關于微量移液器的使用第1頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三第一部分

分子生物學實驗課要求

1，課前預習：預習實驗原理、步驟，思考可能的實驗結果；2，不無故曠課，不遲到早退；3，保持課堂安靜；4，中途不隨意離開教室；5，保管好各自實驗器材，實驗結束仔細檢查，遺失要及時報告；6，嚴格按照老師的要求完成實驗；7，認真完成實驗報告；8，成績：40%平時成績（預習，操作，實驗報告等），30%操作考試，30%筆試。第2頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三第二部分

微量移液器的使用根據取用溶液體積選用適當量程的微量移液器P20

2~20P200

21~200P1000

201~1,000第3頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三一個完整的移液過程包括：容量設定安裝移液頭預洗移液頭吸液排液卸去移液頭每一個步驟都要遵循操作規范。第4頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三容量設定從大值調整到小值時，剛好即可。從小值調整到大值時，需要調超過三分之一圈后再返回，這是因為計數器里面有一定的空隙，需要彌補。不要將按鈕旋出量程，這將導致移液器損壞。吸液頭安裝正確的安裝方法是：把白套筒頂端插入吸液頭，在輕輕用力下壓的同時，把移液器按逆時針方向旋轉180度。切記用力不能過猛，更不能采取剁吸液頭的方法來進行安裝，那樣做會對移液器造成不必要的損傷。第5頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三預洗吸液頭安裝了新的吸液頭或增大了容量值以后，應把需要轉移的液體吸取、排放兩到三次。這樣做是為了讓吸液頭內壁形成一道同質液膜，確保移液工作的精度和準度，使移液過程具有重現性。其次，在吸取有機溶劑或高揮發液體時，揮發性氣體會在白套筒室內形成負壓，從而產生漏液的情況，這時就需要我們預洗四到六次，讓白套筒室內的氣體達到飽和，負壓就會自動消失。第6頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三吸液先將移液器排放按鈕按至第一停點，再將吸液頭垂直浸入液面。盡量避免吸液頭浸入液面過深，以免液壓對吸液的精確度造成影響。同時可以避免在吸取粘稠液體時在吸液頭表面粘上液體影響吸取精度。松開移液器排放按鈕要平穩，切記不能過快，以免導致液體吸入移液器內部。第7頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三排液排液時，吸液頭緊貼容器壁，先將排放按鈕按至第一停點，略作停頓以后，再按至第二停點，這樣做可以確保吸液頭內無殘留液體。第8頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三卸掉吸液頭一般用力下按吸液頭推出器即可卸掉吸液頭。如吸液頭安裝過緊，則可用手卸除。將吸液頭丟棄到合適的廢物收集器中。

7.如不使用，將移液器調到最大量程。第9頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三反向移液法在轉移高粘度液體、生物活性液體、易起泡液體或極微量液體時，很容易導致體積誤差較大。為了提高移液準確性，建議采取反向移液法。按下按鈕至第二停點，將吸液嘴沒入液面下，輕緩松開按鈕回原點。將吸液頭在容器壁上停靠一下，以去除多余液體。將吸液頭緊貼容器壁，輕按按鈕至第一停點，排出液體。繼續按住按鈕，將留在吸液嘴中未被轉移的多余液體返回原來容器或隨吸液頭丟棄。第10頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三常見的錯誤操作

采取剁吸液頭的方法來進行安裝吸液頭。直接按到第二停點吸液。吸液時，移液器本身傾斜，導致移液不準確。吸液或排液時速度太快。排液時未按到第二停點，吸液頭中有殘液。平放帶有殘余液體吸液頭的移液器(應將移液器掛在移液器架上)。用大量程的移液器移取小體積樣品(應該選擇合適量程范圍的移液器)。使用丙酮或強腐蝕性的液體清洗移液器。不經常檢查移液器工作狀態。第11頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三檢查移液器工作狀態

測漏吸取滿量程的純凈水，將吸液頭朝下懸垂20秒，觀察是否有液體下滴。如果有，說明移液器出現了漏氣的情況。查找故障原因首先，檢查吸液頭安裝是否到位。檢查白套筒的端口部份（即白套筒與吸液頭接觸的部份）是否有刮痕。再檢查白套筒與手柄之間的連接螺帽是否松動。按動排放按鈕，感覺是否順暢，聽是否有噪音。觀察排放桿是否有彎曲。旋轉調節按鈕，觀察計數器的讀數。如果上述情況正常，說明密封圈或活塞組件有損壞，需要修理。第12頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三檢查移液器工作狀態

檢查吸量準確性吸取一定量的純凈水到微量離心管中，通過分析天平稱量確定移液器的準確性。如移液器吸量不準確，應及時請技術人員校正。第13頁，講稿共15頁，2023年5月2日，星期三參考書：《精編分子生物學實驗指南》[美]F.奧斯伯等編，顏子穎等譯請預