屜推到底3開機日檢。5測定完畢后，按主機操作版面的CupSorter及Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩及分類器抽屜，收集試劑放入冰箱，更換基質液，放置75%酒精。6點擊關機，待窗口消失，關閉AIA-1800電源，關閉電生殖激素測定【操作步驟】1開機前檢查2開機a更換75%酒精，放置基質液b打開電腦主機及AIA-1800電源，點擊主頁面進入root。c試樣吸嘴的設置及酶標志試劑，檢體稀釋液的設置，按主機操作版面Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩，將酶標志試劑_(,檢體稀釋液設置在試劑托架上，將條形d試劑杯的設置，按主機操作版面的CupSorter鍵，LED指器抽屜推到底3開機日檢。器抽屜推到底3開機日檢。5測定完畢后，按主機操作版面的CupSorter及Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩及分類器抽屜，收集試劑放入冰箱，更換基質液，放置75%酒精。6點擊|關機，待窗口消失，關閉AIA-1800電源，關閉電腦及主腎上腺激素測定一、尿液中17-羥質類固醇測定1.實驗方法：紫外分光光度法2.實驗原理：樣本經高嶺土處理，并通過中性吸附樹脂，17羥類固醇被吸附，先洗掉干擾物質，再洗脫17類固醇，用Porter-silber反應定量檢測17羥類3.儀器：752紫外可見分光光度計4.操作步驟：p.m)5分鐘，然后將上清液倒入專用移液管中，加入試劑二2ml,混勻后離心(4200r.p.m)5分鐘。2.色譜柱分離：將色譜柱準備好后，將上清液標本倒入，待其自然流過至柱內無液體，然后依次是10ml純水，后加入6ml洗脫液并收集。3.比色分析：分別以試劑空白，校準品，樣本空白，樣本標記四管，然后準備純水一管，按照說明加入洗脫液，試劑A,工作試劑。然后在37度溫浴90分鐘，分別以純水調零在370nm,410nm和450nm比色并記4計算：按照17-OH計算公式計算。樣本被酸水解，并通過中性吸附樹脂，17酮類固醇被吸附，先洗掉水溶性酚類干擾物，再洗脫17酮類固醇，用Zimmermann反應定量檢測3.儀器：752紫外可見分光光度計1.樣本制備：將標本5ml和高濃度HCL,試劑一1滴混勻一管，在沸水中溫浴10分鐘。2.色譜柱分離：將色譜柱準備好后，將上清液標本倒入，待其自然流過至柱內無液體，然后依次是10ml試劑二，2ml純水，后加入4ml洗按照說明加入試劑三洗脫液，試劑A,試劑B,試劑C。然后(3200r.p.m)離心。在520nm處以試劑空白調零比色。4.計算：按照17-KS計算公式計算。2.一些樣本最終提取物偶爾會出現暗褐色，導致高值結果，應按校1.實驗方法：紫外分光光度法2.實驗原理：樣本通過陰離子交換樹脂后，VMA被吸附，先洗掉干擾物，再洗脫香草扁桃酸，用碘酸鹽將VMA氧化成香草醛顯色后測定其吸光值。3.儀器：752紫外可見分光光度計4.操作步驟：1.樣本制備：將標本1ml和試劑一1ml混勻。2.色譜柱分離：將色譜柱準備好后，將上清液標本倒入，待其自然流過至柱內無液體，然后依次是2ml純水，5ml試劑2。后加入6ml試劑3并收集。3.比色分析：分別以試劑空白，校準品，樣本空白，樣本標記四管，按照說明加入試劑三洗脫液，試劑A,試劑B,試劑C。在360nm處以4.計算：按照VMA計算公式計算。5.注意事項：1.如果樣本儲存在過量鹽酸中，應用氫氧化鈉調節至6.5-7.5。2.一些步驟完成后，測試可以中斷，將試管密封于2-8度最長可保存24小時。胰激素測定【操作步驟】1開機前檢查a查看電源是否正常安全通電。b推主機下部的前門，打開后檢查洗凈水與分注液的用量是否滿足當2開機a更換75%酒精，放置基質液b打開電腦主機及AIA-1800電源，點擊主頁面進入root。Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩，d試劑杯的設置，按主機操作版面的CupSorter鍵，LED指器抽屜推到底3開機日檢。4日檢通過后，進行標本檢測，在樹形菜單上進入界面，5測定完畢后，按主機操作版面的CupSorter及Reagent/Tip鍵，LED指示燈變為綠色，打開試劑吸嘴護罩及分類器抽屜，收集試劑放入冰箱，更換基質液，放置75%酒精。6點擊關機，待窗口消失，關閉AIA-1800電源，關閉電腦及主臨床免疫學檢驗傳染病的免疫學檢驗【操作】3.