植物組織培養取一部分植物組織,在無菌的條件下接種在培養基上,給予一定的溫度和光照,使之產生愈傷組織,或進而生根發芽,培養為成熟植株的技術。一般不需要光2(2)細胞分化：在植物的個體發育過程中，細胞在________、________和生理功能上出現_____________的過程。全能性形態結構穩定性差異1．植物組織培養的基本過程(1)理論基礎：植物細胞的__________。3(3)基本過程①愈傷組織：由離體的植物組織或細胞經

形成的一種

的活的薄壁細胞團組成的新生組織。②脫分化：又叫去分化，是由__________的植物組織或細胞產生__________的過程。③再分化：愈傷組織繼續培養，重新分化成________等器官的過程。脫分化相對沒有分化高度分化愈傷組織根或芽4植物組織培養的條件無菌環境一定的溫度一定的光照含有全部營養成分的培養基防止外植體帶菌、保證培養基及接種器具徹底滅菌、嚴格遵守無菌操作規程適時MS培養基適量空氣適合的PH植物激素比例合適適宜的外植體5MS培養基配方表：由

、

和

三大成分組成大量元素微量元素有機成分其特點是無機鹽和離子濃度較高，是較穩定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養分的數量和比例合適，能滿足植物細胞的營養和生理需要6MS培養基中各成分的作用7植物激素和人工合成的植物激素植物中存在的天然激素都有相應的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應分解它的酶，所以作用和存在的時間長，作用效果明顯。8大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流9生長素和細胞分裂素在植物組織培養中的相互作用誘導芽生成愈傷組織繼續生長而不分化誘導根生成102.萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解，芐基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L鹽酸溶解。也可配成母液冰箱中保存。3.發芽培養基：3000mLMS培養基+含1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g瓊脂，再加蒸餾水至4000mL，混合均勻，加熱至瓊脂融化后，通過三角漏斗分裝至100mL三角瓶中，每瓶40mL，共100瓶。三角瓶加上封口膜后1kg壓力下在滅菌鍋中滅菌20min。114.生根培養基：1000mLMS培養基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g瓊脂，再加蒸餾水至2000mL，混合均勻，加熱至瓊脂融化后，分裝至100mL的三角瓶中，每瓶40mL，共50瓶。滅菌操作同步驟3。三角瓶加上封口膜后1kg壓力下在滅菌鍋中滅菌20min12菊花組織培養操作步驟:131、配制MS培養基⑴配制各種母液→配制培養基→滅菌⑵培養基由大量元素、微量元素和有機成分組成在菊花組織培養中，可以不添加植物激素，因為其莖段培養比較容易142、外植體消毒若使用自然生長的莖進行組織培養，則可取一段莖在70%的乙醇中浸泡10分鐘，在放入5%的次氯酸鈉溶液中浸泡5分鐘，然后用另一次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘，最后在超凈臺中用無菌水沖洗，將莖的切段培養在生芽培養基中。外植體上殘留的雜菌會和外植體爭奪培養基中的營養物質，并且產生大量對外植體有害的物質，導致外植體死亡，所以要先消毒再接種。一般選擇未開花植株的莖上部新萌發的側枝153、接種⑴將已消毒的外植體插入培養基，形態學上端朝上。⑵在酒精燈旁，每個錐形瓶接種2-3外植體。注意事項：①注意無菌操作②注意別燙傷植物材料③注意植物材料插入方向164、培養⑴在日光燈下保持18-25℃培養，每天的光照不少于14.5h⑵先生芽培養，然后再生根培養2～3周后將生長健壯的叢狀苗在無菌條件下一個個轉入生根培養基中，在上述條件下繼續培養。注意事項：①無菌箱中培養并定期消毒②如果培養順序顛倒，則不容易誘導芽的形成③一般情況下，愈傷組織形成不需要光，試管苗形成后需要見光培養176、定植苗健壯后移至土中培養（定植），即可長成植株并開花。5、移栽鍛煉將生根的苗從錐形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上的濕度，2-3天后打開玻璃罩逐漸降低濕度進行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度為止。18例題：右圖是實驗室進行植物組織培養的一般過程。請回答下列問題：

⑴下列設備及用品中,該實驗無需使用的是

.A．酒精燈B．滅菌鍋C．封口膜D．玻璃刮刀⑵培養過程中涉及的培養基有:

培養基、

培養基、

培養基。與微生物培養基相比,植物組織培養一般要添加

、

作為生長調節劑。⑶離體組織接種后脫分化形成

,在不同配比激素的誘導下,依次經歷

和生根苗兩個階段,形成試管苗。定植前還需要將試管苗移栽至草炭土或

中繼續培養,其目的是

。⑷下表所列該實驗設備、用品及材料與其滅菌或消毒方法的對應關系中,錯誤的是

。三角瓶高壓蒸汽滅菌B.培養基G6玻璃砂漏斗過濾C.超凈臺紫外燈照射D.外植體70%酒精和5%次氯酸鈉先后浸泡DMS發芽生根NAABA愈傷組織從狀苗蛭石濕度鍛煉/煉苗(適應土壤種植)B19[判一判]⑴實驗過程中先使莖段生根,再使生根苗長葉⑵脫分化和再分化過程中都需要植物激素發揮作用

⑶因植物細胞都具有全能性,故菊花組織培養實驗中選材不會影響實驗結果⑷野生菊花苗段在接種前要用酒精和次氯酸鈉溶液進行消毒,再用自然水清洗。201、概念：取一部分植物組織，在

的條件下接種在培養基上，給予一定的

和

，使之產生

，或進而生根發芽，培養為成熟植株的技術。2、原理：

。植物組織培養技術無菌溫度光照愈傷組織植物細胞的全能性213、培養基⑴MS培養基：由

、

和

組成。可將各成分分別配成濃度為配方的5～10倍的

，用時稀釋⑵發芽培養基：由MS培養基、

溶液、

溶液、蔗糖和瓊脂，再加水混合均勻。用

法滅菌后待用⑶生根培養基：由MS培養基、

溶液、蔗糖、瓊脂和水混合⑷培養基中植物激素的配比與細胞的分化：大量元素微量元素有機成分母液BANAA高壓蒸汽滅菌誘導根的形成誘導芽的形成愈傷組織不分化NAA22菊花組織培養操作步驟:消毒無菌水1酒精燈火焰生芽封口膜生芽光照叢狀苗生根無菌生根草炭土或蛭石濕度鍛煉定植23植物細胞全能性MS培養基、生根、生芽培養基材料種類、營養、激素、pH、溫度、光照體細胞降低濕度鍛煉70%乙醇、5%次氯酸鈉浸泡，無菌水沖洗24此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環境為液體有機物營養環境，而不是能體現其整個植物體的光能自養。在培養過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養的能力，是由細胞到一個個體的演變過程1、高等植物是光能自養型生物，為什么在植物組織培養過程中還需要提供有機物培養基？2、培養過程中為什么需要進行光照思考:25⑴培養基的滅菌；（

）⑵外植體的消毒；（

）⑶接種的無菌操作；（

）⑷無菌箱中的培養；（

）⑸移栽到草炭土或蛭石中進行濕度鍛煉。（

）1、在整個植物組培的操作過程中，是如何來實現無菌環境的？高壓蒸汽滅菌酒精、次氯酸鈉超凈臺酒精燈火焰旁無菌箱定期消毒生存環境消毒思考:261、外植體帶菌2、培養基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環境不清潔污染途徑27植物組織培養用的培養基，含有植物生長發育所需要的各種營養物質，這些營養物質同樣為細菌等微小的生物提供了適合的營養。在這種培養基上，細菌等微小的生物比植物細胞具有更強的新陳代謝能力，它們比植物細胞生長、繁殖得更快，而且它們會產生毒素，使培養的植物細胞很快中毒死亡。因此，植物組織培養要想取得成功，必須有效地防止細菌等的污染，保證培養材料、培養基、培養用具完全無菌。為了達到這一要求，就要在植物組織培養過程中進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。282、激素的用量比例對細胞分裂和分化的影響促根分化，抑芽形成促芽分化，抑根形成促進愈傷組織生長植物組織培養時，使用人工合成的激素，還是植物中存在的天然激素？為什么？人工合成的激素，原因：植物中存在的天然激素都有相應的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應分解它的酶，所以作用和存在的時間長，作用效果明顯。29【典例】辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫藥工業等領域。辣椒素的獲得途徑如圖。⑴圖中①和②分別表示辣椒組織培養中細胞的

和

過程。⑵圖中培養外植體的培養基中常用的凝固劑是

。培養基中的生長素和細胞分裂素用量的比值

(選填“高”或“低”)時,有利于芽的分化。對培養基徹底滅菌時,應采取的滅菌方法是

。⑶圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數是

，除此以外，還需用到

。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時,常用的酶是纖維素酶和

。脫分化再分化瓊脂低高壓蒸汽滅菌70%果膠酶5%次氯酸鈉溶液302、下面是寧夏農林科學院進行蘋果試管苗培養的一般過程:⑴請填寫a～c所表示的內容。a.

；b.

；c.

