惡性血液病33例細胞遺傳學分析【摘要】目的：分析惡性血液病細遺傳學改變。方法：選擇臨床確診惡性血液病33例，采用直接法和培養法進行染及體標制備，及顯著技術進行核型分析。結果：33例中12例發現明顯異常染色體核型，16例為正常核型。結論：染色體檢查在惡性血液病診斷分型中具有重要價值。

【關鍵詞】惡性血液病；染色體；細胞遺傳學

1資料與方法

一般資料33例中男19例,女14例；年齡27～90歲，中位年齡57歲；病程10天～8年，平均年。所有患者均經血常規、骨髓細胞學檢查，急性白血病行白血病免疫表型測定，骨髓增殖性疾病和骨髓增生異常綜合征、腫瘤骨髓轉移行骨髓活檢，多發性骨髓瘤行免疫全套、骨骼平片及心電圖檢查等，按陳灝珠等[1]主編的《實用內科學》的診斷標準確診。33例中急性非淋巴細胞白血病8例，其中M11例，M22例，M32例，M41例，M52例；急性淋巴細胞白血病1例，慢性粒細胞白血病8例，慢性淋巴細胞白血病1例，多發性骨髓瘤4例，漿細胞白血病1例，骨髓增生異常綜合征6例，骨髓纖維化1例，真性紅細胞增多癥1例,骨髓轉移性惡性腫瘤2例。

1．2儀器超凈臺，雙目顯微鏡，電熱恒溫培養箱，臺式自動平衡離心機，-20℃冰箱，不銹鋼正壓濾器，精密數顯酸度計等。

1．3細胞遺傳學分析染色體標本制備采用直接法和培養法。用%肝素濕潤之針筒抽取骨髓2ml左右,注入取樣瓶,在超凈室內抽取標本計數有核細胞,按×106/ml無菌接種于1640培養基內。37℃恒溫箱放置16小時。加入長春花堿或秋水仙胺應用液使終濃度為μg/ml,37℃溫箱1小時。離心：1000rpm×10min，棄上清液。加入預溫至37℃的mol/L氯化鉀液8ml,輕輕打勻,置37℃30min。加入1ml固定液輕輕打勻,離心1000rpm×10min。離心后3次固定。再離心1000rpm×10min，棄上清,加適量固定液配成細胞懸液,置4℃保存;氣干法制片后，10%Giemsa染色后鏡檢。全部標本用熱變性姬姆薩R顯帶技術進行核型分析。核型異常的描述按人類細胞遺傳學國際命名體制[ISCN]。

2結果

33例中17例發現明顯的異常染色體核型，16例為正常核型，見表1。CML8例中有7例出現典型Ph易位即t(9,22)，1例出現2Ph染色體。MM4例中有3例分別累及x、1號、5號、10號、13號、14號、21號、22號染色體的增加、缺失或易位。AL9例中有3例初發白血病出現異常染色體。1例MDS轉變為ANLL出現染色體的增加；1例M5出現3號、11號、13號、19號染色體缺失、增加及超3倍體易見；1例ALL出現Ph染色體。2例M2、2例M3、1例M4、1例M5處于完全緩解期未發現異常染色體。MDS6例中有1例RAEB出現10號染色體缺失。骨髓轉移性腫瘤2例出現1號、9號、14號、19號染色體增加。

3討論

正常人的體細胞染色體數目為46條，并有一定的形態和結構。染色體異常是指染色體的數目不正常和結構畸變，如染色體斷裂、缺失、倒位、易位等。惡性血液病的發生與染色體異常密切相關。隨著細胞遺傳學研究的不斷進展，染色體分析在CML、AL、MDS、MM等診治中起著重要作用。盡管大多數CML只需臨床表現和血液學檢查即可診斷，但有時與類白血病反應及其它骨髓腫瘤鑒別非常困難，Ph染色體的發現使CML診斷更準確。謝新報道CML患者95%為Ph且在臨床血液學已經緩解時Ph染色體仍持續存在。CML急變時除Ph染色體外，70%的病例常出現額外的染色體改變，最多見的改變為2Ph，+8和i(17q)。本組8例CML中5例處于血液學緩解期，均Ph；3例急變中2例Ph，1例為2Ph。

大約50%～93%的ANLL和90%ALL有克隆性染色體異常，60%ANLL和66%ALL屬于特異性染色體重排，不僅在ANLL和ALL之間明顯有別，而且在它們的各自亞型間也互不相同，因此成為白血病可靠分型標志。薛永權等報道72%M3有t(15;17),50%M2有t(8;21),71%M4EO有inv(16)。ANLL還有10余種和白血病FAB亞型不相關的染色體異常，主要為數目異常：+8、-5、7q-,5q-,-Y、+11、+13、+21、9q-、i(17q)、20q-、+22等。ANLL的染色體異常于病情緩解時消失，復發時又再現。本組9例AL中6例處于血液學緩解期，未發現染色體異常，1例MDS轉變為ANLL表現為47,xx,+M(?+16)，1例M5超3倍體易見，1例ALL出現Ph染色體。

MDS克隆性染色體畸變可見于40%～70%的原發性MDS和95%左右的治療相關性MDS[3，4]。MDS染色體畸變類型十分復雜，主要以染色體缺失和數目異常為主，特別是+8、-7/del(7q)、del(5q)、del(20q)和-Y這5種最常見，而染色體易位則較少見。本組6例MDS中僅檢出1例MDS有染色體異常，表現為10號染色體缺失，故認為與MDS分型有關，發現MDS染色體異常檢出率低。

文獻報道MM初診時染色體異常克隆的檢出率為18%～35%，疾病進展期的檢出率40%～60%。MM常涉及多條染色體的數目和結構異常，異常克隆多以超二倍體和亞二倍體形式存在，整二倍體很少見，最具特征的數目改變為出現三體或單體染色體，以三體

[1]陳灝珠，主編.實用內科學[M].第11版.北京:人民衛生出版社,2001：2095-2199.

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Debes-MarumCS,De