加HAV抗原及酶標記抗體，每孔先加入50ulHAV抗原，再次加入50ul酶加樣，將待檢本用洗滌液按1:500稀釋，每孔(已預先用抗人μ鏈抗體包被)加入50μ(同時設陰、陽對照)再加入50ul加速劑，水平快速診斷1min,置37℃20min。5.洗滌同步驟2。【結果判定】用酶聯儀測定波長452nm,讀吸光度A值，待測樣本A值/陰性對照A值≥2.1時為陽性。(一)ELISA法測定HBsAg【操作】1.取包被的微孔反應條，固定于塑料框架上，加標本每孔50ul,陰性與陽性對照每孔各50ul,設2孔。留1孔做空白對照。各加入酶標記抗HBs每孔50ul,空白對照不加，置37℃水浴30min。3.加酶底物/色原溶液每孔50ul,37℃10min,加終止液2mol/4.用酶聯儀與450nm波長處讀取吸光度，以空白孔校零點，分別測參考波長為630nm。1為陽性；②S/CO以≥1.0為陽性。S/CO≤1.0為陰性。陽性對照平均A值應>0.5;陰性對照平均A值應<0.1。陰性對照A值如小于0.05,按0.05計算。(二)ELISA法測定HBsAb【操作】1.取包被的微孔反應條，固定于塑料框架上，加標本每孔50ul,陰性與陽性對照每孔各50ul,設2孔。留1孔做空白對照。各加入酶標記抗HBs每孔50ul,空白對照不加，置37℃水浴30min。3.加酶底物/色原溶液每孔50ul,37℃10min,加終止液2mol/LH?SO.每孔50ul。4.用酶聯儀與450nm波長處讀取吸光度，以空白孔校零點，分別測參考波長為630nm。1為陽性；②S/CO以≥1.0為陽性。S/CO≤1.0為陰性。陽性對照平均A值應>0.5;陰性對照平均A值應<0.1。陰性對照A值如小于0.05,按0.05計算。(三)ELISA法測定HBeAg及抗HBe【操作】1.取出已包被抗HBe的反應板或微孔反應條。2.檢測HBeAg時，每孔加被檢血清100ul;檢測抗HBe時，每孔加被檢血清和中和試劑各50ul,均設陰性，陽性對照，置37℃水浴90min,洗4次。3.加HRP-抗HBe抗體。用含10%正常人混合血清的PBS稀釋HRP標記抗HBe,每孔加100ul37℃90min,洗4次。4.加過氧化脲/TMB底物溶液，每孔100ul,37℃呈色20min,加50ul終止液。用酶聯儀與450nm波長測吸光度A。四、HBcAB抗體測定【操作步驟】4.2配液：濃縮洗滌液配置前充分搖勻(若有晶體應充分溶解),濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1:9稀釋后使用。4.6溫育：37℃溫育25分鐘，室溫平衡5分鐘。4.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完后扣干(每次應保持30-60秒的浸泡時間)。4.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450nm/630nm測定各孔OD值。(用單波長測定時需設空白對照一空，30分鐘內完成測定，并記錄結果)。5.1臨界值(CO)的計算：待測血清為原倍時，臨界值=陰性對照孔OD均值N×0.2待測血清為非原倍時，臨界值=陰性對照孔OD均值N×0.55.2結果判定：樣品OD值S/CO≤1者為HBeAb陽性樣品OD值S/CO>1者為HBeAb陰性6注意事項三、丙型病毒性肝炎檢測【操作】1.加樣將已包被HCV抗原的板條固定于板架上。每次試驗設陰性對照2孔，陽性對照2孔，分別加入陰，陽性對照100ul;設空白對照1孔，2.溫育振蕩混勻，置37℃溫育30min。重復洗6次，在吸水紙上拍干。4.加酶結合物每孔加入酶結合物100ul,空白對照不加。5.溫育置37℃溫育20min。6.洗滌棄去孔內酶結合物，重復洗6次(同操作步驟3)。7.顯色每孔加入酶底物/色原溶液100ul,振蕩混勻，置37℃溫育8.終止每孔加入終止液50ul,輕輕混勻。在單波長450nm或雙波長450nm/630nm下，用空白校零，再讀取各孔吸光度值。【結果判定】1.臨界值CO計算CO=0.12+陰性對照平均A值2.判定待測樣本A值≥CO為抗HCV抗體陽性；<CO為抗HCV抗體陰性3.要求陽性對照A值應≥0.50,陰性對照A值<臨界值【操作】2.加樣品：取出包被板，做好標記，留一空白對照，其余加入陰性對照3孔，陽性對照2孔各50ul/孔及待測標本50ul/孔于相應的反應板中，空白對照不加，將反應