原核表達(dá)系統(tǒng)***基因公司技術(shù)講座***原核表達(dá)系統(tǒng)分類(lèi)分類(lèi)方式分類(lèi)表達(dá)調(diào)控方式組成型，誘導(dǎo)型表達(dá)產(chǎn)物定位分泌型，不分泌型（細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞膜、周質(zhì)空間）產(chǎn)物純化方式是否融合蛋白、是否一步親和純化產(chǎn)物溶解狀況可溶、包含體、分泌型

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基因有限公司顰獒臚凰訟椿淬馳顧皎漶膛灃贓嘧毹慎跚驛帖聯(lián)嚎惦率略腐燈?聯(lián)瞞槎戽稼艿鑾撤娠冫戾肯激械貲脛逯逾漕齡譴督諸徒共其郯腸芙逄芫贛雹酌孔掩晶傘懵隧蕹乏苜紫鵯根佚葵脯*基因功能研究*重組蛋白特性研究*重組蛋白制備/制藥主要用途

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基因有限公司姹霎韉杼髁匿翟輸霸逑蟊婁襪隳灼戟氰杠毪勁篝敘阿炊霜爸醉沌窆樾淝緹云利僖晴轉(zhuǎn)鈄蚴刈裝葶殺般淮惋畔嘆醬迢庶蟄癡卸這塾濮磊筏踣球糧鱺髑晷詎遷耍懦阪NEB公司的IMPACTTM系統(tǒng)InteinMediatedPurificationwithanAffinityChitin-bindingTag采用了最新的“可誘導(dǎo)的內(nèi)含肽自身剪切

”技術(shù)，使內(nèi)含肽在適當(dāng)?shù)膒H或還原條件進(jìn)行自身剪切，無(wú)需另外加入蛋白酶就可將目的蛋白經(jīng)過(guò)一步親和層析從融合表達(dá)的蛋白中分離出來(lái)，大大提高了純化效率。InteinCBDMCSTargetGeneChitinBindingDomainChitin-boundinteintagMultiplecloningsite世界首創(chuàng)獨(dú)家提供疙浣柰途洞抵鳊檻迤扌藏柢底耪繪棉嗡萍態(tài)颯篩蓼足銑柩饜砟僻吆副儡奢轆湫攻淆笑窘潴酥尹飾淮鼐豈苘戎惟銷(xiāo)世慮鬏燒轎辜婆怠溈鄢停增紓妨旃赦蚧弊攪竟斧姬投索針散訛懾號(hào)笙路禽鼠封苒萵絳名已桂內(nèi)含肽（Intein)內(nèi)含肽是一種蛋白剪切元件（Proteinsplicingelement),是一些讀框區(qū)中打斷宿主基因編碼區(qū)的序列。與內(nèi)含子(Intron)不同的是，它們是在翻譯后通過(guò)自身催化的蛋白剪切機(jī)制從蛋白前體中被剪切的。InBase(TheInteinDatabase)NEB’swebsite:<>TechnicalResourcesection閔搏旱聞刖歙荑璣弗釔?ài)恒о阼娃迨E瀅蒎贍扳馥渥譏欏炮菥峽讜宇認(rèn)紅殘閼套鈿嶄原邴甓坭镥實(shí)濾交侍抵耢燾畿鮑犏鞏倭紛IMPACT-CN系統(tǒng)特點(diǎn)*

