（優選）分光光度法在藥品中應用當前第1頁\共有34頁\編于星期四\20點1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計紫外－可見分光光度法在藥檢中應用content概述當前第2頁\共有34頁\編于星期四\20點一.概述：分光光度法是通過測定物質在某些特定波長處或一定范圍內的吸光度或發光強度，對物質進行定性和定量的分析方法。紫外-可見分光光度法具有操作簡便快速、專屬性和靈敏度高等優點。因此在藥品的分析檢驗中被廣泛采用。在各國藥典中藥品的理化常數、鑒別、檢查和含量測定等各個項目中都能見到紫外-可見分光光度法的應用實例。當前第3頁\共有34頁\編于星期四\20點一.概述：吸收光譜：發射連續光譜的光源（如氘燈和鎢絲燈）發出的光通過透明物質（固體、液體或氣體）后，一些波長的單色光成分被該物質選擇吸收，在原來的連續光譜上出現若干條暗線或暗帶，這種光譜叫做吸收光譜。當前第4頁\共有34頁\編于星期四\20點1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計紫外－可見分光光度法在藥檢中應用content概述當前第5頁\共有34頁\編于星期四\20點二.分光光度法的基本原理在紫外和可見光區，靈敏度和精密度較高，一般每1ml溶液中含有幾微克（g）的物質即可測定，誤差約為1-2%，在此區域內，物質對光的吸收主要系分子中電子的能級躍遷所致，同時伴有分子的振動和轉動能級的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，選擇性不如紅外光區，故紫外-可見光區主要用于定量分析以及作為物理常數的測定。當前第6頁\共有34頁\編于星期四\20點紅外光區的靈敏度和精密度較低，一般需要數百微克（g）的供試品進行測定，此區域內，物質對光的吸收系由分子中振動和轉動能級的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強，特別是在7-15m（稱為“指紋區”），吸收峰很多，而且尖銳。除光學異構體外，不會遇到兩種不同的化學物質完全相同的紅外吸收光譜，故紅外區主要用于鑒別和分析物質的結構。當前第7頁\共有34頁\編于星期四\20點透光率（T）：單色光通過一物質的溶液時，透過光的強度（I）與入射光的強度（I0）之比。即：T=I/I0。吸光度（A）：透光率的負對數值.即:A=log1/T=-logT比耳-郎伯定律（Beer-Lambert’sLaw）：吸光度（A）與溶液的濃度（C）和光路長（L）是成正比例的。即：A=ECL當前第8頁\共有34頁\編于星期四\20點

比耳-郎伯定律適用范圍：1.溶液的濃度不能過高或過低，使測定結果的相對誤差最小的最佳透射率為T=37%左右。2.所用溶劑不得與測定物質有分子間締合，生成復合物、異構化或出現酸堿平衡。當前第9頁\共有34頁\編于星期四\20點1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計的使用紫外－可見分光光度法在藥檢中應用content概述當前第10頁\共有34頁\編于星期四\20點三.紫外-可見分光光度計的使用1.基本構造：穩壓電源光源波長選擇裝置樣品池檢測器記錄裝置當前第11頁\共有34頁\編于星期四\20點2.儀器的校正和檢定（1）波長的校正：由于溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經常會略有變動，因此除應定期對所用儀器進行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長。鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、 360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、 536.2nm與637.5nm的波長處有尖銳的吸收

峰，可作為波長校正用。當前第12頁\共有34頁\編于星期四\20點

取在120C干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規定的波長處測定吸光度并計算其吸收系數。（2）吸光度的準確度：波長（nm）235（最小）257（最大）313（最小）350（最大）吸收系數（E1%1cm）124.5144.048.6106.6許可范圍123.0-126.0142.8-146.247.0-50.3105.5-108.5當前第13頁\共有34頁\編于星期四\20點（3）雜散光的檢查：

按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規定的波長處測定透光率，應符合表中的規定。試劑濃度%（g/ml）波長（nm）透光率（%）碘化鈉1.00220<0.8亞硝酸鈉5.00340<0.8當前第14頁\共有34頁\編于星期四\20點3.紫外分光光度法對溶劑的要求

用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應滿足以下要求：波長 吸光度要求220nm-240nm 不得超過0.40241nm-250nm 不得超過0.20251nm-300nm 不得超過0.10300nm以上不得超過0.05當前第15頁\共有34頁\編于星期四\20點4.紫外分光光度法測定法測定時，除另有規定外，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規定的吸收峰波長2nm以內測試幾個點的吸光度，以核對供試品的吸收峰波長是否準確。應以吸光度最大的波長作為測定波長。儀器的狹縫波帶寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸光度會偏低。狹縫寬度的選擇，應以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增加為準。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應減去空白讀數，再計算含量。當前第16頁\共有34頁\編于星期四\20點1234分光光度法的基本原理紫外分光光度計的使用紫外－可見分光光度法在藥檢中應用content概述當前第17頁\共有34頁\編于星期四\20點四.紫外-可見分光光度法