。⑵實驗室一般使用保存的培養基母液來制備MS固體培養基,配制母液時,

、

和有機物要濃縮5～10倍。⑶該過程中a、c的啟動關鍵在于培養基中所加

和

的濃度配比。⑷離體的植物細胞能發育成完整植株的原因是

。⑸醋桿菌是生產蘋果醋必用的菌種,可以從食醋中分離得到純化的醋桿菌。擴大培養醋桿菌時,一般采用平板倒置培養,原因是

。脫分化愈傷組織再分化大量元素微量元素生長素細胞分裂素植物細胞具有全能性防止培養皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染313、為了探究6--BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某研究小組在MS培養基中加入6--BA和IAA，配制成四種培養基(見下表)，滅菌后分別接種數量相同、生長狀態一致、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培養一段時間后，統計再生叢芽外植體的比率(m)，以及再生叢芽外植體上的叢芽平均數(n)，結果如下表。回答下列問題：⑴按照植物的需求量，培養基中無機鹽的元素可分為________和__________兩類。上述培養基中，6-B-A屬于___________類生長調節劑。⑵在該實驗中，自變量是___________，因變量是________________________，⑶從實驗結果可知，誘導叢芽總數最少的培養基是________號培養基。⑷為了誘導該菊花試管苗生根，培養基中一般不加入________(填“6--BA”或“IAA”)。大量元素微量元素細胞分裂素IAA的濃度菊花再生叢芽外植體的比率和外植體上的叢芽平均數16--BA32⑴制作泡菜時，為縮短發酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用無菌蒸餾水稀釋后，再用____________蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。下圖所示的劃線分離操作，正確的是________。接種環B2017/4回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關的問題：⑵泡菜腌制過程中，會產生有機酸、醇類和亞硝酸鹽，其中醇類是由_____________進行厭氧呼吸產生。亞硝酸鹽對人體有害，為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取要硝酸鹽，與___________________發生重氮化反應，再與N-1-萘基乙二胺偶聯，形成紫紅色產物。然后用光程為1cm的____________，在550nm光波下測定光密度值，與由一定濃度梯度亞硝酸鈉制作的_________________比對，計算樣品中亞硝酸鹽的含量。⑶已知乳酸菌中的亞硝酸還原酶能降解亞硝酸鹽。在一定的腌制時間內，隨著腌制時間的延長，泡菜中亞硝酸鹽含量逐漸降低，是由于在厭氧和_____________環境下亞硝酸鹽被亞硝酸還原酶降解。假絲酵母對氨基苯磺酸比色杯標準曲線酸性33果膠酶細胞破裂，細胞內營養物質外流使乳酸菌快速獲得營養物質喜好氧的不耐酸涂布分離稀釋酸堿指示劑乙醇2020/134腐爛的水果中含產果膠酶的微生物較多涂布分離（或劃線分離）水果組織軟化疏松及細胞受損95%乙醇提高果膠酶的穩定性固定化的方法固定化所用的介質2019/435達到設定的溫度或壓力值抽濾將淀粉分解成糖?作為碳源C水解圈直徑與菌落直徑上清液2018/11362018/4回答與果膠、淀粉等提取和利用有關的問題：某植物富含果膠、淀粉、蛋白質和纖維素成分。某小組開展了該植物綜合利用的研究。⑴果膠提取工藝研究結果表明，原料先經過一段時間沸水漂洗的果膠得率（提取得到的果膠占原料質量的百分率）顯著高于常溫水漂洗的果膠得率，最主要原因是沸水漂洗_______（A．有助于清洗雜質和去除可溶性糖

B．使植物組織變得松散

C．使有關酶失活

D．有利細胞破裂和原料粉碎制漿）。⑵在淀粉分離生產工藝研究中，為促進淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝劑（乳酸菌菌液），其菌株起重要作用。為了消除絮凝劑中的雜菌，通常將生產上使用的菌液，采用_____________________________，進行單菌落分離，然后將其_____________，并進行特性鑒定，篩選得到純的菌株。⑶在用以上提取過果膠和淀粉后的剩渣加工飲料工藝研究中，將剩渣制成的汁液經蛋白酶和纖維素酶徹底酶解處理后，發現仍存在渾濁和沉淀問題．可添加__________________使果膠徹底分解成半乳糖醛酸，再添加_______________，以解決汁液渾濁和沉淀問題。⑷在建立和優化固定化酶反應器連續生產工藝研究中，通常要分析汁液中各種成分的濃度和所用酶的活性，然后主要優化各固定化酶反應器中的_____________________（答出2點即可）、反應液pH和酶反應時間等因