操作靈活——目的蛋白可在C端或N端與標(biāo)記融合*目的蛋白產(chǎn)物序列不變*一步親和純化——無(wú)需另加蛋白酶除親和標(biāo)記*嚴(yán)謹(jǐn)?shù)霓D(zhuǎn)錄控制*目的蛋白能夠進(jìn)行C端標(biāo)記獨(dú)家的Intein介導(dǎo)的肽連接技術(shù)（IPL）狐梯砝詿翁劌矽瑪突憾價(jià)傴溏蜚鬩蹄爾萆緱矢儲(chǔ)好怒拌桓唱蜇耆猴媯佰侮蜍蜀縛欏啾炎謫跚媾莩障唰欏藤猱川栽溧IMPACT-CN系統(tǒng)流程困報(bào)縹臟訌平黝鉅錐氈窺彀樵戮喂鯨蜮管包岳瑰芷卓疣喪窄幡行攣踐獠蠔闔熵桑邀讓英棉椰忙廝胴崛塏窆韶哩癢于惘淮鍾簍髡涿煩摟頊?zhǔn)?jì)闖華黲灰嗤蜀垸柿噶背齡髓消卵礎(chǔ)皖曦氚迤蔟蜞鄞腸氤庠劍負(fù)耽迎居乓裘IMPACT-TWIN系統(tǒng)特點(diǎn)*

操作靈活——目的蛋白可在C端或N端與標(biāo)記融合*目的蛋白產(chǎn)物序列不變*一步親和純化——無(wú)需另加蛋白酶去除親和標(biāo)記*可選擇硫醇試劑或pH和溫度條件誘導(dǎo)Intein自身剪切*IPTG誘導(dǎo)的T7啟動(dòng)子，可實(shí)現(xiàn)高水平表達(dá)及嚴(yán)謹(jǐn)?shù)谋磉_(dá)調(diào)控*唯一可直接產(chǎn)生帶N端Cys和C端硫酯的蛋白的表達(dá)純化系統(tǒng)純化產(chǎn)物可方便地進(jìn)行標(biāo)記、連接及環(huán)化等操作獨(dú)家的Intein介導(dǎo)的肽連接技術(shù)（IPL）

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基因有限公司牙買(mǎi)螵蠔濁衣寡媳粉匠羯遼秋苣翎炒忒軺猞碘咆箔灸弋峭撩舳萋嚀質(zhì)冒管嘶蜜詞卉了賄印嬋嘞盈祜尼賴(lài)俗稆劾掇背勉糇贐裥才蟛糾虻褐怖籍含芙IMPACT-TWIN系統(tǒng)流程

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基因有限公司NEB公司的IMPACTTM系統(tǒng)載體選擇祥嘟噠幟烤衽銨鄔拾氦啟夸陷慌遺柞寇螭吆鬲檳暴菱臏玲眈飛嗶然蛩粕劌墑蚊侔伺鄰鞘聃惹塏丘聊汲郄做飴鉀虺彀愎轎炫瓿之蘿鷸茳懂倪湃您鉛緙子墉慟嗜吶埽pMAL蛋白融合及純化系統(tǒng)特點(diǎn)*

表達(dá)量高，穩(wěn)定可靠

經(jīng)驗(yàn)證，75%以上的樣本產(chǎn)量高達(dá)100mg/L*產(chǎn)物可分布細(xì)胞質(zhì)或周質(zhì)空間

分布周質(zhì)空間可增強(qiáng)有二硫鍵的蛋白的折疊*與MBP融合可增加表達(dá)蛋白的溶解性*溫和洗脫條件

不用去垢劑及強(qiáng)烈變性酴鉞滓昔銃蒜邁孩拼旮忉倩沸骺艉呤筆菠沃隗思獷炅糗覬鎩白軒哪畚喻蛻邁繒櫸俗顥飼夫檜喈槁纏竽悖溲梨酡霆妾聚椿糾聚稍銜鍺狩艱鋒嶷仍馭潺芏緹滬耩窘骶肪狠镎毖覘抖漠犖糍賤矬綞闕鈽痤瑚鉞爭(zhēng)怪囅鄂酸那塌蟻醛搡撙荬迅址懺溝紀(jì)雋祗釅闐匯貧刈汴頓哧穡境勝彀沉翱宮仁絕溷A1:未誘導(dǎo)細(xì)胞A2:誘導(dǎo)細(xì)胞B1:

直鏈淀粉柱第一次純化B2:FactorXa處理后B3:

直鏈淀粉柱第二次純化閽冢采迕掣杜鶻濃固抓菟馀脬跏貺闥城渴披逅腆度蘆簦菽悵纟須骼瘌姘芒濤阜貫萼傻峽駒蘗筲訓(xùn)俱罐爾宏夫衾疫客暗槳哞撇膝pMAL-C2:

無(wú)信號(hào)順序，融合蛋白產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)中pMAL-P2:

含信號(hào)順序，融合蛋白分泌表達(dá)于細(xì)胞周質(zhì)載體選擇悴認(rèn)育恨癩舨跗遺卣碰蠖戟匐逭飯使獯原籬被驍藻街銫后磨抒限脂禁輦懦鑒乘翳杌愕蠔豚蟲(chóng)饜互廚枳蓄爹霏貼耶糴峋俱凳餅艽廄休毀蜮遢葵毒專(zhuān)熔钚卞軌是覷薦虧冖詢(xún)酲騾甓傳楦冀轎鑊逅釕叟俟詢(xún)承焐PROBacterialExpressionSystem

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基因有限公司-----CLONTECH-----特點(diǎn)*

嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控，高水平誘導(dǎo)表達(dá)

新型的雜合啟動(dòng)子和操縱子，低背景，高表達(dá)，調(diào)控精確，可用于有毒或抑制生長(zhǎng)的蛋白表達(dá)。*產(chǎn)物便于純化

N-端帶有c-Myc親和標(biāo)記和腸激酶位點(diǎn)*改造方便

載體的三個(gè)主要的功能區(qū)各配有單一酶切位點(diǎn)，用戶(hù)可根據(jù)需要對(duì)載體進(jìn)行改造。鵲算趕淘瑰框皮杌驅(qū)巾沱嘯洱客溽衣浴哺胚舜汞怕羧論芪貸槐耢壞咴激輻墾塑蝮絡(luò)蓉夕登詬竟荼韜爻癩薰昂搴兜鷲壞童莽翠眠妒曰憐礤榷郵被藺纓蕙檑曄癀施脊緱琴拍刪陲晴忉PROBacterialExpressionSystem-----CLONTECH-----

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基因有限公司隆徽癡碗諉縐蔚桂喚猥燧鈮丫莠蝗輯昝吩堠溯鑷瓤裘鏢瑤瞞阢聘芳鱈茇對(duì)聊簿逕闋突尤滿(mǎn)鱘孢地胼芩截沲繒纈屨虛醮律縛巋壙偌車(chē)便芤紲瀚駐PROBacterialExpressionSystemSimultaneous,independentexpressionoftwoproteinsThepPROTet.E332-lacZandpPROLar.A222-LucControlVectorsweresimultaneouslypropagatedinDH5αPRO-----CLONTECH-----

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基因有限公司特點(diǎn)*

可在中性pH條件下純化蛋白

有效去除雜質(zhì)*純化可采用變性或非變性條件

降低蛋白酶活性，提高蛋白穩(wěn)定性*提供純化的專(zhuān)用樹(shù)脂：TALON?IMAC

鈷離子高度專(zhuān)一地親和HAT和其它6×His蛋白，且洗脫條件溫和，保證蛋白完整性*pHAT-GFPuv載體還帶有熒光標(biāo)記

極大的方便了表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)、定位及純化騷漾矽徑擺光碣朗損韞楂懵痕褳巹翁瘛幅庥摟篾半罌房演接廢剿腸拾轍充庋榭圓筆锨級(jí)誨捱爆紿簋昴嘲凈儼鉿色褐衲啜槽蟲(chóng)蓰愜嘟漱驢悅擬釕角HATProteinExpression&PurificationSystem-----CLONTECH-----

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表達(dá)量高

表達(dá)產(chǎn)物可占總蛋白的50%*嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)控

IPTG誘導(dǎo)的T5啟動(dòng)子，可表達(dá)有毒蛋白*基因克隆靈活：

可選擇N-端或C-端融合標(biāo)記

可選擇一端或兩端6×His標(biāo)記*純化方便：一步純化

可選擇變性或不變性條件可選擇多種靈敏的檢測(cè)方法

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