在藥品檢驗中的應用藥典和藥品標準中應用紫外-可見分光光度法的項目有吸收系數、鑒別、顏色檢查、純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含量測定等等。當前第18頁\共有34頁\編于星期四\20點1.吸收系數：

藥品的吸收系數是藥品的理化特性常數，可作為藥品生產過程中精制純化的一種指標。對紫外區一定波長的光有特征吸收的藥物進行精制時，應進行到產品在其特定波長測定吸收系數達到一個穩定的最大值時為止，因此吸收系數同其它物理常數一樣，也可作為判斷藥品純度的依據。當前第19頁\共有34頁\編于星期四\20點2.鑒別：藥物對光輻射的吸收特點（即其吸收光譜）可與其它化學的或物理的方法配合作為鑒別的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線與標準品的吸收光譜互相核對。對于具有兩個以上最大吸收的藥物可以進一步簡化操作，無需費時作吸收光譜曲線，只要測出各最大吸收波長處的吸收度，求出這些吸收度的比值，測出它們相對位置的比值即可。當前第20頁\共有34頁\編于星期四\20點維生素B12的鑒別規定每1ml中含維生素B1225g的水溶液，照分光光度法測定，在278、361與550nm的波長處有最大吸收。

A361nm/A278nm應為1.70-1.88。

A361nm/A550nm應為3.15-3.45。當前第21頁\共有34頁\編于星期四\20點當前第22頁\共有34頁\編于星期四\20點3.純度檢查：若一種化合物對紫外光和可見光區的某一波段呈光學透明（即不吸收或幾乎不吸收），而不純雜質有吸收時，則該物質的生產精制應當進行到規定波長處的吸收系數降到最低時為止。有些藥物就以此作為雜質限度檢查的依據。此外，有些藥物的雜質是通過比色法與雜質對照品比較進行控制的。當前第23頁\共有34頁\編于星期四\20點檢查腎上腺素中的酮體：取腎上腺素，加0.1mol/L鹽酸溶液，制成每1ml中含2mg的溶液，照分光光度法，在310nm的波長處測定，吸光度不得過0.05。當前第24頁\共有34頁\編于星期四\20點當前第25頁\共有34頁\編于星期四\20點4.含量測定：藥典中含量測定方法可分為：（1）對照品比較法（2）吸收系數法（3）比色法當前第26頁\共有34頁\編于星期四\20點（1）對照品比較法：應用范圍：單一成分藥劑的測定。混合物或復方制劑，但其它成分在被測組分的測定波長沒有或幾乎沒有吸收當前第27頁\共有34頁\編于星期四\20點

測定要求分別配制供試品溶液和對照品溶液對照品溶液所含對照品的量應為供試品溶液中被測組分標示量的10%以內。所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應保持一致。當前第28頁\共有34頁\編于星期四\20點計算公式：Cs=Cr*As/Ar

Cs：供試品溶液的濃度

As：供試品溶液的吸光度

Cr：對照品溶液的濃度

Ar：對照品溶液的吸光度當前第29頁\共有34頁\編于星期四\20點（2）吸收系數法：應用范圍：單一成分藥劑的測定。混合物或復方制劑，但其它成分在被測組分的測定波長沒有或幾乎沒有吸收當前第30頁\共有34頁\編于星期四\20點測定要求：通常為測定最大吸收峰波長處的吸光度供試品溶液在測定波長處濃度與吸光度嚴格遵循比耳-郎伯定律，具有良好的線性關系。測定條件和操作應與測定吸收系數時完全一致。吸收系數是用標準物質分別在經過校正的不同型號分光光度計上進行多次測定求得的平均值。特別注意儀器的校正和檢定當前第31頁\共有34頁\編于星期四\20點計算公式：

A=ECL以《中國藥典》2000年版氯霉素含量測定為例:精密稱取氯霉素0.1009g，置100ml量瓶中，加乙醇10ml振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，在278nm波長處測定吸光度為0.596，按氯霉素(C11H12Cl2N2O5)吸收系數(E1%1cm)為298計算氯霉素含量。已知：A=0.596E=298L=1則：

C=A/(E*L)=0.596/(298*1)%=0.002%氯霉素含量=0.002%*10